本文選題：丙酸睪酮 + Finasteride��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：Tourette Syndrome(TS)是一常見的兒童神經(jīng)精神發(fā)育障礙疾病。TS患者表現(xiàn)不同的運(yùn)動(dòng)抽搐和聲音抽搐等癥狀。TS的發(fā)病可能與基因和環(huán)境因素有關(guān),但是確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)TS的男性患病率明顯高于女性,TS患兒體內(nèi)雄激素水平多高于健康兒童,應(yīng)用雄激素制劑加劇TS患者的抽搐癥狀,而使用雄激素受體拮抗劑-氟他胺,顯著緩解TS患者的癥狀,這些發(fā)現(xiàn)提示雄激素水平的紊亂可能在一定程度上參與了TS的發(fā)病。腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)大腦功能活動(dòng)起著重要的調(diào)控作用,神經(jīng)回路中神經(jīng)遞質(zhì)間的平衡是正常大腦活動(dòng)的保障。研究發(fā)現(xiàn)TS患者腦內(nèi)多巴胺(DA)水平升高,額葉皮質(zhì)多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)、多巴胺D1和D2受體增多;腦內(nèi)五羥色胺(5-HT)及腦脊液中5-HT代謝產(chǎn)物五羥吲哚乙酸(5-HIAA)水平低于健康人。動(dòng)作抽搐癥狀與腦脊液中的5-HT水平呈負(fù)相關(guān)。TS伴發(fā)強(qiáng)迫癥的成年患者腹側(cè)紋狀體多巴胺D2受體升高、中腦與尾殼核5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(SERT)升高。上述研究結(jié)果提示TS患者腦內(nèi)存在DA能和5-HT能神經(jīng)體系的功能障礙。Finasteride為II型5α還原酶抑制劑,抑制睪酮轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的雙氫睪酮,減少雙氫睪酮與其受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)。近年的臨床資料發(fā)現(xiàn),成年TS患者服用Finasteride后可顯著改善抽搐癥狀。TS抽搐癥狀的改善除了與Finasteride降低雄激素活性有關(guān)之外,還可能與其調(diào)控腦內(nèi)DA能神經(jīng)體系活動(dòng)進(jìn)而參與TS運(yùn)動(dòng)抽搐癥狀的調(diào)節(jié)有關(guān)。因此,Finasteride很可能成為治療DA功能活動(dòng)亢進(jìn)相關(guān)神經(jīng)精神發(fā)育障礙疾病的潛在藥物�；谏鲜霭l(fā)現(xiàn),推測(cè)發(fā)育早期及青春期抑制雙氫睪酮的產(chǎn)生可能會(huì)誘導(dǎo)腦內(nèi)相關(guān)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的改變,進(jìn)而導(dǎo)致相關(guān)行為的缺陷。為此,本研究通過早期給予大鼠雄激素制劑-丙酸睪酮(TP),分析腦內(nèi)相關(guān)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的改變,發(fā)現(xiàn)與雄激素相關(guān)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì);并在此基礎(chǔ)上,通過對(duì)發(fā)育早期及青春期大鼠給予雄激素轉(zhuǎn)化抑制劑Finasteride,分析其青春期神經(jīng)行為的變化,探討其神經(jīng)行為的變化是否與TP調(diào)控腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)變化有關(guān),為闡明與雄激素水平紊亂相關(guān)的神經(jīng)精神發(fā)育障礙疾病的治療提供一定的神經(jīng)生物學(xué)依據(jù)。第一部分大鼠發(fā)育早期丙酸睪酮處理誘導(dǎo)腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的改變目的:通過對(duì)發(fā)育早期大鼠給予TP,檢測(cè)腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量的改變,分析并發(fā)現(xiàn)與雄激素相關(guān)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)。方法:選用29只出生后第7天的健康雄性Wistar乳鼠,分為對(duì)照組和TP組。TP組大鼠自出生后第7天背部皮下注射TP,劑量為0.5 mg/只,每天一次,持續(xù)注射14天。對(duì)照組大鼠以同樣方法注射等體積芝麻油。實(shí)驗(yàn)大鼠分別在出生后第21天(離乳期)和第49天(青春期)斷頭取腦。分離額葉皮質(zhì)(Frontal Cortex)、尾殼核(CPu)、伏核(Acb)及海馬(Hip),利用液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS/MS)檢測(cè)上述部位多巴胺(DA)、二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、五羥色胺(5-HT)、五羥吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲腎上腺素(NE)、γ氨基丁酸(γ-GABA)、組織胺(His)、谷氨酸(Glu)的含量變化。結(jié)果:1額葉皮質(zhì)1.1 TP早期處理大鼠出生后21天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠所檢測(cè)的腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量均沒有顯著改變。1.2 TP早期處理大鼠出生后49天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠5-HT和5-HIAA的含量分別顯著增加了25%(P0.01)和26%(P0.05),其他神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。2尾殼核2.1 TP早期處理大鼠出生后21天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠DA的含量顯著增加了22%(P0.05),其他神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。2.2 TP早期處理大鼠出生后49天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠DA和HVA的含量分別顯著增加了20%(P0.05)和27%(P0.05),其他神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。3伏核3.1 TP早期處理大鼠出生后21天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠DA和5-HT的含量分別顯著增加了65%(P0.01)和23%(P0.05),其他神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。3.2 TP早期處理大鼠出生后49天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠DA和5-HT的含量分別顯著增加了22%(P0.05)和23%(P0.01),其他神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。4海馬4.1 TP早期處理大鼠出生后21天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠所檢測(cè)的腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量均沒有顯著改變。4.2 TP早期處理大鼠出生后49天腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量與對(duì)照組大鼠相比,TP組大鼠所檢測(cè)的腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)含量均沒有顯著改變。小結(jié):大鼠發(fā)育早期給予丙酸睪酮增加了離乳期及青春期DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物含量,提示增強(qiáng)了腦內(nèi)DA能和5-HT能神經(jīng)體系活動(dòng)。第二部分Finasteride早期處理對(duì)大鼠神經(jīng)行為及腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的影響目的:通過對(duì)發(fā)育早期大鼠給予雄激素轉(zhuǎn)化抑制劑Finasteride,觀察離乳期及青春期大鼠的行為變化,腦內(nèi)DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物含量變化,及DA能和5-HT能神經(jīng)體系變化。方法:選用70只出生后第7天的健康雄性Wistar乳鼠,分為對(duì)照組、Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組。后三組大鼠在出生后第7天于背部皮下分別按3 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg注射Finasteride至出生后第21天。對(duì)照組動(dòng)物以同樣方法注射等體積芝麻油。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在出生后第21天或第49天進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn),包括曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn)以及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后后斷頭取腦。分離額葉皮質(zhì)、CPu、Acb、Hip、黑質(zhì)(SN)、腹側(cè)背蓋區(qū)(VTA)和中縫背核(DR),利用LC-MS/MS檢測(cè)相關(guān)腦區(qū)DA、DOPAC、HVA、5-HT、5-HIAA、NE、γ-GABA、His、Glu的含量變化;應(yīng)用Real-Time q RT-PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡分別檢測(cè)相關(guān)腦區(qū)酪氨酸羥化酶(TH)及色氨酸羥化酶(TPH)的m RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)變化。結(jié)果:1 Finasteride對(duì)神經(jīng)行為的影響出生后21天及49天大鼠,與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠的曠場(chǎng)行為、糖水偏好行為、新環(huán)境進(jìn)食抑制行為和強(qiáng)迫游泳行為的參數(shù)均無顯著改變。2 Finasteride對(duì)腦內(nèi)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的影響2.1額葉皮質(zhì)出生后21天及49天大鼠,與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)均沒有顯著改變。2.2尾殼核出生后21天及49天大鼠,與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)均沒有顯著改變。2.3伏核2.3.1出生后21天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組大鼠HVA含量顯著降低28%(P0.05);Fin-25組和Fin-50組大鼠5-HIAA含量分別顯著降低19%(P0.05)和17%(P0.05)。其他所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)與對(duì)照組大鼠相比沒有顯著改變。2.3.2出生后49天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)均沒有顯著改變。2.4海馬2.4.1出生后21天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)均沒有顯著改變。2.4.2出生后49天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠DA含量分別顯著降低28%(P0.05)和25%(P0.05)。其他所檢測(cè)的神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)沒有顯著改變。3 Finasteride對(duì)腦內(nèi)TH及TPH m RNA表達(dá)的影響3.1出生后21天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠在黑質(zhì)、腹側(cè)背蓋區(qū)、中縫背核的TH及TPH m RNA表達(dá)水平均沒有顯著改變。3.2出生后49天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠黑質(zhì)、腹側(cè)背蓋區(qū)和中縫背核的TH及TPH m RNA表達(dá)水平均沒有顯著改變。4 Finasteride對(duì)腦內(nèi)TH及TPH蛋白質(zhì)表達(dá)的影響4.1出生后21天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠在尾殼核、伏核、黑質(zhì)、腹側(cè)背蓋區(qū)和中縫背核的TH及TPH的蛋白質(zhì)表達(dá)水平均沒有顯著改變。4.2出生后49天大鼠與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠在尾殼核、伏核、黑質(zhì)、腹側(cè)背蓋區(qū)和中縫背核的TH及TPH的蛋白質(zhì)表達(dá)水平均沒有顯著改變。小結(jié):大鼠發(fā)育早期Finasteride處理未顯著改變其離乳期及青春期的運(yùn)動(dòng)、探索及抑郁行為參數(shù);除個(gè)別腦區(qū)DA能和5-HT能系統(tǒng)的部分參數(shù)改變,其他檢測(cè)指標(biāo)未出現(xiàn)顯著改變。第三部分Finasteride對(duì)青春期雄性大鼠的神經(jīng)行為及腦內(nèi)DA能和5-HT能神經(jīng)體系的影響目的:通過給予青春期大鼠雄激素轉(zhuǎn)化抑制劑Finasteride,觀察其在青春期自發(fā)運(yùn)動(dòng)、探索及抑郁行為參數(shù)變化;分析與之相關(guān)的DA能和5-HT能神經(jīng)體系變化,探討兩者之間的聯(lián)系。方法:選用28只出生后第35天的健康雄性Wistar大鼠,分為對(duì)照組、Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組。后三組大鼠在出生后第35天于背部皮下分別按3 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg注射Finasteride至出生后第49天。對(duì)照組動(dòng)物以同樣方法注射等體積芝麻油。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在出生后第49天進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn),包括糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭取腦。分離額葉皮質(zhì)、CPu、Acb、Hip、SN、VTA和DR,利用LC-MS/MS檢測(cè)相關(guān)腦區(qū)DA、DOPAC、HVA、5-HT及5-HIAA的含量變化;應(yīng)用Real-Time q RT-PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)相關(guān)腦區(qū)TH和TPH在m RNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化。結(jié)果:1行為學(xué)1.1糖水偏好行為與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠的糖水?dāng)z入量分別顯著減少36%(P0.01)和39%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠的糖水?dāng)z入量分別顯著減少35%(P0.01)和38%(P0.01)。1.2曠場(chǎng)行為1.2.1探索行為與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠的移動(dòng)聞嗅(Walking)、聞嗅(Sniffing)、斜墻直立(Climbing)次數(shù)分別顯著下降31%(P0.01)和58%(P0.01)、38%(P0.01)和64%(P0.01)、42%(P0.05)和68%(P0.01);與對(duì)照組大鼠相比,Fin-50組大鼠未斜墻直立(Rearing)次數(shù)顯著下降63%(P0.01);Fin-3組和Fin-25組大鼠與對(duì)照組大鼠比較沒有顯著差異。1.2.2運(yùn)動(dòng)行為與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠的垂直運(yùn)動(dòng)(Vertical Activity)和水平運(yùn)動(dòng)(Horizontal Activity)次數(shù)分別顯著下降40%(P0.05)和66%(P0.01)及34%(P0.01)和56%(P0.01);與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠總路徑(Total path length)分別顯著減少13%(P0.05)、33%(P0.01)和54%(P0.01)。2多巴胺和五羥色胺能神經(jīng)體系2.1多巴胺和五羥色胺及其代謝產(chǎn)物含量額葉皮質(zhì):與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠DA含量分別顯著下降35%(P0.01)和59%(P0.01);Fin-50組大鼠5-HT含量分別顯著下降58%(P0.01);Fin-25組和Fin-50組大鼠5-HIAA含量分別顯著下降28%(P0.05)和53%(P0.01)。尾殼核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組DA含量分別顯著下降35%(P0.05)和55%(P0.01)、DOPAC含量分別顯著下降23%(P0.05)和45%(P0.01)、HVA含量分別顯著下降23%(P0.05)和51%(P0.01);Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組5-HT含量分別顯著下降27%(P0.05)、37%(P0.01)和64%(P0.01);Fin-25組和Fin-50組5-HIAA含量分別顯著下降26%(P0.01)和49%(P0.01)。伏核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠DA含量分別顯著下降了34%(P0.05)和57%(P0.01)、DOPAC含量分別顯著下降23%(P0.05)和38%(P0.01);Fin-50組大鼠HVA含量顯著下降50%(P0.01);Fin-25組和Fin-50組5-HT大鼠含量分別顯著下降25%(P0.01)和48%(P0.01);Fin-50組大鼠5-HIAA含量顯著下降52%(P0.01)。海馬:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組DA含量分別顯著下降34%(P0.05)和63%(P0.01)、5-HT含量分別顯著下降26%(P0.05)和50%(P0.01)、5-HIAA含量分別顯著下降62%(P0.01)和72%(P0.01)。2.2 TH及TPH m RNA表達(dá)黑質(zhì):與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組TH m RNA的表達(dá)水平分別顯著降低33%(P0.01)和37%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH m RNA的表達(dá)水平分別顯著降低27%(P0.01)和31%(P0.01)。腹側(cè)背蓋區(qū):與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組TH m RNA的表達(dá)水平分別顯著降低35%(P0.01)和42%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH m RNA的表達(dá)水平分別顯著降低32%(P0.01)和39%(P0.01)。中縫背核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組TPH m RNA的表達(dá)水平分別顯著降低20%(P0.05)和37%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-50組大鼠TPH m RNA的表達(dá)水平顯著降低28%(P0.01)。2.3 TH及TPH蛋白質(zhì)表達(dá)尾殼核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-3組、Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低32%(P0.01)、66%(P0.01)和84%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低49%(P0.01)和76%(P0.01)。與Fin-25組大鼠相比,Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低52%(P0.01)。伏核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低65%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低60%(P0.01)。與Fin-25組大鼠相比,Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低49%(P0.01)。黑質(zhì):與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低40%(P0.01)和57%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低40%(P0.01)和57%(P0.01)。腹側(cè)背蓋區(qū):與對(duì)照組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低45%(P0.01)和64%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-25組和Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平分別顯著降低32%(P0.05)和56%(P0.01)。與Fin-25組大鼠相比,Fin-50組大鼠TH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低34%(P0.05)。中縫背核:與對(duì)照組大鼠相比,Fin-50組大鼠TPH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低48%(P0.01)。與Fin-3組大鼠相比,Fin-50組大鼠TPH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低48%(P0.01)。與Fin-25組大鼠相比,Fin-50組大鼠TPH蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低32%(P0.05)。小結(jié):Finasteride誘導(dǎo)自發(fā)運(yùn)動(dòng)和探索行為缺陷以及抑郁發(fā)生;降低了DA與5-HT及其代謝產(chǎn)物含量、DA及5-HT合成酶TH與TPH表達(dá),提示腦內(nèi)DA能和5-HT能神經(jīng)體系活動(dòng)下降。結(jié)論:1大鼠發(fā)育早期雄激素處理主要增強(qiáng)青春期腦內(nèi)DA能和5-HT能神經(jīng)體系活動(dòng)。2 Finasteride誘導(dǎo)自發(fā)運(yùn)動(dòng)和探索行為缺陷以及抑郁發(fā)生;降低了DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物含量、降低了DA、5-HT合成酶TH與TPH表達(dá),提示腦內(nèi)DA能和5-HT能神經(jīng)體系活動(dòng)下降。3 Finasteride對(duì)青春期大鼠的自發(fā)運(yùn)動(dòng)、探索和抑郁行為改變可能與其對(duì)DA能和5-HT能神經(jīng)體系的調(diào)控有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R749.94

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：1733803