本文關(guān)鍵詞： 先天性心臟病 22q11.2 TBX1 拷貝數(shù)變異 法洛四聯(lián)癥　出處：《中南大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：22q11.2區(qū)域因存在低拷貝重復(fù)序列(Low copy repeats, LCRs),易發(fā)生染色體的不等交換重排,引起基因拷貝數(shù)變異(Copy Number Variants, CNVs).以LCR22-4為界分為近端和遠端CNVs,其中LCR22-4近端微缺失是目前已知的導(dǎo)致心臟畸形發(fā)生最常見的遺傳因素之一,其在新生兒中的發(fā)病率約為1/4000。22q11.2區(qū)域CNVs引起包括心臟畸形在內(nèi)的異常表型發(fā)生的根本原因是這個區(qū)域以TBX1為主的基因劑量的改變。22q11.2CNVs相關(guān)綜合征表型差異性大,患兒可能僅表現(xiàn)出心臟畸形,也可能同時合并有其他畸形,如肺動脈發(fā)育不良、免疫缺陷、喂養(yǎng)困難、精神行為障礙等。因此對于合并有22q11.2區(qū)域CNVs的先天性心臟病兒,應(yīng)及時發(fā)現(xiàn)其他畸形和染色體異常,評估手術(shù)風(fēng)險。國內(nèi)也有先天性心臟病患兒中22q11.2近端微缺失的研究,但樣本量較小,且檢測手段多用耗時費力的熒光原位雜交技術(shù)。本研究將篩查位點定位于TBXl,利用熒光實時定量PCR技術(shù),對642名先天性心臟病患兒進行22q11.2近端CNVs的篩查,再利用Array-SNP高通量測序技術(shù)對定量PCR篩查陽性患兒進行確診,并獲得具體CNVs數(shù)據(jù)。本研究可獲得這種染色體異常在各種先天性心臟病患兒中的分布頻率,并探討基因型和表型的關(guān)系；同時比較了合并有22q11.2近端CNVs的法洛四聯(lián)癥患兒與非綜合征型(無CNVs)法洛四聯(lián)癥患兒術(shù)前評估指標(biāo)的差異,探討了22q11.2近端CNVs的基因型對一期根治術(shù)治療法洛四聯(lián)癥術(shù)后早期療效的影響。 第一章先天性心臟病患兒中22q11.2近端CNVs分布頻率的研究及表型分析 目的：研究先天性心臟病患兒中22q11.2區(qū)域近端CNVs的分布頻率,試圖發(fā)現(xiàn)22q11.2近端區(qū)域不同CNVs所致表型差異,探討基因型與表型關(guān)系。 研究對象：2012年4月到2012年12月就診于中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院心胸外科的先天性心臟病患兒。其中,男性340名,女性302名。 研究方法：利用美國QIAGEN公司gDNA提取試劑盒,按照其標(biāo)準程序?qū)?42例患兒進行外周靜脈血gDNA提取。利用美國Applied Biosystems公司生產(chǎn)的ABI Stepone定量PCR儀實行SYBR(?) Green Ⅰ嵌合熒光法實時定量PCR,對642例患兒進行22q11.2近端CNVs的篩查。對篩查陽性患者利用美國illumina公司生產(chǎn)的Array-SNP高通量芯片(Human660W-Quad、Human Omni1-quad),進行全基因組CNVs分析,獲得具體CNVs數(shù)據(jù)。 結(jié)果：642例先天性心臟病患兒中,共發(fā)現(xiàn)了52例22q11.2近端微缺失患兒(8.1%),其中43例為LCR22-2到LCR22-4區(qū)間,大小為3Mb的缺失,9例為LCR22-2到LCR22-3a區(qū)間,大小為1.5Mb的缺失。另外也發(fā)現(xiàn)了5例微重復(fù)患者(0.8%),其重復(fù)片段為LCR22-2到LCR22-4區(qū)間,大小為3Mb的重復(fù)。出現(xiàn)22q11.2微缺失比例由高到低的先天性心臟病依次為共同動脈干(2/5,40%)、法洛四聯(lián)癥合并肺動脈閉鎖、動脈導(dǎo)管未閉(3/8,37.5%)、主動脈弓中斷(1/3,33.3%)、法洛四聯(lián)癥(16/53,30.2%)、部分性肺靜脈畸形引流(1/5,20%)、肺動脈異常起源(1/5,20%)、肺動脈閉鎖合并室間隔缺損(1/7,14.3%)、右室雙出口(1/15,6.7%)、室間隔缺損(26/415,6.3%)。9例1.5Mb大小的微缺失的患兒為：4例(44.4%)法洛四聯(lián)癥,4例(44.4%)室間隔缺損,1例(11.1%)共同動脈干。5例微重復(fù)患兒中3例為TOF,1例為左心發(fā)育不良綜合征,1例為主動脈弓中斷。 結(jié)論：1.利用定位于TBX1基因的探針,借助熒光實時定量PCR技術(shù),可對先天性心臟病患兒進行快速靈敏的22q11.2近端CNVs的篩查。 2.在先天性心臟病患兒中,22q11.2近端CNVs的發(fā)生率約為8.9%,其發(fā)生率較高的先天性心臟病依次為：共同動脈干、法洛四聯(lián)癥合并肺動脈瓣閉鎖及動脈導(dǎo)管未閉、主動脈弓中斷、法洛四聯(lián)癥。 3.22q11.2近端3Mb大小微缺失的患兒心臟畸形較1.5Mb缺失患兒更加多樣化。 第二章222q11.2近端CNVs基因型對法洛四聯(lián)癥根治術(shù)早期療效的影響 目的：比較合并22q11.2近端CNVs的TOF患兒,與非綜合征型(未發(fā)現(xiàn)CNVs)TOF患兒比較術(shù)前評估指標(biāo)的差異,并評估22q11.2近端CNVs的基因型對一期根治手術(shù)治療TOF近期療效的影響 研究對象：研究組：前期QPCR和Arrey-SNP發(fā)現(xiàn)的19例合并有22q11.2區(qū)域CNVs的TOF患兒,未包含TOF合并PA、PDA患兒。 對照組：排除其他基因異常導(dǎo)致的綜合征型疾病如：21、18-三體綜合征、Alagille綜合征導(dǎo)致的TOF患兒。比較術(shù)前評估指標(biāo)時,根據(jù)研究組年齡和體表面積選擇未發(fā)現(xiàn)CNVs的非綜合征型TOF患兒19名；評估22q11.2近端CNVs的基因型對一期根治手術(shù)治療TOF近期療效的影響時,選取30例行一期根治術(shù)的無22q11.2近端CNVs的患兒。 研究方法：統(tǒng)計研究組患兒、對照組患兒年齡(月齡)、性別、身高、體重、McGoon指數(shù)、左室舒張末期容積指數(shù)、術(shù)前四肢血樣飽和度、紅細胞壓積、手術(shù)方式、轉(zhuǎn)流時間、阻斷主動脈時間、術(shù)后右室/左室收縮壓比值、氣管插管時間、血管活性-正性肌力藥物評分、術(shù)后并發(fā)癥、ICU時間、是否死亡。采用t檢驗或秩和檢驗、卡方檢驗比較兩組各指標(biāo)的差異；多元逐步回歸分析22q11.2近端CNVs基因型對一期根治術(shù)后近期療效的獨立作用。 結(jié)果：在研究組和對照組患兒中,左室舒張末期容積指數(shù)、經(jīng)皮血氧飽和度、HCT差別無統(tǒng)計學(xué)意義,研究組患兒McGoon低于對照組(p0.05)。17例合并有22q11.2近端CNVs的TOF患兒行一期根治術(shù)治療,與對照組患兒進行比較,術(shù)中轉(zhuǎn)流時間長于對照組(95.35vs85.48,p=0.04), VIS評分高于對照組(10.91vs7.38,p=0.03),氣管插管時間長于對照組(82.58vs56.23,p=0.02), ICU時間長于對照組(138.47vs103.24,p=0.03)。 結(jié)論：1.合并有22q11.2近端CNVs的法洛四聯(lián)癥患兒肺動脈發(fā)育較非綜合征型(未發(fā)現(xiàn)CNVs)的法洛四聯(lián)癥患兒差。 2.22q11.2近端CNVs基因型影響法洛四聯(lián)癥根治術(shù)后早期療效,特別是導(dǎo)致ICU重癥監(jiān)護時間延長,VIS評分較高、機械通氣時間較長。
[Abstract]:Background : In the 22q11.2 region , there is a low copy number of repeated sequences , which leads to gene copy number variation ( CNVs ) . In this study , we investigated the distribution frequency of 22q11.2 proximal CNVs in children with congenital heart disease . Study and phenotype analysis of the frequency of CNVs in the proximal end of 22q11.2 in children with congenital heart disease Objective : To investigate the distribution frequency of proximal CNVs in 22q11.2 in children with congenital heart disease , and to find out the phenotypic difference caused by different CNVs in the proximal region of 22q11.2 . Object : From April 2012 to December 2012 , we visited the heart - chest surgery of children with congenital heart disease in Xiangya Hospital of Central South University . Among them , 340 males and 302 females were females . Methods : The peripheral venous blood gDNA was extracted from 642 children by using the gDNA extraction kit of QIANUS , USA . SYBR ( ? ) was carried out using ABI Stepone quantitative PCR instrument produced by Applied Biosystems , USA . Green 鈪，

本文編號：1546665