本文關(guān)鍵詞： 動(dòng)物模型 大鼠 營(yíng)養(yǎng)性肥胖 糖脂代謝 維生素D_3 動(dòng)物模型 大鼠 肥胖 肝細(xì)胞脂肪變性 CYP27A1 兒童 青少年 脂質(zhì)代謝 肥胖 超重 BMI-SDS 中國(guó) 兒童 青少年 25(OH)D 維生素D 超重 肥胖 糖脂代謝　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分兒童青少年糖脂代謝流行病學(xué)調(diào)查及預(yù)測(cè)代謝異常人體學(xué)測(cè)量指標(biāo)截?cái)嘀的康恼{(diào)查上海市9-15歲兒童青少年糖脂代謝指標(biāo),分析超重肥胖兒童糖脂代謝改變狀況,制定預(yù)測(cè)青少年血脂異常的體質(zhì)指數(shù)(body mass index, BMI)最佳截?cái)嘀�。方法分層整群隨機(jī)抽取上海15所中小學(xué)五年級(jí)-初中三年級(jí)9-15歲青少年,由學(xué)校保健老師進(jìn)行統(tǒng)一身高、體重測(cè)量,信息匯總后計(jì)算BMI,隨機(jī)抽取超重、肥胖青少年,及年齡匹配正常體重青少年,簽署知情同意書,分批召集至復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童保健科進(jìn)行體格測(cè)量、肥胖程度評(píng)估、糖脂代謝指標(biāo)檢測(cè)及肝臟B超檢查。數(shù)據(jù)以Epidata3.1錄入,使用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù),并繪制受試者工作特征曲線,以Youden指數(shù)最大數(shù)值所對(duì)應(yīng)BMI-SDS/BMI作為最佳截?cái)嘀怠＝Y(jié)果初步篩查10,423名青少年,其中1,320名(12.66%)為超重兒童,699名(6.71%)為肥胖兒童,8,404名為正常體重兒童。共538名青少年參加了體檢,其中283名為正常體重兒、115名為超重兒、140名為肥胖兒。三組間年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,腰圍標(biāo)準(zhǔn)差積分(waist circumstance standard deviation score, WC-SDS) (p0.001)、甘油三酯(triglyceride, TG) (p0.05)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol, HDL)(p0.01)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol, LDL) (p0.01)及空腹胰島素(p0.01)、C肽(p0.001)組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肥胖組總膽固醇高于正常體重組(4.44±0.76mmol/L vs.4.21±0.67mmol/L, p0.01)。超重組空腹血.糖平均值顯著高于正常體重組(4.94±0.42mmol/L vs.4.83±0.43mmol/L, p0.05)。三組間糖化血紅蛋白無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。男性青少年總膽固醇、TG、LDL、血糖隨BMI百分位上升而上升,HDL則下降；而女性青少年中無(wú)明顯趨勢(shì)變化,隨著BMI的增加,僅見(jiàn)HDL降低和TG上升。在男性青少年中,預(yù)測(cè)血脂異常的最佳體質(zhì)指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差積分(BMI-standard deviation score, BMI-SDS)截?cái)嘀禐?.22,BMI截?cái)嘀禐?1.67kg/m2.結(jié)論超重和肥胖青少年胰島素敏感性降低,伴隨血脂異常。在男性青少年中,當(dāng)BMI-SDS升高至1.22以上或BMI升高至21.67 kg/m2以上時(shí),血脂異常風(fēng)險(xiǎn)增加。第二部分兒童青少年維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況調(diào)查及其與糖脂代謝相關(guān)性研究目的調(diào)查上海市青少年維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況,通過(guò)運(yùn)動(dòng)、飲食調(diào)查問(wèn)卷,體格檢查及糖脂代謝指標(biāo)檢測(cè),分析維生素D與運(yùn)動(dòng)、飲食、體重及糖脂代謝指標(biāo)相關(guān)性。方法將第一部分調(diào)查的人群(n=538)中具有完整運(yùn)動(dòng)飲食調(diào)查問(wèn)卷、足夠血清樣本量進(jìn)行25-羥維生素D(25-hydroxyvitamin D,25(OH)D)檢測(cè)的人群441名納入本研究。調(diào)查問(wèn)卷由家長(zhǎng)和青少年合作填寫完成。凍存于-80℃的血清標(biāo)本融解后充分搖勻,以電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)25(OH)D。數(shù)據(jù)以Epidata3.1錄入,使用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù),分析不同性別、季節(jié)、年齡的25(OH)D水平,描述人群中維生素D缺乏的比例,采用單因素分析方法分析25(OH)D水平的影響因子,以多因素logistic回歸探究維生素D缺乏危險(xiǎn)因素。按性別分層比較不同25(OH)D水平人群的糖脂代謝指標(biāo),探討維生素D與各糖脂代謝指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果共納入研究對(duì)象441名,其中男性284名,女性157名；體檢月份處于冬季者為338名,夏季者為103名。人群平均25(OH)D水平為21.93±8.11ng/ml,男性青少年平均水平顯著高于女性青少年的水平(22.41±8.11ng/ml vs.18.97ng/ml (P25:15.49ng/ml,P75: 25.21ng/ml), p0.05)。研究人群總體維生素D缺乏率為42.40%,其中2.95%為嚴(yán)重缺乏；女性維生素D缺乏率顯著高于男性缺乏率(55.41% vs.39.79%,p0.01)。冬季體檢者25(OH)D平均值顯著低于夏季平均值(1959ng/ml vs.25.58±7.83ng/ml, p0.001)。性別(p=0.005)、年齡(p0.001)、BMI-SDS(p=0.003)、WC-SDS(p=0.005)、季節(jié)(p0.001)、脂肪肝患病情況(p=0.018)、牛奶攝入頻率(p=0.033)在維生素D充足組、不足組、缺乏組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。酸奶、蛋類、鐵劑、鈣劑及維生素補(bǔ)充劑攝入頻率在組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。將以上組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的變量納入logistic回歸,女性(OR=2.451,p=0.001)、大年齡(OR=1.285,p=0.011)和冬季(OR=1.957,p=0.038)是維生素D缺乏的高危因素。在男性中,25(OH)D與BMI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.304,p0.001),與腰圍和脂肪肝也呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為-0.320(p0.001)、-0.185(p=0.002),與HDL呈正相關(guān)r=0.293(p0.001)。在女性青少年中未發(fā)現(xiàn)該類相關(guān)性。結(jié)論青少年維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況欠佳,近一半青少年為維生素D缺乏,尤以女性嚴(yán)重。女性、年齡增加和冬季是維生素D缺乏的高危因素。在男性青少年中,維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況與BMI、腰圍及脂肪肝呈負(fù)相關(guān),與HDL呈正相關(guān)。第三部分肥胖SD大鼠糖脂代謝指標(biāo)及維生素D3干預(yù)效果研究目的通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)建立飲食誘導(dǎo)肥胖SD大鼠模型,分析肥胖大鼠(dietary-induced obesity, DIO)、對(duì)照組大鼠及肥胖抵抗(dietary-induced obesity-resist, DIO-R)大鼠間糖脂代謝指標(biāo)及血清25(OH)D水平。以不同劑量維生素D3灌胃探究其對(duì)體重、脂肪、血脂、血糖及胰島素等的影響。方法80只4周齡雄性SD大鼠以高脂肪、高熱量飼料喂養(yǎng),10只大鼠以普通飼料喂養(yǎng)作為對(duì)照組,8周后體重高于對(duì)照組平均體重20%以上者為肥胖,未達(dá)到該指標(biāo)者為肥胖抵抗大鼠。對(duì)照組大鼠、肥胖抵抗大鼠及肥胖大鼠各10只,禁食12小時(shí)后以10%水合氯醛腹腔注射麻醉,測(cè)量體重及體長(zhǎng),心腔取血分離血清,剝離兩側(cè)腎周及睪丸周圍脂肪稱重。血清以全自動(dòng)生化儀檢測(cè)TC、TG、HDL、LDL、血糖,以Elisa試劑盒檢測(cè)胰島素。將40只肥胖大鼠隨機(jī)分為4組,分別以維生素D3250IU/kg.d、500IU/kg.d、 1000IU/kg.d灌胃干預(yù)4周,對(duì)照組以橄欖油灌胃。干預(yù)完成后,禁食并測(cè)量、取血等。以SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析對(duì)照組、肥胖抵抗組及肥胖組間體重、Lee's指數(shù)、脂肪重量及糖脂代謝指標(biāo)的差異；以配對(duì)t檢驗(yàn)分析干預(yù)前后體重、代謝指標(biāo)等變化,不同劑量干預(yù)組間各指標(biāo)比較采用單因素方差分析,并進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果造模組與對(duì)照組喂養(yǎng)8周后,肥胖組平均體重、脂肪重量、Lee's指數(shù)均顯著高于對(duì)照組(456.50±12.51g vs.374.50±30.42g,p0.001；9.21±1.77g vs.17.45±3.36g,p0.001)；3.02±0.95 vs.3.15±0.05,p0.01)。肥胖抵抗組平均體重385.70±29.30g(p0.001),脂肪重量10.68±2.56g(p0.001),Lee's指數(shù)3.06±0.09(p0.05),均低于肥胖組,與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。糖脂代謝方面,三組間TG、胰島素、HDL未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；肥胖組TC、Glu、LDL均高于對(duì)照組(分別為TC：1.44±0.14mmol/L vs.1.25±0.18mmol/L p0.05; Glu:9.40±1.84mmol/L vs.4.90±0.7mmol/L,p0.001; LDL:0.74±0.04mmol/L vs. 0.73±0.03 mmol/L,p0.05)。肥胖抵抗組各指標(biāo)均與肥胖組接近,且高于對(duì)照組。經(jīng)線性回歸分析,血糖與體重(r=0.551,p=0.002)及Lee's指數(shù)(r=0.392,p=0.032)呈正相關(guān)。高脂飼料喂養(yǎng)的肥胖組與肥胖抵抗組血清25(OH)D均值顯著高于普通飼料喂養(yǎng)的對(duì)照組(24.24±1.29ng/ml、25.29±2.03ng/ml vs.12.53±1.29 ng/ml, p0.001)。維生素D3干預(yù)試驗(yàn)中,250IU/kg·d及500IU/kg·d干預(yù)組在干預(yù)1周后平均體重呈下降趨勢(shì),其中500IU/kg·d組在干預(yù)2周后平均體重低于1000IU/kg·d組(458.10±12.16gvs.471.90±16.04g,p=0.044),干預(yù)3周后,平均體重顯著低于對(duì)照組(446.00±24.53gvs.474.20±18.38g,p=0.009),干預(yù)4周后,四組間體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四組間干預(yù)前和干預(yù)后TC、TG、LDL、Glu、25(OH)D均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；500IU/kg·d組、1OOOIU/kg-d組及對(duì)照組干預(yù)后HDL水平顯著高于250IU/kg·d組；500IU/kg·d組干預(yù)后胰島素平均濃度低于250IU/kg·d組(p0.05),與另兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。配對(duì)t檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示,250IU/kg.d于預(yù)后,TG、HDL較干預(yù)前降低(p0.05,p0.01),而血糖及胰島素升高(p0.01,p0.05);500IU/kg·d干預(yù)后,TC、TG較干預(yù)前降低(p0.05),血糖升高(p0.01)；1000IU/kg.d干預(yù)組血糖升高(p0.01)；對(duì)照組,TC、TG、HDL均降低(p0.05),血糖升高(p0.01)。維生素D3干預(yù)組在干預(yù)后血清25(OH)D水平顯著升高(p0.001),250IU/kg·d組為47.70±4.92ng/ml,500IU/kg·d組為56.54±7.89ng/ml,1000IU/kg·d且為68.24±350ng/ml,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；橄欖油對(duì)照組干預(yù)前25(OH)D為28.40±1.64ng/ml,干預(yù)后為22.89±3.11ng/ml,呈顯著降低(p0.001)。結(jié)論高脂飲食可誘發(fā)雄性SD大鼠肥胖并伴有內(nèi)臟脂肪增加、血脂異常及血糖升高；高脂飲食即使未誘發(fā)肥胖,其糖脂代謝指標(biāo)亦趨向于肥胖狀態(tài)。5001U/kg·d維生素D3干預(yù)具有良好的血脂調(diào)節(jié)作用；補(bǔ)充維生素D3可有效提高血清25(OH)D水平。第四部分肥胖SD大鼠肝臟維生素D羥化酶CYP27A1表達(dá)研究目的研究SD大鼠經(jīng)高脂飼料誘導(dǎo)肥胖后其肝臟的脂肪變性情況,及維生素D3羥化酶CYP27A1表達(dá)量,探索兩者相關(guān)性。方法標(biāo)本為第三部分實(shí)驗(yàn)中高脂飼料喂養(yǎng)的DIO大鼠及對(duì)照組大鼠肝臟病理切片及冰凍組織,通過(guò)HE染色評(píng)估肝細(xì)胞脂肪變性程度,以NAFLD組織學(xué)評(píng)分系統(tǒng)評(píng)價(jià)脂肪變性程度；以免疫組化染色檢測(cè)CYP27A1在肝臟中的表達(dá)量,運(yùn)用Image-pro plus軟件分析表達(dá)密度。通過(guò)冰凍組織提取蛋白,以Western b lot檢測(cè)肝臟組織中CYP27A1,以Quantity-One軟件分析其表達(dá)量。以SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析DIO大鼠、對(duì)照組大鼠CYP27A1表達(dá)的組間差別,分析其表達(dá)量與肝臟脂肪變性的相關(guān)性。結(jié)果對(duì)照組SD大鼠肝臟脂肪變性評(píng)分5例為1分,5例為2分；DIO組SD大鼠肝臟脂肪變性評(píng)分1例為1分,9例為3分,兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.001)；免疫組化染色結(jié)果顯示,CYP27A1表達(dá)主要集中于肌小葉中央,對(duì)照組表達(dá)顯著高于DIO組(p0.001); Western blot實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組CYP27A1相對(duì)表達(dá)量為2.08±0.37,顯著高于D1O組(1.27±0.28,p0.001),且CYP27A1表達(dá)量與脂肪變性評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.548,p=0.023)。結(jié)論肥胖SD大鼠肝臟脂肪變性較嚴(yán)重,維生素D羥化酶CYP27A1表達(dá)減少,表達(dá)量與肝臟脂肪變性程度呈反比。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R725.8

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