發(fā)布時間：2018-02-25 20:15

  本文關(guān)鍵詞： EV71 人扁桃體上皮細胞 巨噬細胞 TLR2 TLR4 抗病毒天然免疫應答　出處：《中國疾病預防控制中心》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：手足口病(hand, foot, and mouth disease, HFMD)是影響5歲以下兒童健康的常見傳染病,給患者和家庭帶來了巨大的疾病負擔和經(jīng)濟負擔。EV71作為HFMD主要病原體,其感染可致患者出現(xiàn)典型的HFMD癥狀,嚴重者還能出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥甚至死亡。近期研究顯示EV71感染致死的兒童尸檢標本中EV71抗原和基因組RNA在人扁桃體隱窩上皮中存在,同時EV71 RNA陽性的細胞主要是巨噬細胞。然而上述研究僅限于尸檢標本中,關(guān)于人扁桃體上皮細胞和單核細胞分化的巨噬細胞到底是不是對EV71易感還需進一步證實。抗病毒的天然免疫應答作為宿主細胞抵御病毒感染的第一道防線,在機體的抗感染應答中具有重要作用。已有研究顯示EV71通過自身編碼的2A和3C蛋白酶剪切天然免疫應答信號通路中的相關(guān)配體分子造成信號轉(zhuǎn)導中斷進而實現(xiàn)免疫逃逸,然而關(guān)于人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞針對EV71感染激活的天然免疫應答研究目前也還未開展。本文研究了人扁桃體上皮細胞(UT-SCC-60A、UT-SCC-60B)和人單核細胞分化的巨噬細胞(U937)對EV71的易感性及其相應的抗EV71感染的天然免疫應答。整個研究分為以下兩部分：一、EV71感染人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞的天然免疫應答研究研究發(fā)現(xiàn)人扁桃體上皮細胞UT-SCC-60A和UT-SCC-60B具有典型的上皮細胞形態(tài)特征且表達上皮細胞角蛋白CK-5；而人單核細胞U937經(jīng)PMA誘導分化成典型的巨噬細胞；EV71感染人扁桃體上皮細胞能夠誘導明顯的細胞病變效應發(fā)生,人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞均支持EV71復制且具有較高的病毒滴度,SCARB2可能介導了EV71的感染；EV71感染人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞能夠產(chǎn)生IL-8、IL-1β、IL-6等細胞因子反應：EV71感染人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞早期能夠活化PI3K/AKT、p38、JNK1/2和ERK1/2信號途徑,ERK1/2和JNK1/2途徑是EV71復制的必要途徑；EV71感染人扁桃體上皮細胞和巨噬細胞能夠活化NF-κB途徑,PI3K/AKT、p38、JNK1/2和ERK1/2信號途徑與NF-κB途徑之間存在交叉對話且調(diào)控細胞因子的生成。二、TLR2異源二聚體識別EV71介導抗病毒天然免疫應答研究EV71、UV-EV7、EV71 VLP感染或刺激人扁桃體上皮細胞UT-SCC-60A和UT-SCC-60B,人巨噬細胞U937后能夠上調(diào)TLR2、TLR4的轉(zhuǎn)錄水平；UT-SCC-60A細胞中TLR2與EV71主要在細胞漿內(nèi)發(fā)生熒光共定位,UT-SCC-60B細胞中TLR2能夠與EV71在整個細胞發(fā)生免疫熒光共定位,U937細胞中TLR2同樣是在整個細胞均能與EV71發(fā)生共定位；UT-SCC-60A細胞中TLR2主要在細胞漿內(nèi)存在、UT-SCC-60B細胞中TLR2在細胞膜和細胞漿內(nèi)均存在、U937細胞中TLR2同樣存在與細胞膜和細胞漿內(nèi)；UT-SCC-60A細胞中TLR4與EV71的免疫熒光共定位主要發(fā)生在細胞漿內(nèi),UT-SCC-60B則主要發(fā)生在細胞膜上,U937也主要發(fā)生在細胞漿內(nèi)；UT-SCC-60A細胞中TLR4主要在細胞漿內(nèi)、UT-SCC-60B細胞中TLR4主要在細胞膜上、U937細胞中TLR4主要在細胞漿內(nèi)；EV71感染人扁桃體上皮細胞UT-SCC-60A和UT-SCC-60B、人巨噬細胞U937后誘導TLR2.TLR4 MyD88、IRAK-1、TRAF3和TRAF6信號分子的蛋白表達上調(diào)同時p65和IRF3發(fā)生磷酸化：EV71、UV-EV71感染和刺激UT-SCC-60B、U937細胞后能夠誘導TLR2/TLR1、新型TLR2/TLR4異源二聚體的形成；TLR2/TLR1、TLR2/TLR6、TLR2/CD14異源二聚體能夠抑制EV71感染所致的CPE；不同的TLR2異源二聚體的激動劑活化U937細胞的TLR2,能夠誘導IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α大量生產(chǎn)；EV71感染小鼠巨噬細胞RAW264.7后能夠誘導促炎細胞因子和趨化因子反應。本文通過上述研究證實：(1)人扁桃體上皮細胞(UT-SCC-60A、UT-SCC-60B)和人巨噬細胞(U937)均對EV71易感,EV71感染后活化PI3K/AKT和MAPKs途徑且與NF-κB途徑間存在交叉對話來調(diào)節(jié)著細胞因子的生成；(2)EV71和UV-EV71能夠誘導TLR2與TLR1、TLR4形成異源二聚體并可能介導MyD88/IRAK-1/TRAF3/IRF3或MyD88/IRAK-1/TATRAF3/NF-κB信號級聯(lián)反應；上述研究通過細胞水平證實了人扁桃體上皮細胞和人巨噬細胞是EV71新的敏感細胞,同時發(fā)現(xiàn)了潛在的抗病毒天然免疫應答新途徑,上述研究結(jié)果為深入研究EV71的感染和致病機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R725.1
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本文編號：1535010