本文關(guān)鍵詞：MiR-34b在兒童急性白血病中的表達(dá)、甲基化調(diào)控及臨床意義的研究　出處：《蘇州大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：研究miR-34b在兒童急性白血病中的表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)，探討其臨床意義。同時(shí)檢測(cè)miR-34b對(duì)細(xì)胞增殖是否有影響，進(jìn)一步了解其生物學(xué)功能。 方法：8種白血病細(xì)胞株（U937，HL-60，MV4-11，M2R，K562，Raji，CCRF，DAMI），兒童初診急性白血病（AL）患兒骨髓標(biāo)本87例，其中初診急性淋巴細(xì)胞性白血�。ˋLL）患兒55例，初診急性髓系白血�。ˋML)患兒32例，，正常對(duì)照患兒43例。提取細(xì)胞株或其骨髓標(biāo)本總RNA，并進(jìn)行引物特異性逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)對(duì)miR-34b進(jìn)行檢測(cè)，循環(huán)閾值(Ct值)比較法進(jìn)行miRNA表達(dá)定量分析。統(tǒng)計(jì)分析白血病細(xì)胞株、初診AL、ALL、AML及MLL~+各組患兒miR-34b表達(dá)是否有差異，并根據(jù)臨床資料進(jìn)行進(jìn)一步分析，以探討miR-34b在兒童初診AL、ALL及AML的意義。同時(shí)提取細(xì)胞株或其骨髓標(biāo)本DNA，進(jìn)行重亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA，運(yùn)用甲基化特異性PCR（MSP）檢測(cè)miR-34b啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)，并通過甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑（5-aza-2-dC）處理HL-60及K562進(jìn)一步檢測(cè)其甲基化狀態(tài)，結(jié)合臨床資料進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析兒童初診AL、ALL及AML與其甲基化狀態(tài)是否相關(guān)。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染hsa-miR-34b mimics到K562細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果： 1、miR-34b在正常對(duì)照、白血病細(xì)胞株、兒童初診AL、ALL、AML及MLL+各組的相對(duì)表達(dá)量(x±s x)分別為5.22±1.15、0.03±0.03、1.18±0.47、1.65±0.69、0.18±0.06、0.64±0.34，與正常對(duì)照組相比，兒童初診ALL組（P0.05）、白血病細(xì)胞株組、初診AL組、AML組及MLL~+組（P均0.01）均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2、結(jié)合臨床資料（如性別、年齡、免疫分型、染色體、融合基因、潑尼松實(shí)驗(yàn)等）做了進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)miR-34b的相對(duì)表達(dá)量與兒童初診ALL患兒潑尼松實(shí)驗(yàn)敏感與否相關(guān)（P0.05）。 3、miR-34b啟動(dòng)子在8種白血病細(xì)胞株中均出現(xiàn)甲基化現(xiàn)象，甲基化陽性率為100%，本實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)50例兒童初診AL患兒，其中31例初診ALL患兒，19例初診AML患兒，其甲基化陽性率分別為64%（32/50）、77.42%（24/31）和42.11%（8/19），同時(shí)檢測(cè)23例正常對(duì)照患兒，無一例出現(xiàn)甲基化現(xiàn)象。 4、5-aza-2-dC處理白血病細(xì)胞株HL-60及K562后，miR-34b的相對(duì)表達(dá)量均明顯升高，分別為49.5倍和18.8倍，其甲基化條帶均明顯減弱。 5、結(jié)合臨床資料（如性別、年齡、免疫分型、染色體、融合基因、潑尼松實(shí)驗(yàn)等）做了進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)miR-34b的甲基化狀態(tài)與兒童初診AL患兒的免疫分型相關(guān)，淋系與髓系的miR-34b的甲基化狀態(tài)之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 6、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染hsa-miR-34b mimics到K562細(xì)胞后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率為61%，CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染hsa-miR-34b mimics組48h、72h、96h及120h均出現(xiàn)細(xì)胞增殖抑制作用（P均0.01），其中72h抑制作用最明顯，抑制率達(dá)45.7%。 結(jié)論： 1、miR-34b在白血病細(xì)胞株、兒童初診AL、ALL、AML及MLL+各組患兒中表達(dá)均明顯減低，提示miR-34b可能作為新的抑癌基因參與兒童初診AL、ALL及AML的形成，同時(shí)在MLL基因重排陽性兒童初診AL的發(fā)病中可能起著重要作用，并影響其預(yù)后。 2、miR-34b的相對(duì)表達(dá)量與兒童初診ALL患兒潑尼松實(shí)驗(yàn)敏感與否相關(guān)，提示其是否可以作為判定兒童初診ALL危險(xiǎn)度及預(yù)后的指標(biāo)。 3、miR-34b啟動(dòng)子在白血病細(xì)胞株、兒童初診AL、ALL及AML中均出現(xiàn)高度甲基化現(xiàn)象，提示miR-34b在白血病細(xì)胞株、兒童初診AL、ALL及AML中均受甲基化機(jī)制調(diào)控，可能作為新的抑癌基因發(fā)揮作用。 4、5-aza-2-dC處理白血病細(xì)胞株HL-60及K562后，miR-34b的相對(duì)表達(dá)量明顯升高，甲基化條帶明顯減弱，進(jìn)一步證實(shí)miR-34b在白血病細(xì)胞株中受甲基化機(jī)制調(diào)控。 5、miR-34b的甲基化狀態(tài)與兒童初診AL患兒的免疫分型相關(guān)，提示miR-34b啟動(dòng)子在兒童初診ALL患兒中甲基化頻率高于兒童初診AML患兒，miR-34b在兒童初診ALL及AML中可能作為新的抑癌基因發(fā)揮作用。 6、miR-34b對(duì)白血病細(xì)胞增殖具有抑制作用，提示miR-34b在白血病發(fā)病中可能發(fā)揮抑癌基因作用。
[Abstract]:Objective: To study the expression of miR-34b in children with acute leukemia and the methylation status of CpG island in the promoter region, and to explore its clinical significance. At the same time, the effect of miR-34b on cell proliferation was detected, and its biological function was further understood.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1345197