本文關(guān)鍵詞：利用原位雜交技術(shù)研究H1N1流感病毒對心臟發(fā)育基因的影響　出處：《湖南師范大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：先天性心臟病是一類嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,遺傳因素和環(huán)境因素是導(dǎo)致先天性心臟病的主要原因。在過去的幾十年里,人們對導(dǎo)致先天性心臟病的研究取得了極大的進(jìn)展,但對先天性心臟病的致病機(jī)制還是了解不多,尤其是環(huán)境因子影響心臟發(fā)育更是知之甚少。已有研究證明懷孕早期宮內(nèi)病毒感染是最重要的環(huán)境因子之一。而臨床流行病學(xué)調(diào)研表明有15種病毒的早期宮內(nèi)感染可能與先天性心臟病的發(fā)生有關(guān),但尚未有實(shí)驗(yàn)證明兩者之間的關(guān)系。因此研究流感病毒對心臟發(fā)育相關(guān)基因的影響具有重要的意義。本課題以SPF級純種KM小鼠為實(shí)驗(yàn)動物,通過建立穩(wěn)定感染的H1N1流感病毒小鼠模型,以形態(tài)觀察和原位雜交為主要手段,并以BMP信號途徑為研究對象,從基因表達(dá)水平驗(yàn)證分析了BMP信號途徑成員及部分心臟標(biāo)志基因的表達(dá)變化。本論文獲得主要研究結(jié)果如下:1、根據(jù)小鼠胚胎心臟的發(fā)育時(shí)間,在懷孕第7.5天進(jìn)行攻毒,構(gòu)建了H1N1流感病毒感染小鼠模型。對病毒感染懷孕小鼠胚胎及其對照進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察研究,發(fā)現(xiàn)病毒感染組胚胎發(fā)育延緩,心臟發(fā)育異常。2、原位雜交檢測BMP信號通路相關(guān)基因,發(fā)現(xiàn)在病毒感染胚胎中BMP4/5/7和BAMBI在早期心臟中表達(dá)都下調(diào),說明了流感病毒影響了BMP信號通路。3、原位雜交檢測心臟發(fā)育核心調(diào)控因子Nkx2.5在胚胎9.5、10.5天的表達(dá),發(fā)現(xiàn)病毒感染胚胎在這兩個(gè)時(shí)期表達(dá)明顯減少,說明流感病毒影響了心臟發(fā)育。4、原位雜交檢測第二心域標(biāo)志因子Isl1和Fgf10的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Isl1在10.5和11.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道表達(dá)減少,Fgf10亦在10.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道下調(diào),說明流感病毒能影響第二心域發(fā)育。5、進(jìn)一步對腔室特化因子MLC2a和ehand的表達(dá)進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)MCL2a在9.5天的病毒感染胚胎表達(dá)減少,ehand在10.5、11.5天的病毒感染胚胎的左心室區(qū)域顯著下調(diào),這表明流感病毒也影響了心臟的腔室建成。綜上所述,這些結(jié)果初步表明在早期心臟發(fā)育中流感病毒影響B(tài)MP信號及心臟發(fā)育的重要因子Nkx2.5、Isl1、Fgf10、MLC2a和ehand的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.4

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本文編號：1319090