本文關(guān)鍵詞：抑制KGFR表達(dá)對(duì)高氧暴露下A549細(xì)胞功能影響的研究

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【摘要】：第一部分篩選KGFR沉默序列及對(duì)KGFR沉默A549細(xì)胞在高氧暴露下功能的初步研究 【目的】篩選有效的KGFR沉默序列，并研究高氧暴露下KGFR沉默的A549細(xì)胞的變化。 【方法】體外傳代培養(yǎng)A549細(xì)胞，轉(zhuǎn)染si-KGFR序列及si-NT序列，48h后收集細(xì)胞總RNA及總蛋白，，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)KGFR mRNA的表達(dá)；用Western blot法檢測(cè)KGFR蛋白表達(dá)的水平。對(duì)有效序列細(xì)胞通以950ml/L高氧，對(duì)照組轉(zhuǎn)染置于同一室內(nèi)空氣中，觀(guān)察兩組細(xì)胞形態(tài)變化，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性的變化。 【結(jié)果】①序列特異性si-KGFR可抑制KGFR的表達(dá)，si-KGFR-001、si-KGFR-002、si-KGFR-0033組KGFR mRNA表達(dá)均受到抑制，si-KGFR-002組抑制效率最高。②與常氧對(duì)照組相比，si-KGFR-002轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)高氧的耐受性降低，細(xì)胞形態(tài)不良，細(xì)胞活力降低(p0.005)。 【結(jié)論】KGFR沉默下的A549細(xì)胞對(duì)高氧耐受性降低，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)不良與細(xì)胞活性降低。 第二部分高氧暴露下抑制KGFR表達(dá)對(duì)A549細(xì)胞的抗氧化功能的研究 【目的】研究抑制A549細(xì)胞KGFR表達(dá)后對(duì)高氧暴露A549細(xì)胞抗氧化性的影響，以及外源性給予α-硫辛酸（LA），角化上皮生長(zhǎng)因子（KGF）后對(duì)細(xì)胞的影響。 【方法】體外傳代培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞，隨機(jī)分為四組：Ⅰ單純高氧組；Ⅱ高氧+si-KGFR組；Ⅲ高氧+si-KGFR+LA組；Ⅳ高氧+si-KGFR+KGF組。各組通以950ml/L氧氣，分別于培養(yǎng)24h、48h、72h后收集細(xì)胞，Western blot法檢測(cè)各組KGFR蛋白表達(dá)的水平，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組A549細(xì)胞內(nèi)活性氧水平及細(xì)胞凋亡水平；WST法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)錳型超氧化物歧化酶活性。 【結(jié)果】與高氧對(duì)照組相比，①KGFR沉默細(xì)胞胞內(nèi)ROS水平較單純高氧細(xì)胞內(nèi)ROS水平高(p0.005)。②外源性L(fǎng)A、KGF可以減輕KGFR沉默細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生(p0.05)。③高氧暴露所致的A549細(xì)胞死亡以早期凋亡為主，而高氧暴露對(duì)KGFR沉默細(xì)胞的致死效應(yīng)更為顯著(p0.005)。④外源性L(fǎng)A、KGF可以部分減輕高氧暴露對(duì)KGFR沉默細(xì)胞的致死效應(yīng)(p0.005)。⑤高氧暴露使KGFR沉默細(xì)胞錳型超氧化物歧化酶活性降低，但各組間酶活性變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑥外源性L(fǎng)A、KGF可以提高高氧暴露下KGFR沉默細(xì)胞KGFR的表達(dá)(p0.05)。 【結(jié)論】抑制KGFR表達(dá)可高氧暴露下A549細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高，細(xì)胞凋亡數(shù)量增加；外源性給予LA、KGF可部分減輕KGFR抑制所致效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 常立文;;新生兒支氣管肺發(fā)育不良的診治[J];中國(guó)實(shí)用兒科雜志;2007年04期

本文編號(hào)：1289616