本文關(guān)鍵詞：大黃上清液聯(lián)合母乳對(duì)Caco-2炎癥細(xì)胞Toll樣受體及核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎 母乳 大黃上清液 Toll樣受體 核轉(zhuǎn)錄因子

【摘要】：目的：新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(Neonatal necrotizing enterocolitis, NEC)是由于致病菌繁殖所導(dǎo)致的腸缺血再灌注損傷和系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)引起的疾病,相關(guān)的臨床及實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)運(yùn)用大黃及母乳喂養(yǎng)防治NEC有良好的效果。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)運(yùn)用炎癥因子TNF-α誘導(dǎo)NEC腸道炎癥細(xì)胞模型,研究大黃及母乳對(duì)Caco-2炎癥細(xì)胞Toll樣受體mRNA及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB P65蛋白表達(dá)的影響,探討大黃及母乳防治NEC的相關(guān)作用機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組和TNF-α誘導(dǎo)模型組�？瞻讓�(duì)照組為正常培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞,然后加入常規(guī)培養(yǎng)液。以TNF-α成功誘導(dǎo)出Caco-2炎癥細(xì)胞模型,采用Trans AMNF-κBp65試劑盒檢測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞核蛋白F-κB p65的含量,運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)篩選確定TNF-α最佳刺激時(shí)間點(diǎn)。TNF-α誘導(dǎo)模型組共分為四組,向TNF-α誘導(dǎo)模型組中分別加入常規(guī)培養(yǎng)液、1%的大黃上清液、1%的乳清及1%大黃上清液聯(lián)合1%乳清,采用RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中Toll樣受體mRNA相對(duì)表達(dá)量,采用免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定NF-κB P65蛋白表達(dá)量及RT-PCR檢測(cè)法測(cè)定NF-κBP65蛋白下游產(chǎn)物IL-1βmRNA的相對(duì)表達(dá)量,對(duì)各個(gè)組別相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)水平變化的差異進(jìn)行比較,分析大黃上清液、母乳及兩者聯(lián)合對(duì)Caco-2炎癥細(xì)胞Toll樣受體mRNA及NF-κBP65蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)：1%大黃上清液、1%母乳上清液、1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液對(duì)Caco-2炎癥細(xì)胞Toll樣受體mRNA的相對(duì)表達(dá)量均有明顯抑制作用,相對(duì)于加入常規(guī)培養(yǎng)液的TNF-α誘導(dǎo)組,P值均0.01,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液組較1%大黃上清液組效果更明顯,P值0.01,兩組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清組較1%母乳上清液組作用強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；1%母乳上清液組較1%大黃上清液組作用強(qiáng),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)NF-κB P65蛋白表達(dá),在分別加入1%大黃上清液、1%母乳上清液、1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液后,較加入常規(guī)培養(yǎng)液的TNF-α誘導(dǎo)組均有明顯下調(diào),且下調(diào)程度如下：1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液后組1%母乳上清液組1%大黃上清液組。1%大黃上清液、1%母乳上清液、1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液對(duì)Caco-2炎癥細(xì)胞NF-κB P65蛋白下游產(chǎn)物IL-1βmRNA的相對(duì)表達(dá)量均有明顯抑制作用,相對(duì)于加入常規(guī)培養(yǎng)液TNF-α誘導(dǎo)組,P值均0.01,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清液組較1%大黃上清液組效果明顯,P值0.01,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；1%大黃上清液聯(lián)合1%母乳上清組較1%母乳上清液組作用強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),1%母乳上清液組較1%大黃上清液組作用強(qiáng),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：母乳、大黃上清液及兩者聯(lián)合可抑制Caco-2炎癥細(xì)胞Toll樣受體、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBP65蛋白及其下游產(chǎn)物IL-1βmRNA的表達(dá),即減輕炎癥反應(yīng)；說(shuō)明Toll樣受體、核轉(zhuǎn)錄因子參與了NEC的發(fā)病機(jī)制,此機(jī)制可能為母乳、大黃上清液防治NEC的作用機(jī)制之一。本研究從細(xì)胞及分子生物學(xué)水平初步闡明了大黃及母乳防止NEC的有效性及相關(guān)作用機(jī)制,進(jìn)一步為臨床上提倡母乳喂養(yǎng)及運(yùn)用大黃上清液防治NEC提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 賈盛華;韋紅;余加林;魏小娣;張曉萍;李金純;;姜黃素對(duì)新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎的保護(hù)作用[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2010年02期

2 魏小娣;韋紅;賈盛華;劉瑋;張曉萍;;姜黃素對(duì)新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型NF-κB,TNF-α及IL-6表達(dá)的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年22期

3 周于新;沈迎春;高萍;張雙船;;生大黃防治新生鼠缺氧腸損傷的初步研究[J];中國(guó)兒童保健雜志;2007年01期

4 李函;喬立興;黃莉;蔣犁;;應(yīng)用微生態(tài)制劑預(yù)防早產(chǎn)兒壞死性小腸結(jié)腸炎412例[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2011年08期

5 韓娟;付永萍;封志純;;大黃對(duì)新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型腸損傷的防治作用[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2008年21期

6 Hans Van Goudoever;陳超;張蓉;;新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎的熱點(diǎn)問(wèn)題[J];中國(guó)循證兒科雜志;2011年05期

，

本文編號(hào)：1261436