本文關(guān)鍵詞：TIPE2在哮喘兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)與意義

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【摘要】：目的： 兒童哮喘是一種小氣道的慢性炎癥,有多種細(xì)胞發(fā)揮了重要作用,尤其是T淋巴細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞等。氣道炎癥導(dǎo)致氣流受阻、支氣管高反應(yīng)性并誘發(fā)多種反復(fù)出現(xiàn)的癥狀。氣道炎癥的發(fā)展和調(diào)節(jié)與Th2細(xì)胞因子升高和Thl細(xì)胞因子降低密切相關(guān)。Th2細(xì)胞因子升高導(dǎo)致IgE過度產(chǎn)生,嗜酸性粒細(xì)胞分化與氣道高反應(yīng)性持續(xù)發(fā)展。然而Thl細(xì)胞因子可以對抗Th2細(xì)胞因子的作用,因此哮喘的氣道炎癥可能是Th細(xì)胞失去正常平衡的結(jié)果,Th1/Th2平衡在哮喘的病理生理過程中扮演關(guān)鍵性的角色。 TIPE2是一種新型的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)蛋白,已有研究證實(shí)其在機(jī)體固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中均發(fā)揮重要的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。有報(bào)道顯示,系統(tǒng)性紅斑狼瘡與慢性乙型肝炎患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中以及在糖尿病患者的腎活檢組織中存在TIPE2的異常表達(dá),這些結(jié)果表明TIPE2可能與一些慢性炎癥性疾病的發(fā)展有相關(guān)性。然而,TIPE2在兒童哮喘患者中的表達(dá)情況及其意義目前尚未見報(bào)道。本研究擬通過檢測兒童哮喘患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2的表達(dá),同時(shí)檢測外周血中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)目以及血清中IgE含量、Thl型細(xì)胞因子IFN-γ與Th2型細(xì)胞因子IL-4水平,并分析它們之間的相關(guān)性,了解TIPE2在哮喘發(fā)病過程中的作用,以探討哮喘發(fā)病起始階段的干預(yù)機(jī)制。 方法： 2011年至2012年隨機(jī)抽取在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院就診的42名哮喘兒童為研究對象,診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒童分會(huì)呼吸學(xué)組修訂的兒童哮喘防治常規(guī)診斷標(biāo)準(zhǔn)。健康對照組隨機(jī)抽取同時(shí)期39名來自山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院入托查體兒童,排除哮喘、其他過敏疾病及近期呼吸道疾病。 1.采用RT-PCR、qRT-PCR及western blot法檢測哮喘患者與正常對照組外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2的表達(dá)水平; 2.采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法(即夾心ELISA法)檢測哮喘患者與正常對照組血清中IL-4、IFN-γ含量； 3.采用全自動(dòng)特定蛋白分析儀檢測哮喘患者與正常對照組血清中總IgE含量； 4.采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對哮喘患者及正常對照組全血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行檢測。 5.所有數(shù)據(jù)以平均值±均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)的形式表示,利用t檢驗(yàn)比較哮喘患者與正常對照組之間的差異,采用Pearson's相關(guān)性檢驗(yàn)分析的方法進(jìn)行相關(guān)性分析,以P0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性的意義。 結(jié)果： 1.外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2mRNA的表達(dá)：半定量RT-PCR顯示哮喘兒童組TIPE2mRNA表達(dá)水平較正常對照組低；實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果為,哮喘組為56.41±34.45,對照組為66.63±37.84,哮喘兒童組TIPE2mRNA的表達(dá)水平顯著降低(P=0.0323)。 2.外周血單個(gè)核細(xì)胞中TIPE2蛋白的表達(dá)：Western blot對42名哮喘兒童與39名健康對照兒童外周血TIPE2蛋白表達(dá)水平進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)哮喘兒童TIPE2蛋白表達(dá)水平比正常對照組低,與TIPE2mRNA水平變化一致。 3.血清IFN-y水平檢測：哮喘組為150.64±123.019pg/ml,對照組為404.83+405.20pg/ml,哮喘兒童血清IFN-γ水平顯著降低(P0.001)。 4.血清IL-4水平檢測：哮喘組IL-4為2.30±4.65pg/ml,對照組IL-4為0.37±0.70pg/ml,哮喘兒童血清中IL-4水平顯著增高(P0.001)。 5.血清中總IgE含量：哮喘組為388.87±364.51U/ml,對照組為20.61±4.84U/ml,哮喘兒童血清總IgE含量明顯增高(P0.001) 6.外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)：哮喘組為0.30±0.26×109/L,對照組為0.16±0.09×109/L,哮喘兒童外周血嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量顯著增高(P=0.0017) 7.相關(guān)性分析：TIPE2mRNA的表達(dá)與血清IL-4(r=0.3693,P=0.0344),血清總IgE(r=_0.5173,P=0.001)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(r=0.3503,P=0.0362)呈負(fù)相關(guān)。然而,在TIPE2mRNA表達(dá)與血清IFN-γ之間(r=0.1504,P=0.3959)無明顯相關(guān)性。 結(jié)論： 1.哮喘兒童外周血嗜酸性粒細(xì)胞、血清總IgE、血清IL-4水平顯著增高,而IFN-γ水平則顯著降低,這表明在哮喘兒童中Th2功能占據(jù)優(yōu)勢。 2.與健康兒童相比,哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞TIPE2mRNA及蛋白水平明顯降低。 3.哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞TIPE2mRNA表達(dá)水平與患兒血清IL-4、IgE含量及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)性,但是與IFN-y無顯著相關(guān)性。提示TIPE2表達(dá)的下調(diào)可能參與兒童哮喘的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.6

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本文編號：1229269