本文關鍵詞：兒童炎癥性腸病臨床分析及發(fā)病機制的初步探討

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【摘要】：背景： 炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)包括克羅恩病(Crohn's disease,CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)，是一種腸道慢性非特異性炎癥性疾病。近年來隨著消化內(nèi)鏡技術(shù)的發(fā)展及其在兒童慢性胃腸道炎癥性疾病中的廣泛應用,兒童IBD的診斷率有明顯上升趨勢。但本病病因不清,發(fā)病機制不明,治療較困難。 目前研究表明,IBD可能與感染、免疫紊亂等因素密切相關。免疫反應異常所導致的腸黏膜通透性增加在其發(fā)病中起重要作用。腫瘤壞死因子-α (Tumor necrosis factor-alpha, TNF-a)主要由活化的巨噬細胞產(chǎn)生,是調(diào)節(jié)炎癥免疫反應過程中的重要分子信號。已有研究發(fā)現(xiàn),TNF-α導致腸上皮屏障功能破壞、通透性增加,是IBD主要病理基礎。因此,對于難治性IBD的患兒,早期加用TNF-α的單克隆抗體(Infliximab)獲得比較好的臨床效果,提示TNF-α可能是IBD發(fā)生發(fā)展中的關鍵因素之一,但具體機制不明。因此深入探討TNF-α在IBD中的作用,有助于闡明IBD發(fā)病機制,提供新的治療靶點。 目的： 1.分析兒童炎癥性腸病的臨床特點,了解TNF-α單克隆抗體(Infliximab)對其治療效果。 2.探討TNF-α對腸上皮屏障的通透性的影響及調(diào)控機制。 方法： 1.收集2007年1月至2012年1月省人民醫(yī)院收治的所有出院診斷考慮IBD的病例資料,參照世界胃腸組織(WGO)于2010年頒布的IBD診療指南以及2010年中華醫(yī)學會兒科學會消化學組兒童炎癥性腸病協(xié)作組制定的《兒童炎癥性腸病診斷規(guī)范共識意見》IBD中CD和UC的診斷標準,收集12例符合診斷IBD標準的患兒臨床資料,并進行回顧性分析。 2.利用Caco-2細胞建立腸上皮細胞屏障模型,分為對照組和NF-κB抑制組,分別轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒(vector)和DN-Mu IκBa質(zhì)粒。兩組經(jīng)TNF-α預處理后,應用電阻儀測定各組跨上皮細胞電阻(transepithelial electrical resistance, TEER)變化,羅丹明-鬼筆環(huán)肽直接染色觀察細胞骨架改變,同時采用熒光素酶報告基因檢測NF-κB活性,免疫印跡法(Western blotting)檢測肌球蛋白輕鏈(MLC)磷酸化水平。 結(jié)果： 1.12例IBD患兒中克羅恩病(CD)患兒3例,潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患兒9例；其中男性8例,女性4例；發(fā)病年齡6個月-12歲9個月(中位年齡6歲)。12例IBD患兒均無陽性家族史。臨床表現(xiàn)為消瘦、貧血各10例(83.3%),腹痛9例(75.0%),發(fā)熱、便血各7例(58.3%),腹瀉8例(66.7%)。實驗室檢查顯示12例患兒均有CRP增高,10例ESR升高(83.3%),10例白細胞升高(83.3%)。病理結(jié)果顯示淺表小潰瘍8例(66.7%),黏膜慢性炎癥7例(58.3%),均未見非干酪樣肉芽腫。其中9例予5-氨基水楊酸或柳氮磺胺吡啶、糖皮質(zhì)激素治療后緩解,3例復發(fā),其中CD患兒2例(男性),UC患兒1例(女性)。應用infliximab單抗治療3例復發(fā)病例,疾病活動指數(shù)明顯降低,臨床癥狀獲得長期緩解。 2. TNF-a引起Caco-2細胞通透性增高�？缟掀ぜ毎娮铚y定結(jié)果顯示,TNF-α作用6小時和48小時跨上皮細胞電阻分別為492±13.74(Ω·cm2)和373.67±19.55(Ω·cm2),同時間DNMu-IκBa組的跨上皮細胞電阻分別為532±17.77(Ω·cm2)、455±15.39(Ω·cm2),兩組比較差異有顯著性(P0.05)。 3. TNF-α作用0.5小時NF-κB的活性明顯增加,轉(zhuǎn)染DNMu-IκBa質(zhì)粒的Caco-2細胞中TNF-α對NF-κB的活化作用受到明顯抑制。 4. TNF-α作用6h組細胞的F-actin無明顯改變,24h組外周輪廓模糊難辨,趨于崩解消散。轉(zhuǎn)染DN-mulκBa質(zhì)粒的Caco-2細胞上述改變明顯減輕。 5. TNF-α處理6小時Caco-2細胞的MLC磷酸化水平明顯上升,24小時達峰值,而轉(zhuǎn)染DN-mulκBa質(zhì)粒抑制NF-κB活性后,MLC磷酸化水平受到明顯抑制。 結(jié)論： 1.兒童IBD治療比較困難,容易復發(fā),抗TNF-a藥物infliximab單抗治療難治性的兒童炎癥性腸病有效。 2. TNF-α導致Caco-2細胞間的通透性增加,其機制可能與NF-κB活化,F-actin重排及MLC磷酸化有關。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.7

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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4 中華醫(yī)學會兒科學會消化學組兒童炎癥性腸病協(xié)作組;陳潔;許春娣;黃志華;龔四堂;董永綏;董梅;孫梅;葉禮燕;黃永坤;王寶西;王琳琳;徐樨巍;江米足;楊文瀾;朱朝敏;游潔玉;武慶斌;蔣麗蓉;李在玲;邵彩虹;黃瑛;張艷玲;徐曉華;劉鳳林;毛萌;;兒童炎癥性腸病診斷規(guī)范共識意見[J];中國實用兒科雜志;2010年04期

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本文編號：1214792