發(fā)布時(shí)間：2017-11-18 21:25

  本文關(guān)鍵詞：孤兒受體RORγ的配體小分子的發(fā)現(xiàn)

  更多相關(guān)文章： 維甲酸受體相關(guān)孤兒受體 藥物設(shè)計(jì) 蛋白質(zhì)結(jié)晶

【摘要】：維甲酸受體相關(guān)孤兒受體RORγ是一類受配體調(diào)控的重要轉(zhuǎn)錄因子，在Th17細(xì)胞分泌IL-17等一系列促炎因子過(guò)程中扮演著重要的角色。通過(guò)抑制Th17活性，下調(diào)IL-17的表達(dá)，調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞的平衡，從而減少炎癥反應(yīng)的發(fā)生，這使得RORγ成為一個(gè)非常具有研究?jī)r(jià)值的藥物靶點(diǎn)。針對(duì)RORγ開(kāi)展藥物發(fā)現(xiàn)研究有望為治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥等自身免疫相關(guān)疾病找到新的突破。 由于RORγ在疾病發(fā)展過(guò)程中的重要性，其配體的發(fā)現(xiàn)一直廣受關(guān)注。但到目前為止，還未有針對(duì)RORγ的上市藥物。針對(duì)當(dāng)前研究現(xiàn)狀，我們開(kāi)展了針對(duì)該孤兒受體為靶標(biāo)的藥物發(fā)現(xiàn)與設(shè)計(jì)研究，本課題主要進(jìn)行的工作分以下幾個(gè)方面： 一、使用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)方法進(jìn)行先導(dǎo)化合物的篩選 首先針對(duì)現(xiàn)有的小分子化合物庫(kù)（約30萬(wàn)個(gè)），使用基于蛋白結(jié)構(gòu)的分子對(duì)接方法篩選。通過(guò)此方法挑選出可能作為目的蛋白配體的24個(gè)結(jié)構(gòu)不同的小分子化合物并購(gòu)買，用于活性測(cè)試。 二、目的蛋白R(shí)ORγ-LBD（Ligand binding domain）表達(dá)與純化 本課題采用原核表達(dá)方法：大腸埃希氏菌BL21（DE3）大量表達(dá)目的蛋白，再對(duì)菌株進(jìn)行高壓破碎處理，然后通過(guò)鎳柱親和層析、凝膠過(guò)濾層析等蛋白純化方法，獲得高純度目的蛋白。 三、小分子化合物抑制活性的測(cè)試 本課題使用AlphaScreen高通量篩選法和Luciferase雙報(bào)告基因檢測(cè)法等較為成熟的測(cè)活方法，，從通過(guò)虛擬篩選得到的24個(gè)小分子化合物中找到了一個(gè)表現(xiàn)最為良好的化合物S4（AlphaScreen IC50=13.83μM，Luciferase IC50=11.84μM）。以S4為先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行修飾改造獲得一系列結(jié)構(gòu)相似的小分子化合物（約120個(gè)，由本組薛曉纖同學(xué)完成），采用同樣方法測(cè)試抑制活性，有四個(gè)化合物表現(xiàn)較為突出。這四個(gè)化合物分別命名為Cmpd1，Cmpd2，Cmpd3，Cmpd4。其中Cmpd1（AlphaScreen IC50=3.83μM，LuciferaseIC50=0.14μM）和Cmpd4（AlphaScreen IC50=5.88μM，Luciferase IC50=0.09μM）的IC50值接近或優(yōu)于報(bào)道過(guò)的陽(yáng)性化合物T1317的IC50值（AlphaScreen IC50=2.01μM，LuciferaseIC50=0.53μM）。 四、蛋白質(zhì)的結(jié)晶實(shí)驗(yàn) 本課題通過(guò)使用本實(shí)驗(yàn)組晶體篩選條件，采用坐滴法對(duì)目的蛋白和篩選出的小分子化合物進(jìn)行復(fù)合物的共結(jié)晶，目的是得到復(fù)合物晶體。但由于此蛋白結(jié)構(gòu)的性質(zhì)獨(dú)特，暫未得到符合X射線衍射標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)晶體。因此，我們嘗試通過(guò)蛋白熱穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)（TSA）來(lái)分析目的蛋白的熱穩(wěn)定性及蛋白結(jié)晶條件。目前已取得一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為今后的結(jié)晶工作提供了寶貴的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 綜上，本課題已成功獲得了陽(yáng)性化合物Digoxin和UA的衍射數(shù)據(jù)；同時(shí)成功地通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)篩選獲得了有效的先導(dǎo)化合物。在此基礎(chǔ)上對(duì)先導(dǎo)化合物的進(jìn)一步修飾改造，得到了抑制效果更好的小分子化合物；通過(guò)分子模擬方法獲得的化合物與RORγ的結(jié)合模式預(yù)測(cè)和分析，獲得了重要的構(gòu)效關(guān)系信息。該研究為今后針對(duì)RORγ的藥物篩選提供了有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R593.2

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王昊,陸陽(yáng),陳紅專;毒蕈堿乙酰膽堿受體新成員:孤兒受體m_5[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2003年02期

2 孫蓬明;Jalied Sehouli;Werne rlitchnegger;魏麗惠;;孤兒受體-雌激素受體相關(guān)受體(ERRs)在雌激素信號(hào)途徑中的研究進(jìn)展[J];中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志;2006年01期

3 王鋼;;代謝性核孤兒受體與動(dòng)脈粥樣硬化[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

4 張向鋒;周培嵐;宮澤輝;;Mrgs受體及配體在疼痛中的作用[J];中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

5 王秦川;李金艷;;FXR及其作用的靶基因[J];重慶醫(yī)學(xué);2006年12期

6 穆小民,劉以訓(xùn);孤兒受體TR3蛋白及其mRNA在大鼠睪丸中的定位和表達(dá)研究[J];科學(xué)通報(bào);1997年22期

7 余小挺;鄭亦胡;鄭飛云;;孤兒受體Nur77與腫瘤的關(guān)系[J];腫瘤學(xué)雜志;2009年11期

8 高敏,魏麗惠,孫蓬明,王建六,趙丹,趙超,王志啟;雌、孕激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞孤兒受體ERRα的調(diào)控作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

9 胡宜;;現(xiàn)代醫(yī)學(xué)200詞[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2007年12期

10 楊春,陳彬,陳敏,陳健,李渝萍,周長(zhǎng)保,周度金,陳煊;毒殺芬對(duì)孤兒受體雌激素相關(guān)受體1(ERRα-1)的拮抗作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高敏;魏麗惠;孫蓬明;王建六;趙丹;;雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞孤兒受體ERRα調(diào)控作用的研究[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 高敏;魏麗惠;孫蓬明;王建六;趙丹;;雌激素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞孤兒受體ERRα調(diào)控作用的研究[A];第八次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 楊春;陳彬;周長(zhǎng)保;陳敏;陳健;周度金;陳煊;;毒殺芬對(duì)孤兒受體雌激素相關(guān)受體1(ERRα-1)的拮抗作用[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

4 吳喬;;孤兒受體TR3生物學(xué)功能及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控的研究[A];2008年中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第十一屆腫瘤和第十二屆免疫專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

5 陳健;陳敏;陳彬;李渝萍;李強(qiáng);周度金;;RBP4與孤兒受體hERR1的相互作用位點(diǎn)分析[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

6 賓艷芳;江青艷;束剛;;Orexin及其受體OXR研究進(jìn)展[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

7 趙麗君;孫蓬明;魏麗惠;高敏;王建六;張峻霄;;雌激素受體相關(guān)受體α過(guò)度表達(dá)使子宮內(nèi)膜癌HEC-1A耐受Tamoxifen誘導(dǎo)的凋亡[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 薛斌;涂晨;馮振華;溫傳俊;;Ror2通過(guò)Src介導(dǎo)的信號(hào)途徑調(diào)控腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨青年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

9 秦曉群;;蛙皮素樣肽受體的生理作用及其信號(hào)機(jī)制[A];湖南省生理科學(xué)學(xué)會(huì)2004年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

10 孫蓬明;魏麗惠;王建六;趙麗君;王大鵬;張峻霄;高敏;;子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)雌激素受體相關(guān)受體α引起細(xì)胞過(guò)度增殖[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 胡遠(yuǎn)新;孤兒受體GCNF在小鼠附睪中的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2003年

2 安曉飛;下丘腦孤啡肽參與電針調(diào)整去卵巢大鼠LH異常釋放的神經(jīng)內(nèi)分泌機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

3 江振然;G蛋白偶聯(lián)受體及其功能預(yù)測(cè)研究[D];華中科技大學(xué);2007年

4 靳三林;黃牛木抗癌活性成分研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2008年

5 王嘉東;核激素孤兒受體Rev-erbβ對(duì)載脂蛋白apoCIII轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

6 王元忠;PNRC在核仁的定位、功能及其剪接變異體的分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 李渝萍;肌鈣蛋白I2作為核受體輔活化子的鑒定[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 班謙;雞Leptin受體基因調(diào)控途徑及功能研究[D];石河子大學(xué);2013年

9 鐘久昌;自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)RAS相關(guān)基因的表達(dá)及全反式維甲酸對(duì)其影響的研究[D];汕頭大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 金翔宇;孤兒受體RORγ的配體小分子的發(fā)現(xiàn)[D];吉林大學(xué);2014年

2 馬小偉;核孤兒受體NR4A1抑制STAT3的轉(zhuǎn)錄活性[D];蘭州大學(xué);2009年

3 劉波;c-Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）誘導(dǎo)孤兒受體TR3磷酸化的分子機(jī)理[D];廈門大學(xué);2008年

4 劉悅;甘油激酶與核受體Nur77相互作用及其對(duì)肝臟脂代謝調(diào)控研究[D];天津大學(xué);2012年

5 雷娜姿;孤兒受體TR3抑制蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（PRMT1）誘導(dǎo)的甲基化[D];廈門大學(xué);2008年

6 呂殿亮;NR4A1在急性白血病的表達(dá)及其與Caspase-3的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2009年

7 王錚;S5a/angiocidin誘導(dǎo)人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞THP-1分化的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 季燕萍;熱帶爪蟾G蛋白偶聯(lián)受體的系統(tǒng)發(fā)生及比較基因組學(xué)分析[D];華東師范大學(xué);2009年

9 閔彥;α-黑素細(xì)胞刺激素在人單核細(xì)胞來(lái)源的樹突狀細(xì)胞成熟中的調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 陶然;G蛋白偶聯(lián)受體—配體相互作用網(wǎng)絡(luò)的預(yù)測(cè)方法及應(yīng)用研究[D];華東師范大學(xué);2013年

本文編號(hào)：1201204