本文關(guān)鍵詞：高氧暴露下A549細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子的表達及胰島素樣生長因子-I干預(yù)影響

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【摘要】：目的:暴露在高氧條件下蝴市組織會發(fā)生損傷,在這個過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)揮了重要的作用,本次實驗研究IGF-Ⅰ對暴露在高氧條件下的A549細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)畫鉗目關(guān)因子CHOP、 caspase-3表達以及細(xì)胞形態(tài)變化的影響。 方法:將復(fù)蘇、傳了培養(yǎng)的A549細(xì)胞株分為五組:Ⅰ組:正�？諝饨M,Ⅱ組:高氰暴露組,Ⅲ現(xiàn):高氧．+IGF-Ⅰ (1ng/ml)劑量組,Ⅳ組:高氧+IGF-Ⅰ (10ng/ml)劑量組,Ⅴ組:高氧+[GF-Ⅰ(100ng/ml)劑量組。習(xí)射新中于培養(yǎng)皿中的各組A549細(xì)胞,放入COz恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng),待次日通過倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞動態(tài)生長狀況,當(dāng)細(xì)胞匯合至50％左右時,加入不同藥物濃度IGF-Ⅰ淵予下預(yù)。其中,Ⅰ組(正�？諝饨M):將含有A549細(xì)胞的培養(yǎng)皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,并放入5%CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；Ⅱ組(高氧暴露組):將含有A549細(xì)胞的培養(yǎng)皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,為重入3L/min含5%CO2、5%N2和90%氧氣的高氧混合氣體lh后,為維持高氧環(huán)境持續(xù)給予低流量的上述混合氣體,并置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h；藥物干預(yù)組:將經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ處理后峋Ⅲ,Ⅳ、Ⅴ組細(xì)胞與高氧組一樣的方法提供的高氧環(huán)境,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h；通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡、形態(tài)變化清況；采用MTT測定正�？諝饨M、高氧暴露組和不同濃度IGF-Ⅰ干預(yù)組間的細(xì)胞存活率;采用JDAPI3走光染色觀察各組間的細(xì)胞核凋亡情況;應(yīng)用、Western-blot險測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子CHOP、Caspase-3的表達清況。 結(jié)果:倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯示高氧暴露Ⅱ組與正常Ⅰ組市目比存活的細(xì)胞明顯變少,細(xì)胞發(fā)生收縮變小、變圓,與周圍細(xì)胞分離等典型的凋亡現(xiàn)象；經(jīng)不同劑IGF-Ⅰ處理后,細(xì)胞也出現(xiàn)了凋亡現(xiàn)象,但存活的細(xì)月斷目對較多,以高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)組最顯著。細(xì)胞存活率測定顯示各組間細(xì)胞的存活率有明顯不同,經(jīng)高氧處理后的細(xì)胞存活率低,而經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ干預(yù)后的A549細(xì)胞的存活率呈增高趨勢,其中高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)組細(xì)胞存活率最高。DAPI螢光染色結(jié)果表明高氧處理后經(jīng)熒光標(biāo)記出的細(xì)胞核較多,經(jīng)不同劑量[GF-Ⅰ處理后被熒瑙示細(xì)胞核逐漸減少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)組差異顯著。Western-blot:結(jié)果顯示CHOP、Caspase-3凋亡因子的表達在高滓兀組,中顯著增加,經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ干預(yù)后,CHOP的表達均有減少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)組差異最明顯(P0.01);Caspase-3的表達均有減少趨勢,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)組差異最明顯(P0.01)。 結(jié)論:1、IGF-Ⅰ對暴露在高濃度的氧氣環(huán)境下的A549細(xì)胞具有保護作用； 2、IGF-Ⅰ與抑制A549細(xì)月冬在高濃度的氧氣環(huán)境下凋亡的作用；不同劑量濃度IGF-Ⅰ在抑制凋亡時可能具有雙向作用,IGF-Ⅰ在100ng/ml劑以量時抑制凋亡作用最強； 3、暴露在高濃度氧氣環(huán)境下的A549細(xì)胞可發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激現(xiàn)象,其凋亡因子CHOP、Caspase-3:表達增高； 4、IGF-Ⅰ能夠?qū)Ω哐醣┞稐l件下的A549細(xì)胞中的凋亡因子CHOP和Caspase-3表達降低,起到了抗凋亡的作用。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1

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本文編號：1195005