本文關(guān)鍵詞：藍(lán)萼甲素對(duì)缺氧缺血性腦損傷保護(hù)作用的研究

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【摘要】：新生兒缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic brain damage，HIBD）是指圍產(chǎn)期窒息導(dǎo)致大腦的缺氧缺血性損害，是造成新生兒死亡、神經(jīng)功能失調(diào)的主要原因之一。在發(fā)展中國(guó)家，每1000名足月新生兒就有1-3名患有缺氧缺血性腦�。╤ypoxia-ischemia encephalopathy，HIE），該病死亡率較高，并可導(dǎo)致終生殘疾。我國(guó)每年出生的新生兒有160～220萬(wàn)發(fā)生窒息，其中40萬(wàn)左右因重度腦損傷遺留癱瘓、癲癇、智力障礙等不同程度的殘疾。新生兒時(shí)期腦發(fā)育是大腦發(fā)育關(guān)鍵期，一旦發(fā)生HIE，需積極、及時(shí)采取綜合治療的措施。為減少后遺癥的發(fā)生，必須堅(jiān)持恢復(fù)期治療及早期干預(yù)康復(fù)治療。目前治療HIE的常用藥物包括紅細(xì)胞生成素、腦代謝激活劑、丹參、納絡(luò)酮及各類(lèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等。文獻(xiàn)證實(shí)頭孢曲松、環(huán)孢霉素A、NEP1-40、法舒地爾等心血管系統(tǒng)藥物可以減輕缺氧缺血造成的腦損傷；還有研究報(bào)道陽(yáng)雀花根等中藥可顯著提高小鼠抗缺血缺氧能力。本文也是致力于研究其他中草藥對(duì)新生大鼠HIBD的保護(hù)作用，希望能為缺氧缺血性腦病患兒提供更加可靠、及時(shí)的藥物治療。 現(xiàn)代藥理研究表明，藍(lán)萼香茶菜的乙醇提取液能減輕心肌缺血-再灌注損傷，保護(hù)心��；藍(lán)萼甲素可以通過(guò)抗血小板作用起到活血、心肌保護(hù)作用。并有研究證明藍(lán)萼甲素具有抗凝血的作用。鑒于藍(lán)萼甲素這些療效，我們提出藍(lán)萼甲素可能對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病也具有保護(hù)作用的設(shè)想，因此，我們用新生大鼠建立缺氧缺血性腦損傷HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型來(lái)模擬HIE，觀察藍(lán)萼甲素對(duì)新生兒HIBD的保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了研究。希望本研究能夠?yàn)槲磥?lái)藍(lán)萼甲素用于缺氧缺血性腦病患兒治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1、藍(lán)萼甲素的分離提純。藍(lán)萼甲素是從唇科香茶菜屬植物香茶菜中提取分離出的二萜化合物。 2、建立HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用出生7天的Sprague-Dawley大鼠，將選定大鼠隨機(jī)分為三組：HI手術(shù)組（n=50）、藍(lán)萼甲素處理組（n=55）、假手術(shù)組（n=50）。出生7天的Sprague-Dawley大鼠行右側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎后持續(xù)缺氧2.5小時(shí)，建立HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 3、缺氧缺血（HI）手術(shù)4周后，大鼠斷頭取腦，觀察比較手術(shù)組手術(shù)側(cè)和對(duì)照側(cè)、HI手術(shù)組與假手術(shù)組大腦的發(fā)育情況，判斷缺氧缺血對(duì)大腦發(fā)育的影響。 4、缺氧缺血（HI）手術(shù)4周后，進(jìn)行Morris水迷宮定位航行和空間探索試驗(yàn)，研究缺氧缺血對(duì)新生大鼠遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 5、TTC染色檢測(cè)藍(lán)萼甲素對(duì)新生大鼠HIBD是否有保護(hù)作用。在缺氧缺血中間恢復(fù)時(shí)，藍(lán)萼甲素處理組腹腔注射藍(lán)萼甲素。HI手術(shù)48小時(shí)后，將大鼠斷頭取腦切成2mm厚度切片，TTC染色觀察腦梗死情況。對(duì)比HI手術(shù)組和藍(lán)萼甲素處理組腦梗死情況，判斷藍(lán)萼甲素對(duì)腦損傷是否具有保護(hù)的作用。 6、研究藍(lán)萼甲素對(duì)新生大鼠HIBD保護(hù)機(jī)制。HI手術(shù)后24小時(shí)，大鼠斷頭取腦提取腦組織蛋白，通過(guò)免疫印跡（western blotting）研究相關(guān)機(jī)制，檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、通過(guò)觀察手術(shù)后腦發(fā)育情況以及神經(jīng)行為學(xué)結(jié)果，證明HIBD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立成功。 2、手術(shù)后4周，通過(guò)對(duì)比假手術(shù)組和HI手術(shù)組大腦發(fā)育情況，發(fā)現(xiàn)HI手術(shù)組手術(shù)側(cè)腦半球出現(xiàn)明顯萎縮情況（n=20，，p0.001），對(duì)側(cè)腦半球正常；假手術(shù)組大鼠大腦左右兩側(cè)均正常，說(shuō)明缺氧缺血會(huì)嚴(yán)重影響大腦發(fā)育。 3、Morris水迷宮定位航行試驗(yàn)結(jié)果顯示，HI手術(shù)組大鼠尋找平臺(tái)潛伏期時(shí)間明顯長(zhǎng)于假手術(shù)組（n=10， P 0.01）�？臻g探索試驗(yàn)結(jié)果顯示，HI手術(shù)組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)較假手術(shù)組少（n=10，P 0.01）。證明HIBD對(duì)大腦發(fā)育的影響是長(zhǎng)期性的，可導(dǎo)致大鼠遠(yuǎn)期空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙。 4、TTC染色檢測(cè)大腦梗死情況，對(duì)比HI手術(shù)組，發(fā)現(xiàn)藍(lán)萼甲素處理組可降低新生大鼠腦缺氧缺血后48小時(shí)的腦梗死面積（n=10，p0.01）。 5、新生大鼠腦缺氧缺血后cleaved caspase-3的表達(dá)量明顯升高（n=10，p0.001），表明腦損傷后凋亡增加，藍(lán)萼甲素處理組可明顯降低cleaved caspase-3（n=10，p0.01）的表達(dá)，表明藍(lán)萼甲素通過(guò)抑制凋亡起到神經(jīng)保護(hù)作用。藍(lán)萼甲素還通過(guò)降低AKT的磷酸化水平（n=10，p0.01）、升高ERK磷酸化水平（n=10，p0.01）起到保護(hù)作用。 結(jié)論： 缺氧缺血會(huì)影響新生大鼠大腦發(fā)育，導(dǎo)致大鼠遠(yuǎn)期空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙。藍(lán)萼甲素對(duì)缺氧缺血性腦損傷有保護(hù)作用，可能通過(guò)減少細(xì)胞凋亡完成。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R722.12

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 赫羽;趙立宏;;新生兒缺氧缺血性腦病的發(fā)病機(jī)制和防治進(jìn)展[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2007年10期

本文編號(hào)：1178952