本文關(guān)鍵詞：干擾素膜蛋白（IFITM）Tet-on系統(tǒng)穩(wěn)定細(xì)胞系的建立及其抗CA16病毒的初步研究

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【摘要】：背景：手足口病是一種常見(jiàn)的兒童傳染性疾病，該病以手、足和口腔粘膜皰疹或破潰后形成潰瘍?yōu)橹饕R床癥狀，可引起少數(shù)患兒產(chǎn)生心肌炎、肺水腫、無(wú)菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥，病情發(fā)展過(guò)快嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致患兒死亡，，目前仍然沒(méi)有有效的預(yù)防措施及治療手段。IFITM是一種干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗病毒蛋白，其對(duì)多種病毒均具有很好的抑制作用。因此，研究其對(duì)手足口病主要病毒CA16的抗病毒作用可為今后的預(yù)防及治療提供理論依據(jù)。 方法：通過(guò)Tet-on調(diào)控系統(tǒng)，構(gòu)建了受強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)表達(dá)ifitm1/2/3基因的HeLa細(xì)胞系，并初步探索了其對(duì)柯薩奇病毒A16（CA16）的抑制作用。首先將調(diào)控質(zhì)粒pTet-on轉(zhuǎn)染進(jìn)入HeLa細(xì)胞，通過(guò)G418篩選出陽(yáng)性克隆細(xì)胞系，在此細(xì)胞系基礎(chǔ)上共同轉(zhuǎn)染反應(yīng)質(zhì)粒pTRE2-IFITM1/2/3和伴侶質(zhì)粒pTK-Hyg，通過(guò)潮霉素篩選出單克隆細(xì)胞系，加入強(qiáng)力霉素后Western Blotting篩選出可誘導(dǎo)表達(dá)IFITM1/2/3蛋白的單克隆細(xì)胞系。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-qPCR)檢測(cè)強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)表達(dá)的IFITM蛋白對(duì)不同感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)的CA16的抑制作用。 結(jié)果：成功構(gòu)建了受強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)表達(dá)的IFITM細(xì)胞系，細(xì)胞感染不同MOI CA16病毒，Realtime PCR結(jié)果顯示IFITM蛋白對(duì)CA16病毒具有很好的抑制作用，其中IFITM3的抑制效果最為明顯。 結(jié)論：Tet調(diào)控ifitm1/2/3基因表達(dá)HeLa細(xì)胞系的成功建立，為進(jìn)一步研究ifitm基因的功能及其抗病毒機(jī)理提供了一個(gè)理想的細(xì)胞模型，同時(shí)也為手足口病的今后深入研究提供理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R725.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Replication Kinetics of Coxsackievirus A16 in Human Rhabdomyosarcoma Cells[J];Virologica Sinica;2012年04期

本文編號(hào)：1172119