本文關鍵詞：干擾素膜蛋白（IFITM）Tet-on系統(tǒng)穩(wěn)定細胞系的建立及其抗CA16病毒的初步研究

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【摘要】：背景：手足口病是一種常見的兒童傳染性疾病，該病以手、足和口腔粘膜皰疹或破潰后形成潰瘍?yōu)橹饕R床癥狀，可引起少數(shù)患兒產(chǎn)生心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥，病情發(fā)展過快嚴重時會導致患兒死亡，，目前仍然沒有有效的預防措施及治療手段。IFITM是一種干擾素誘導產(chǎn)生的抗病毒蛋白，其對多種病毒均具有很好的抑制作用。因此，研究其對手足口病主要病毒CA16的抗病毒作用可為今后的預防及治療提供理論依據(jù)。 方法：通過Tet-on調(diào)控系統(tǒng)，構(gòu)建了受強力霉素誘導表達ifitm1/2/3基因的HeLa細胞系，并初步探索了其對柯薩奇病毒A16（CA16）的抑制作用。首先將調(diào)控質(zhì)粒pTet-on轉(zhuǎn)染進入HeLa細胞，通過G418篩選出陽性克隆細胞系，在此細胞系基礎上共同轉(zhuǎn)染反應質(zhì)粒pTRE2-IFITM1/2/3和伴侶質(zhì)粒pTK-Hyg，通過潮霉素篩選出單克隆細胞系，加入強力霉素后Western Blotting篩選出可誘導表達IFITM1/2/3蛋白的單克隆細胞系。使用實時熒光定量PCR (RT-qPCR)檢測強力霉素誘導表達的IFITM蛋白對不同感染復數(shù)(multiplicity of infection, MOI)的CA16的抑制作用。 結(jié)果：成功構(gòu)建了受強力霉素誘導表達的IFITM細胞系，細胞感染不同MOI CA16病毒，Realtime PCR結(jié)果顯示IFITM蛋白對CA16病毒具有很好的抑制作用，其中IFITM3的抑制效果最為明顯。 結(jié)論：Tet調(diào)控ifitm1/2/3基因表達HeLa細胞系的成功建立，為進一步研究ifitm基因的功能及其抗病毒機理提供了一個理想的細胞模型，同時也為手足口病的今后深入研究提供理論依據(jù)。
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R725.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Replication Kinetics of Coxsackievirus A16 in Human Rhabdomyosarcoma Cells[J];Virologica Sinica;2012年04期

本文編號：1172119