本文關鍵詞：粘多糖病Ⅵ型患兒臨床特征及ARSB基因突變分析

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【摘要】：背景粘多糖�、鲂停╩ucopolysaccharidosis type Ⅵ，MPS Ⅵ）又稱Maroteaux-Lamy綜合征（MIM#253200），由Maroteaux P和Lamy M于1963年首次報道。是一種罕見的溶酶體貯積病，呈常染色體隱性遺傳。由于溶酶體內(nèi)芳香基硫酸酯酶B（N-acetylgalactosamine-4-sulfatase，arylsulfatase B，ARSB）缺乏，導致硫酸皮膚素（dermatan sulfate，DS）和硫酸軟骨素（chondroitin sulfate，CS）不能降解而蓄積在溶酶體內(nèi)，從而引起細胞損害，并且過多的硫酸皮膚素和硫酸軟骨素由尿中排出。粘多糖病Ⅵ型患病率在不同種族和地區(qū)間存在差異，約1/43261~1/1505160，中國臺灣地區(qū)患病率為1/833000，中國大陸無流行病學統(tǒng)計數(shù)據(jù)。根據(jù)發(fā)病年齡及疾病的進展速度，臨床上將粘多糖�、鲂头譃橹匦停▼雰盒停�、中間型（青少年型）和輕型（成人型）。重型粘多糖病Ⅵ型患者臨床表現(xiàn)主要為3歲前發(fā)病，身材矮小、骨骼畸形、關節(jié)僵硬、肝脾腫大、角膜混濁等，但智力正常，多于20至30歲時死于心肺并發(fā)癥。輕型患者起病晚、進展慢，存活時間較長。骨骼X線粘多糖病樣改變、尿粘多糖（glycosaminoglycan，GAG）增多有助于診斷，且尿粘多糖水平與臨床表型相關，當患者尿粘多糖與肌酐比值GAG/Cr大于200μg/mg時表現(xiàn)為重型，而當尿GAG/Cr小于100μg/mg時表現(xiàn)為輕型。確診依賴外周血白細胞或培養(yǎng)的成纖維細胞ARSB酶活性測定。ARSB基因突變分析可以進一步從分子水平明確診斷。 ARSB基因定位于染色體5q13-q14，包含8個外顯子和7個內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄一條2228bp的mRNA，編碼一條含533個氨基酸殘基的多肽。目前已報道的ARSB基因突變約150種，包括錯義突變、無義突變、剪接突變、小片段缺失及插入、大片段缺失、indels突變，其中錯義突變和無義突變最常見，約占73%。ARSB基因突變在不同種族及地區(qū)間存在差異，如在北美、南美、歐洲和澳大利亞這些國家的人群中，最為常見的突變?yōu)閜.Y210C、p.S384N、c.1143-1GC和c.1143-8TG，突變率為10%以上；在巴西，最常見的突變?yōu)?533del123，突變率為23%。Wei-De Lin等報道的9例中國臺灣地區(qū)粘多糖病Ⅵ型患兒中，p.F399L為最常見的突變，突變率為27.8%。目前尚不能完全明確基因型和表型的關系，突變p.L72R、p.Y255X等與重型相關，突變p.D83Y、p.R434I等與輕型相關，突變p.R102H、p.T442M等則與中間型相關。造血干細胞移植及重組人ARSB（如Naglazyme）酶替代治療可顯著改善粘多糖�、鲂突颊叩念A后，早期診斷，早期治療可避免患者骨骼、心肺、眼等重要臟器的不可逆損傷。對于有先證者的高危家庭進行產(chǎn)前診斷，可預防疾病發(fā)生，減輕家庭及社會負擔，改善人口素質(zhì)。 目的探討粘多糖�、鲂突純旱呐R床特征及ARSB基因突變特點，并進一步分析ARSB基因型與表型之間的關系。為今后進行粘多糖�、鲂偷倪z傳咨詢和產(chǎn)前診斷建立基礎。 方法2009年1月至2013年12月廣州市婦女兒童醫(yī)療中心內(nèi)分泌代謝科對因“矮小、骨骼畸形”等就診，疑似粘多糖病Ⅵ的患兒進行骨骼X線檢查、尿粘多糖定量篩查，并經(jīng)外周血白細胞ARSB酶活性測定確診粘多糖�、鲂突純�13例�；仡櫡治�13例粘多糖�、鲂突純旱呐R床特征，收集所有患兒及部分父母外周血標本，提取外周血基因組DNA，應用聚合酶鏈反應（PCR）及直接測序法，對患兒ARSB基因8個外顯子及其兩側側翼序列進行了突變分析，在檢出患兒ARSB基因突變后，對有標本的患兒父母DNA進行相關序列檢測，分析突變來源。對新突變位點，采用不同物種間氨基酸保守性分析、SIFT和PolyPhen-2軟件等預測新錯義突變致病性。 結果13例粘多糖�、鲂突純�,男6例,女7例,均于3歲前發(fā)病，發(fā)病年齡0.8~3歲，平均（1.5±0.8）歲，診斷年齡1.2~7.4歲，平均（3.9±2.2）歲。分別來自廣東（9例）、江西（2例）、湖南（1例）及山東（1例）4省的不相關家庭；例11患兒父母為表兄妹，其他均否認近親結婚史。13例粘多糖�、鲂突純号R床分型均為重型，主要表現(xiàn)為面容粗陋、矮小、骨骼畸形、關節(jié)僵硬活動受限、角膜渾濁、聽力下降、肝脾腫大、智力正常等。1例患兒曾因頸髓受壓，出現(xiàn)行走不穩(wěn)行頸椎脊髓減壓術，術后行走不穩(wěn)癥狀改善；1例患兒曾因腺樣體肥大睡眠打鼾，嚴重影響睡眠行腺樣體切除術，術后打鼾癥狀改善。X線骨片均符合粘多糖病樣改變，如椎體前緣“鳥嘴樣”改變、脊柱側彎或后凸、肋骨呈飄帶狀改變等；1例MRI提示頸髓受壓及放射冠、側腦室和胼胝體多發(fā)囊性變。所有患兒尿GAG均增高，（307.10±112.14）mg/L（正常參考值70mg/L），尿GAG/Cr（722.28±245.68）μg/mg；ARSB酶活性均降低，熒光法為2.70~24.90nmol/（mg·h），平均（13.29±6.22）nmol/（mg·h），[正常參考值范圍（47~169）nmol/（mg·h）]；比色法為0~0.51U/g，平均（0.24±0.18）U/g[正常參考值范圍（1.01~11.47）U/g]。對13例粘多糖病Ⅵ型患兒（26個等位基因）進行ARSB基因突變分析，共檢出11種突變，檢出率為76.9%（20/26）。11種突變中，錯義突變6種（p.L72R、p.G167R、p.Y175D、p.G303E、p.F399L和p.T442M）；無義突變4種（p.Y255X、p.R327X、p.S403X和p.S464X）；大片段缺失1種（incl. ex.2、3）。其中已知致病突變7種，包括p.L72R、p.G167R、p.G303E、p.F399L、p.T442M、p.Y255X和p.R327X；新突變4種，包括p.Y175D、p.S403X、p.S464X及大片段缺失incl. ex.2、3。已知致病突變c.1197CG（p.F399L）檢出頻率最高，為30.8%（8/26），其中1例為純合突變（父母為近親結婚）；另外已知致病突變p.R327X和新突變incl. ex.2、3分別見于2例純合突變患兒（父母均非近親結婚），其余突變僅見于個例患兒的其中一條等位基因。新錯義突變p.Y175D突變位點氨基酸在不同物種（10個物種：人、黑猩猩、家牛、家貓、羚羊、雞、甲魚、蝙蝠、馬、大鼠）間高度保守；且利用SIFT、PolyPhen-2軟件對突變p.Y175D進行蛋白功能預測，評分SIFT為0.01，PolyPhen-2為1，均提示突變氨基酸影響蛋白結構及功能，考慮p.Y175D為致病性突變。新突變大片段缺失incl. ex.2、3導致翻譯的蛋白縮短、結構改變而失去正常的催化功能，嚴重影響酶活性，猜測與重型相關。 結論本研究通過回顧分析13例粘多糖�、鲂突純旱呐R床特征，并進行ARSB基因突變分析，同時復習相關文獻，可得到以下結論： 1、重型粘多糖�、鲂突純浩鸩≡纾�3歲），病情進展迅速，臨床癥狀明顯，主要表現(xiàn)為面容粗陋、身材矮小、骨骼畸形、關節(jié)僵硬活動受限、肝脾腫大、角膜渾濁、聽力下降、智力正常等。 2、粘多糖病Ⅵ型患者雖然智力正常，但頭顱MRI可有異常的改變，如多發(fā)囊性變等；頸髓受壓是本病常見的并發(fā)癥，應提高警惕。 3、尿粘多糖（GAG）水平與粘多糖�、龌颊叩呐R床表型相關，當患者尿GAG/Cr大于200μg/mg時表現(xiàn)為重型。 4、通過ARSB基因突變分析，發(fā)現(xiàn)11種突變，，其中新突變4種，包括p.Y175D、p.S403X、p.S464X及大片段缺失incl. ex.2、3。大片段缺失incl. ex.2、3可能與重型相關。 5、突變c.1197CG（p.F399L）是本實驗ARSB基因的突變熱點，且臨床表型與重型相關。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R725.8

【參考文獻】

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1 黃永蘭;李社勇;趙小媛;范莉萍;林文春;周志紅;程靜;劉麗;;52例黏多糖病酶學分型及臨床特點分析[J];中國當代兒科雜志;2012年07期

2 趙小媛;黃永蘭;李社勇;林文春;周志紅;劉麗;;尿粘多糖定量測定及其臨床應用[J];中國兒童保健雜志;2010年11期

3 林青栻,杝安琪,賴志剛,杝PI雄,杝恩和,石志忠,no瑞芬;A novel mutation, Y255X, of the ARSB gene in a Chinese family with mucopolysaccharidosis type Ⅵ[J];Chinese Medical Journal;2004年12期

本文編號：1151380