miRNA-221對支氣管哮喘氣道炎癥的影響及肥大細胞分泌的調(diào)控
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【摘要】:目的探討microRNA-221在哮喘氣道炎癥中的表達及作用。方法選取4名符合GINA診斷標準的哮喘患兒和4名正常兒童,留取外周血檢測miRNA-221表達水平。32只周齡4-5周的健康雄性BALB/c小鼠,適應性喂養(yǎng)1周后,隨機分為4組,即正常對照組、OVA組、OVA+Anti-miR221、OVA+control Anti-miR。用卵清白蛋白腹腔注射致敏大鼠,兩周后用卵清白蛋白霧化吸入激發(fā)。對照組以生理鹽水代替卵清白蛋白腹腔注射。模型建立后,進行肺泡灌洗,分離肺組織。應用Real time Quantitative PCR法檢測miR221在各組肺組織內(nèi)的表達。BALF進行總細胞和嗜酸性粒細胞計數(shù)。HE染色觀察肺部炎癥細胞浸潤情況。結(jié)果1、哮喘患兒和正;純和庵苎猰iR221表達水平:哮喘患兒外周血miR221表達量明顯高于正常兒童(P0.05)。2、哮喘模型組與正常組肺組織miR221表達水平:哮喘模型組小鼠肺組織miR221表達明顯高于正常對照組。3、BALF細胞計數(shù):OVA哮喘模型組較正常對照組BALF細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞數(shù)明顯升高;OVA+Anti-miR221組與OVA組相比,細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞數(shù)降低,但仍高于正常對照組;OVA+control Anti-miR組與OVA組相當。4、肺組織病理:OVA哮喘模型組較正常對照組炎癥細胞浸潤明顯;OVA+Anti-mi R221組與OVA組相比,炎癥細胞浸潤有減輕;OVA+control Anti-miR組與OVA組相當。結(jié)論在哮喘患兒和OVA誘導的哮喘模型中,miR221表達水平升高。表達沉默miR221可減輕哮喘模型氣道炎癥。提示miR221可能參與了哮喘的發(fā)病過程。目的探討mi RNA-221對肥大細胞功能的影響及機制方法將培養(yǎng)的肥大細胞分為3組,即對照組、mi RNA221高表達組、mi RNA221表達沉默組,收集了LPS刺激后6、12、18小時的肥大細胞培養(yǎng)上清,應用ELISA法檢測上清IL-4濃度。應用基因芯片的方法檢測肥大細胞中表達活性升高的信號通路相關(guān)分子。結(jié)果在18小時的樣本中,mi RNA221高表達組(轉(zhuǎn)染mi RNA221mimic)IL-4水平高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義,P㩳0.05;而mi RNA221表達沉默組(轉(zhuǎn)染mi RNA221inhibitor)的IL-4水平與對照組相比無明顯差異。肥大細胞中表達活性升高的信號通路,與陽性對照組相比,mi RNA221高表達組PLC、PI3K/AKT、Ras/ERK三條信號通路相關(guān)分子表達量升高。結(jié)論mi R221可以刺激肥大細胞分泌IL-4增多,并且能夠使得PLC、PI3K/AKT、Ras/ERK三條信號通路活性升高。
【學位授予單位】:南京醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R725.6
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,本文編號:1141214
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