miRNA-221對(duì)支氣管哮喘氣道炎癥的影響及肥大細(xì)胞分泌的調(diào)控
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【摘要】:目的探討microRNA-221在哮喘氣道炎癥中的表達(dá)及作用。方法選取4名符合GINA診斷標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患兒和4名正常兒童,留取外周血檢測(cè)miRNA-221表達(dá)水平。32只周齡4-5周的健康雄性BALB/c小鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為4組,即正常對(duì)照組、OVA組、OVA+Anti-miR221、OVA+control Anti-miR。用卵清白蛋白腹腔注射致敏大鼠,兩周后用卵清白蛋白霧化吸入激發(fā)。對(duì)照組以生理鹽水代替卵清白蛋白腹腔注射。模型建立后,進(jìn)行肺泡灌洗,分離肺組織。應(yīng)用Real time Quantitative PCR法檢測(cè)miR221在各組肺組織內(nèi)的表達(dá)。BALF進(jìn)行總細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。HE染色觀察肺部炎癥細(xì)胞浸潤情況。結(jié)果1、哮喘患兒和正常患兒外周血miR221表達(dá)水平:哮喘患兒外周血miR221表達(dá)量明顯高于正常兒童(P0.05)。2、哮喘模型組與正常組肺組織miR221表達(dá)水平:哮喘模型組小鼠肺組織miR221表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組。3、BALF細(xì)胞計(jì)數(shù):OVA哮喘模型組較正常對(duì)照組BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)明顯升高;OVA+Anti-miR221組與OVA組相比,細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)降低,但仍高于正常對(duì)照組;OVA+control Anti-miR組與OVA組相當(dāng)。4、肺組織病理:OVA哮喘模型組較正常對(duì)照組炎癥細(xì)胞浸潤明顯;OVA+Anti-mi R221組與OVA組相比,炎癥細(xì)胞浸潤有減輕;OVA+control Anti-miR組與OVA組相當(dāng)。結(jié)論在哮喘患兒和OVA誘導(dǎo)的哮喘模型中,miR221表達(dá)水平升高。表達(dá)沉默miR221可減輕哮喘模型氣道炎癥。提示miR221可能參與了哮喘的發(fā)病過程。目的探討mi RNA-221對(duì)肥大細(xì)胞功能的影響及機(jī)制方法將培養(yǎng)的肥大細(xì)胞分為3組,即對(duì)照組、mi RNA221高表達(dá)組、mi RNA221表達(dá)沉默組,收集了LPS刺激后6、12、18小時(shí)的肥大細(xì)胞培養(yǎng)上清,應(yīng)用ELISA法檢測(cè)上清IL-4濃度。應(yīng)用基因芯片的方法檢測(cè)肥大細(xì)胞中表達(dá)活性升高的信號(hào)通路相關(guān)分子。結(jié)果在18小時(shí)的樣本中,mi RNA221高表達(dá)組(轉(zhuǎn)染mi RNA221mimic)IL-4水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P㩳0.05;而mi RNA221表達(dá)沉默組(轉(zhuǎn)染mi RNA221inhibitor)的IL-4水平與對(duì)照組相比無明顯差異。肥大細(xì)胞中表達(dá)活性升高的信號(hào)通路,與陽性對(duì)照組相比,mi RNA221高表達(dá)組PLC、PI3K/AKT、Ras/ERK三條信號(hào)通路相關(guān)分子表達(dá)量升高。結(jié)論mi R221可以刺激肥大細(xì)胞分泌IL-4增多,并且能夠使得PLC、PI3K/AKT、Ras/ERK三條信號(hào)通路活性升高。
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R725.6
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,本文編號(hào):1141214
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