發(fā)布時間：2017-11-01 13:36

  本文關鍵詞：Sonic hedgehog信號通路在支氣管哮喘中的作用

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【摘要】：背景和目的： 支氣管哮喘(哮喘)是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病,而信號轉導在其中起著決定性的作用。Sonic hedgehog (SHH)信號通路在胚胎期發(fā)育和生后組織或器官的完整和功能的發(fā)育保持起重要作用。SHH信號通路參與哺乳動物胎肺的分化和發(fā)育,包括肺胚芽、呼吸道上皮細胞和血管形成以及肺基質和支氣管軟骨的分化形成等。近年來發(fā)現(xiàn)肺部小細胞癌、急性肺損傷和慢性肺部纖維化等疾病中SHH信號通路異常激活。而哮喘肺部損傷修復與胎肺發(fā)育有一定相似之處,并且SHH信號通路與免疫系統(tǒng)可能存在相互作用。但SHH信號通路與哮喘之間關系的研究無論是整體上還是離體上均未見相關報道。因此本課題主要研究SHH信號通路在哮喘中的作用和作用機制。 方法： 整體實驗首先采用卵蛋白(OVA)誘導ICR小鼠建立哮喘動物模型；描記小鼠氣道反應性RL；計算支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的白細胞總數、嗜酸性粒細胞數、巨噬細胞數和淋巴細胞數；ELISA法檢測BALF中白介素-4(IL-4)水平；肺組織勻漿后用RT-PCR方法測定肺組織中IL-5、Mu5ac、SHH和Gli1基因的表達,以及用Western blot方法測定SHH和Gli1蛋白的表達；采用組織切片H-E染色和PAS染色的方法測定肺組織炎癥和粘蛋白的情況；采用免疫組化方法檢測小鼠肺組織SHH、Ptch1和Gli1的表達。離體實驗用SHH重組蛋白刺激支氣管上皮細胞(BEAS-2B),誘導上皮細胞粘蛋白Mu5ac基因表達；采用Smo抑制劑GDC-0449預處理,研究SHH信號通路在脂多糖(LPS)誘導的小鼠巨噬細胞(RAW264.7)過程中對CC-chemokine ligand2(CCL2)表達的調節(jié)作用。 結果： (1)OVA誘導小鼠哮喘模型：與對照組相比,模型組小鼠氣道反應RL增高；BALF中白細胞總數、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞數目均顯著上升；BALF中IL-4蛋白水平升高；肺組織勻漿中IL-5和Mu5ac的mRNA表達上調；肺組織切片H-E染色顯示炎癥細胞浸潤和聚集增多；肺組織切片PAS染色表明粘蛋白增多。 (2)SHH信號通路在小鼠哮喘模型中的表達：與對照組相比,模型組小鼠肺組織SHH、Ptch1釉Gli1,無論是在mRNA水平還是蛋白水平都顯著升高；肺組織免疫組化切片不僅顯示SHH蛋白、Ptch1蛋白和Gli1蛋白明顯升高,而且也表明SHH蛋白主要由支氣管上皮細胞分泌,Ptch1蛋白主要表達于炎癥細胞膜表面,Gli1在支氣管上皮細胞和炎癥細胞內均有表達。 (3)SHH重組蛋白誘導Mu5ac基因的表達升高：在離體實驗中,SHH重組蛋白刺激支氣管上皮細胞BEAS-2B細胞,在24小時能誘導上皮細胞粘蛋白Mu5ac和Gli1基因的表達上調。但在48小時和72小時變化不明顯。 (4)Smo抑制劑GDC-0449抑制CCL2基因表達：離體細胞實驗發(fā)現(xiàn),GDC-0449能有效的抑制由LPS誘導的RAW264.7細胞CCL2基因表達。 結論： 實驗結果表明在小鼠支氣管哮喘中,SHH信號通路是異常激活的。提示SHH信號通路可能參與哮喘的發(fā)生發(fā)展；誘導粘蛋白分泌和炎癥細胞相關因子的表達可能是SHH信號通路作用于哮喘發(fā)生過程中的機制之一。提示SHH信號通路可能是治療哮喘的潛在靶點。
【關鍵詞】：SHH信號通路 支氣管哮喘 Mu5ac CCL2
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略語中英文對照10-11
• 目次11-12
• 1 引言12-16
• 2 材料與方法16-29
• 2.1 材料16-19
• 2.2 實驗方法19-28
• 2.3 統(tǒng)計學分析28-29
• 3 實驗結果29-43
• 3.1 OVA誘導的ICR小鼠哮喘模型的建立29-34
• 3.2 SHH信號通路在哮喘模型小鼠中的表達34-39
• 3.3 離體實驗中SHH信號通路對人支氣管上皮細胞和小鼠巨噬細胞的影響39-43
• 4 討論43-45
• 5 結論45-46
• 6 不足和進一步工作展望46-47
• 參考文獻47-52
• 綜述52-62
• 參考文獻58-62
• 作者簡歷及在讀期間所發(fā)表的論文62

【共引文獻】

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本文編號：1127088