發(fā)布時間：2017-10-31 18:23

  本文關(guān)鍵詞：超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪對兔動脈損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的影響

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【摘要】：球囊擴張或支架植入現(xiàn)已成為治療小兒先天性血管狹窄性疾病的主要手段，即使采用藥物涂層支架后術(shù)后3-6月內(nèi)再狹窄（Restenosis，RS）的發(fā)生率依然達(dá)到10%-15%[1]。 再狹窄的發(fā)生是諸多因素參與的復(fù)雜過程，包括內(nèi)皮功能受損，炎癥反應(yīng)，血栓形成，平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscle cells，VSMC）表型轉(zhuǎn)換、增殖遷移，細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）分泌聚集，血管重塑一系列病理改變。研究證實，單一抗VSMC增殖或抗血栓形成，無法消除內(nèi)皮損傷后的內(nèi)膜增生,綜合治療在再狹窄防治中漸漸得到重視。近年來研究發(fā)現(xiàn)，中藥川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）具有抑制平滑肌細(xì)胞增殖，降低血小板粘附、聚集，防止血栓形成，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用，在再狹窄防治綜合治療方面漸漸體現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。本實驗在前期研究基礎(chǔ)上，研究超聲微泡介導(dǎo)TMP對兔髂動脈內(nèi)皮損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)作用及對血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表達(dá)的影響，初步探討超聲微泡介導(dǎo)TMP靶向釋藥防治再狹窄的有效性及可能的作用機制。 目的： 利用不同直徑球囊擴張損傷內(nèi)皮建立低齡兔腹主動脈狹窄模型，超聲與病理結(jié)合評價血管狹窄程度和內(nèi)膜增生，探討球囊直徑對未成年兔動脈內(nèi)皮損傷后內(nèi)膜增生的影響；采用優(yōu)化球囊建立髂動脈內(nèi)膜增生模型，靜脈注射自制TMP脂質(zhì)微泡（Tramethylpyrazine combiningLiposome Microbubbles，，TLM）混懸液聯(lián)合低頻超聲對損傷段血管進(jìn)行干預(yù)，研究超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪靶向釋藥對血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)作用，通過對比不同時間段和不同干預(yù)方式的治療效果，初步探討TMP防治再狹窄的有效性及可能作用機制。 方法： ①川芎嗪納米脂質(zhì)微泡的制備和性能檢測：采用薄膜分散法及機械振蕩法制備人血白蛋白改良脂質(zhì)微泡,光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)、進(jìn)行濃度記數(shù)；Malvern激光測量儀檢測其粒徑大小、分布和zata電位。 ②兔動脈球囊損傷后血管再狹窄模型的建立：新西蘭大白兔25只，日齡(80±5)天，隨機分為建模組和空白組，建模組分別采用直徑2.5mm、3.0mm、3.5mm、4.0mm球囊擴張術(shù)損傷腹主動脈內(nèi)皮，空白組不做任何處理，分別于術(shù)后1、2、4周采用高頻血管超聲測量腹主動脈管腔內(nèi)徑，及相應(yīng)的血流動力學(xué)變化，HE染色和Masson染色測量術(shù)后管腔面積，內(nèi)、中膜面積變化情況，與各觀察點超聲檢測結(jié)果做對比分析。 ③超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪不同時間給藥對兔動脈球囊損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)效果研究：新西蘭大白兔單側(cè)髂動脈狹窄模型25只，日齡（90±10）天，隨機平均分為5組，A組：空白組，B組：模型組，C組：超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪術(shù)后即刻給藥，D組：超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪術(shù)后1周給藥，E組：超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪術(shù)后3周給藥。各組連續(xù)干預(yù)7天，術(shù)后4周取損傷處血管，HE染色及彈力纖維染色計算血管管腔面積、內(nèi)膜面積及中膜面積、內(nèi)中膜面積比和狹窄率。 ④超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪不同干預(yù)方式對兔動脈球囊損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)效果研究：新西蘭大白兔25只，日齡(90±10)天，隨機平均分為5組，A：模型組（Model組）；B：川芎嗪組（TMP組）；C：川芎嗪聯(lián)合靶向微泡破裂組（TMP+LM+US組）；D：低頻超聲輻照組（US組）；E：空白微泡聯(lián)合低頻超聲輻照組（LM+US組）。各實驗組術(shù)后即刻開始干預(yù)，連續(xù)7天，術(shù)后4周處死實驗動物，病理觀察其管腔面積及內(nèi)中膜面積比變化情況，免疫組化檢測血管內(nèi)膜VEGF表達(dá)改變。 結(jié)果 ①自制川芎嗪脂質(zhì)微泡，形態(tài)好，粒徑分布均勻，理化性質(zhì)穩(wěn)定。光鏡觀察其分布均勻，呈圓球狀,平均粒徑為（516.5±12.6）nm，平均濃度為8.03109/ml,表面電位為(-2.6±0.4)mv。 ②2.5mm球囊組、3.0mm球囊組、3.5mm球囊組術(shù)后28天超聲測量直徑狹窄率高于正常對照組和4.0mm球囊組（P＜0.05）。各建模組術(shù)后4周新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜增生指數(shù)較正常對照組增加（P＜0.01），2.5mm球囊組、3.0mm球囊組、3.5mm球囊組球囊血管直徑比例與新生內(nèi)膜面積（r2=0.781，P=0.000）和內(nèi)膜增生指數(shù)（r2=0.784，P=0.000）顯著正相關(guān)，4.0mm球囊組雖然球囊血管直徑比例最高，但新生內(nèi)膜面積和內(nèi)膜增生指數(shù)低于3.5mm球囊組（P＜0.05）。 ③與空白組相比，其余各組新生內(nèi)膜面積和內(nèi)中膜面積比均增加顯著（P＜0.01），模型組增加最明顯（P＜0.05），而中膜面積差異不大（P＞0.05）。相比模型組組，術(shù)后即刻給藥組、術(shù)后1周給藥組新生內(nèi)膜面積和內(nèi)中膜面積比均顯著減少（P＜0.05或P＜0.01），術(shù)后1周給藥組內(nèi)新生膜面積和內(nèi)中膜面積比下降最明顯，內(nèi)中膜面積比較模型組組下降0.99；相比模型組組，術(shù)后3周給藥組組新生內(nèi)膜面積變化不大，內(nèi)中膜面積比減少（P＜0.05）。 ④模型組髂外動脈新生內(nèi)膜面積大于髂總動脈（P=0.034），而內(nèi)中膜面積比二者差異不大（P=0.134）。與模型組相比，TMP組、TMP+LM+US組、LM+US組和US組髂外動脈新生內(nèi)膜面積和內(nèi)中膜面積比均顯著小于模型組（P＜0.01或P＜0.05），TMP+LM+US組減少最為顯著，髂外動脈內(nèi)中膜面積比較模型組下降0.996（t=4.854，P=0.008）。免疫組織化學(xué)分析，與模型組相比，TMP組、TMP+LM+US組髂外動脈內(nèi)膜VEGF表達(dá)量降低（P＜0.01），TMP+LM+US組降低最多，US組和LM+US組VEGF表達(dá)量變化不大（P＞0.05）；與TMP組相比，TMP+LM+US組VEGF表達(dá)量降低明顯（P＜0.05）。 結(jié)論： 本研究結(jié)果證實：利用球囊內(nèi)皮剝脫法可成功建立未成年兔動脈再狹窄模型，球囊血管直徑比值1.2-1.8范圍內(nèi)，伴隨球囊直徑增大，內(nèi)膜增生程度加重。高頻血管超聲可以動態(tài)評價血管再狹窄模型,與病理結(jié)果對比有良好的一致性。超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪術(shù)后即刻給藥可降低給藥劑量同時有效減輕損傷內(nèi)、中膜的病理性增生，下調(diào)內(nèi)膜VEGF表達(dá)，在防治介入術(shù)后血管再狹窄發(fā)生方面前景廣闊。
【關(guān)鍵詞】：川芎嗪 新西蘭大白兔 低頻超聲 微泡 內(nèi)膜增生
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-12
• ABSTRACT12-17
• 前言17-19
• 第一部分 川芎嗪納米脂質(zhì)微泡制備及其性能檢測19-25
• 1.材料與方法19-21
• 2.實驗結(jié)果21
• 3.討論21-23
• 4.小結(jié)23-24
• 附圖24-25
• 第二部分 兔動脈球囊損傷后血管再狹窄模型的建立25-37
• 1 材料與方法25-30
• 2 結(jié)果30-32
• 3 討論32-34
• 4 小結(jié)34-35
• 附圖35-37
• 第三部分 超聲微泡介導(dǎo)川芎嗪對兔動脈損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的價值探討37-55
• （一）不同時間給藥對兔動脈球囊損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)效果評價37-44
• 1 材料與方法38-39
• 2 結(jié)果39-42
• 3 討論42-43
• 4 小結(jié)43-44
• （二）不同干預(yù)方案對兔動脈球囊損傷后血管結(jié)構(gòu)重建的干預(yù)效果評價44-50
• 1 材料與方法44-47
• 2 結(jié)果47-48
• 3 討論48-50
• 4 小結(jié)50
• 總結(jié)50-51
• 附圖51-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 全文總結(jié)63-64
• 文獻(xiàn)綜述64-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄72-73

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1123238