發(fā)布時(shí)間：2017-10-26 11:00

  本文關(guān)鍵詞：手足口病相關(guān)病毒VP1蛋白及其菌蛻嵌合抗原免疫效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： 腸道病毒71型 柯薩奇B3病毒 包膜蛋白VP1 細(xì)菌菌蛻

【摘要】：手足口�。℉and-food-and-mouth disease）是由腸道病毒引起的全球性傳染病，在世界各地均有不同規(guī)模的爆發(fā)流行，我國自1981年在上海始見本病，，以后北京、河北、天津、福建、吉林、山東、湖北、安徽、湖北、廣東等十幾個(gè)省市均有報(bào)道。手足口病多發(fā)生于5歲以下兒童，報(bào)告的病例以嬰幼兒為主，可引起手、足、口腔等部位的皰疹，少數(shù)患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜炎等并發(fā)癥，個(gè)別重癥患兒甚至死亡，已成為世界性的公共衛(wèi)生問題，引起了廣泛重視。為加強(qiáng)手足口病防治工作，我國衛(wèi)生部將手足口病列入傳染病防治法規(guī)定的丙類傳染病進(jìn)行管理。目前，在全世界范圍內(nèi)還缺乏有效地抗病毒藥物，研制有效的疫苗是控制手足口病感染流行的最有效策略。本論文針對(duì)手足口病的兩種相關(guān)病毒，設(shè)計(jì)并測(cè)試了以病毒包膜蛋白為基礎(chǔ)的候選疫苗分子，為手足口病的有效預(yù)防奠定研究基礎(chǔ)。 一、VP1抗原的免疫效應(yīng)及交叉保護(hù)作用 引起手足口病的主要病毒包括腸道病毒71型和柯薩奇病毒組。有研究表明VP1蛋白作為病毒的主要抗原，在小鼠模型上針對(duì)病毒感染可提供一定的保護(hù)效果。本研究中我們應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)分別重組制備了腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇B3病毒（CB3）的VP1蛋白。以EV71抗原VP1（EVP1）、CB3抗原VP1（CVP1）為單一或混合免疫原分別對(duì)成年BALB/C小鼠進(jìn)行免疫，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生了較高的特異抗體效價(jià)，表明VP1蛋白具有良好的免疫原性；免疫血清的病毒中和活性測(cè)試顯示EVP1免疫組血清對(duì)EV71病毒的中和效價(jià)為1：832，CVP1免疫組血清對(duì)CB3病毒的中和效價(jià)為1：1024；在對(duì)其子代新生乳鼠的攻毒試驗(yàn)中，兩種VP1抗原均可對(duì)特異病毒提供較好的保護(hù)效果，EVP1免疫組對(duì)160LD50的EV71病毒攻毒可提供完全保護(hù)，CVP1免疫組對(duì)150LD50的CB3病毒攻毒保護(hù)率達(dá)88.9%；提高攻毒劑量EVP1抗原免疫組針對(duì)200LD50的EV71病毒攻毒保護(hù)存活率達(dá)70%，CVP1抗原免疫組對(duì)180LD50的CB3病毒攻毒保護(hù)存活率達(dá)75%。進(jìn)一步的病理分析結(jié)果顯示，相對(duì)于攻毒組嚴(yán)重的肺組織損傷，心肌炎，腸道等病理損傷，免疫保護(hù)組小鼠各器官病理損傷減輕或者消失。在兩種抗原的交叉保護(hù)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)EVP1免疫組對(duì)150LD50的CB3病毒保護(hù)效果達(dá)60%，而CVP1免疫組對(duì)高劑量的EV71病毒沒有保護(hù)效果，對(duì)低劑量的EV71病毒（15LD50）攻擊的保護(hù)效果僅有27.3%。 此外，我們還成功構(gòu)建了包含EVP1與CVP1分子結(jié)構(gòu)的融合蛋白ECVP1。經(jīng)原核表達(dá)和親和層析純化獲得目的蛋白，并初步驗(yàn)證其免疫反應(yīng)性，ECVP1可同時(shí)被針對(duì)兩種病毒的特異抗血清識(shí)別。 二、VP1抗原嵌合菌蛻構(gòu)建及免疫效應(yīng)研究 本研究利用實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的革蘭氏陰性菌通用型夾心外膜展示載體pSOMPA，成功將EVP1或CVP1分子在O157：H7菌蛻外膜上錨定表達(dá)。在新構(gòu)建的嵌合菌蛻（EBGs，CBGs）結(jié)構(gòu)中，將原有的O157：H7細(xì)菌膜表面抗原與新的EV71保護(hù)性抗原EVP1或CB3保護(hù)性抗原CVP1共同表達(dá)于菌蛻外膜。兩種嵌合菌蛻免疫小鼠后除了誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生抗O157：H7菌蛻特異抗體（抗intimin特異抗體）外，還誘導(dǎo)產(chǎn)生了抗VP1抗原的特異抗體。與陰性對(duì)照相比，嵌合菌蛻（EBGs或CBGs）不但可以保護(hù)小鼠抵抗20MLD的E.coli O157:H7活菌的灌胃攻擊（70%或75%），同時(shí)免疫所產(chǎn)子代小鼠對(duì)致死劑量（2LD50）的同種病毒EV71或CB3的攻毒有免疫保護(hù)能力，EBGs免疫組可提供100%的完全保護(hù)，CBGs免疫組保護(hù)率達(dá)到87.5%；當(dāng)攻毒劑量提高時(shí)，EBGs組抵抗5LD50的EV71攻擊的保護(hù)率為50%，CBGs免疫組抵抗5LD50的CB3病毒攻擊的保護(hù)率為37.5%。因此，采用VP1抗原嵌合表達(dá)的O157：H7嵌合菌蛻免疫策略既能使機(jī)體防護(hù)O157:H7病原菌的感染，又能提供對(duì)EV71和CB3病毒的免疫保護(hù)，可以為新型聯(lián)合疫苗的發(fā)展提供基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：腸道病毒71型 柯薩奇B3病毒 包膜蛋白VP1 細(xì)菌菌蛻
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R725.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一部分 病毒抗原 VP1s 分子重組制備及其免疫效果研究12-32
• 1. 材料與方法12-19
• 2. 結(jié)果19-30
• 3. 討論30-32
• 第二部分 VP1s 抗原嵌合菌蛻構(gòu)建及其免疫效應(yīng)研究32-49
• 1. 材料與方法32-36
• 2. 結(jié)果36-47
• 3. 討論47-49
• 總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55-56
• 在學(xué)期間研究成果56-57
• 致謝57-58
• 綜述58-63
• 參考文獻(xiàn)61-63

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1098342