本文關(guān)鍵詞：脂多糖對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞NgR表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 少突膠質(zhì)細(xì)胞前體 小膠質(zhì)細(xì)胞 Nogo受體 Toll樣受體4 腫瘤壞死因子α

【摘要】：目的：分離和培養(yǎng)早產(chǎn)大鼠腦組織MG和OPCs；構(gòu)建NgR特異性shRNA慢病毒載體；觀察脂多糖誘導(dǎo)新生鼠小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞前體NgR的表達(dá)及變化，了解NgR的表達(dá)在TLR-4介導(dǎo)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子中的作用。 方法：采用振蕩和差速貼壁法體外純化培養(yǎng)MG和OPCs，分別用特異性抗體CD11b和O4進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定；構(gòu)建NgR特異性shRNA的重組慢病毒載體，慢病毒載體導(dǎo)入NgR特異性siRNA沉默NgR基因；本實(shí)驗(yàn)分為7組，第一組（OPCs單獨(dú)培養(yǎng)對(duì)照組)：在培養(yǎng)液中加入與對(duì)照組LPS相同體積的DMEM/F12；第二組（OPCs單獨(dú)培養(yǎng)誘導(dǎo)組）：在培養(yǎng)液中加入100μg/L LPS；第三組（OPCs和MG共同培養(yǎng)對(duì)照組）：在培養(yǎng)液中加入與對(duì)照組LPS相同體積的DMEM/F12；第四組（OPCs和MG共同培養(yǎng)誘導(dǎo)組）在培養(yǎng)液中加入100μg/L LPS；第五組（OPCs和MG共同培養(yǎng)加TLR-4抑制劑誘導(dǎo)組）：在培養(yǎng)液加入100μg/L的TAK-242，24h后再加入脂多糖100μg/L；第六組（NgRShRNA轉(zhuǎn)染OPCs共同培養(yǎng)誘導(dǎo)組）：在培養(yǎng)液中加入100μg/L LPS；第七組（NgRShRNA轉(zhuǎn)染MG單獨(dú)培養(yǎng)誘導(dǎo)組）：在培養(yǎng)液中加入100μg/L LPS。各組培養(yǎng)48h。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MG、OPCs的NgR和MG的TLR-4基因的表達(dá)情況，并用ELISA測(cè)各組TNF-α的含量。 結(jié)果：1、用振蕩和差速貼壁法培養(yǎng)出大量、高純度的小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞前體，并分別用特異性抗體CD11b和O4成功鑒定培養(yǎng)出細(xì)胞。2、成功構(gòu)建出了NgR特異性shRNA的重組慢病毒載體，并從分子水平抑制了NgR基因的表達(dá)。3、第三、四、五、七組MG的TLR-4基因表達(dá)量的2-ΔΔct值分別為0.4005±0.2384、1.2010±0.3553、0.1023±0.4543、0.4896±0.2006。LPS誘導(dǎo)組較其他對(duì)照組及處理組的小膠質(zhì)細(xì)胞的TLR-4的表達(dá)水平均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；4、第一、二、三、四、五、六、七組TNF-α量（pg/ml）分別為9.6408±0.6607、10.6483±0.3490、21.7436±1.6115、130.0370±1.5246、83.6709±1.9950、107.0324±2.8725、100.5844±2.9576。OPCs經(jīng)LPS誘導(dǎo)后不能釋放TNF-α，MG經(jīng)LPS誘導(dǎo)后較其對(duì)照組及處理組的TNF-α的含量顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。5、第三、四、五、七組MG的NgR基因表達(dá)量的2-ΔΔct值分別為0.1048±0.0305、1.0758±0.1859、0.4195±0.1121、0.1145±0.0441。第一、二、三、四、五、六組OPCs的NgR基因表達(dá)量的2-ΔΔct值分別為1.0243±0.2729、3.2343±0.4183、0.4053±0.1253、10.9138±0.3910、3.8903±0.4886、0.7659±0.2766。LPS誘導(dǎo)組較其他對(duì)照組及處理組的MG和OPCs的NgR的表達(dá)水平均顯著增高，，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：1.振蕩和差速貼壁可以培養(yǎng)出小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞前體。2、通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了化學(xué)合成的NgR shRNA慢病毒載體能夠特異性抑制神經(jīng)細(xì)胞中NgR的表達(dá)，為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)奠定了正確基礎(chǔ)。3、細(xì)菌感染、炎癥使小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞前體的NgR表達(dá)增高。4、脂多糖誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)大量TLR-4的需要NgR的介導(dǎo)，TLR-4可能存在上調(diào)NgR基因的表達(dá)的作用。
【關(guān)鍵詞】：少突膠質(zhì)細(xì)胞前體 小膠質(zhì)細(xì)胞 Nogo受體 Toll樣受體4 腫瘤壞死因子α
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R722.1
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-17
• 研究材料（資料、內(nèi)容）與方法17-30
• 1. 研究?jī)?nèi)容17
• 1.1 早產(chǎn) SD 大鼠 OPCs 和 MG 的分離培養(yǎng)和鑒定17
• 1.2 NgR 特異性 shRNA 慢病毒載體的構(gòu)建17
• 1.3 觀察 NgR 及 TLR-4 基因的表達(dá)17
• 2. 材料與方法17-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-29
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理29
• 4. 實(shí)驗(yàn)流程29-30
• 結(jié)果30-38
• 1. 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果30-31
• 2. NgR 干擾的沉默效率31
• 3. 分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-38
• 討論38-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 綜述50-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果64-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：1095266