本文關(guān)鍵詞：柯薩奇病毒B3感染Hela細(xì)胞后Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9 mRNA及蛋白的表達(dá)

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【摘要】：目的觀察CVB3感染Hela細(xì)胞后促凋亡基因Bax、Bim Caspase-3及caspase-9mRNA和蛋白表達(dá)的變化。 方法將Hela細(xì)胞分為未予CVB3感染的對照組和CVB3感染的病毒組,取3h、6h、9h、12h、24h共5個時間點,采用RT-PCR、 Western Blot分別檢測Bax、Bim、Caspase-3及caspase-9mRNA和蛋白的表達(dá)。 結(jié)果1.Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9mRNA在對照組和病毒組Hela細(xì)胞中均有表達(dá),且在各自組內(nèi)差異均無顯著性(P0.05)；病毒組Bax、Bim mRNA表達(dá)在24h時間點均低于對照組(P0.05)。對照組與病毒組中Caspase-3、Caspase-9mRNA在組內(nèi)各時間點間的表達(dá)差異均無顯著性(P0.05)；病毒組Caspase-9mRNA表達(dá)較在24h時間點較對照組降低(P0.05),而Caspase-3mRNA表達(dá)組間各時間點比較差異無顯著性(P0.05)。 2. Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)在對照組中各時間點均有表達(dá),但差異均無顯著性(P0.05)。在病毒組中,Bax蛋白在24h時間點表達(dá)下降,與組內(nèi)各時間點比較差異均有顯著性(P0.05),且病毒組表達(dá)明顯低于對照組(P0.05)；Bim蛋白表達(dá)隨感染時間延長而下降(P0.05),且組間比較9h、12h、24h時間點蛋白表達(dá)病毒組低于對照組(P0.05)。病毒組Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)均在24h點明顯降低(P0.05),且低于對照組24h時間點(P0.05)；此外在對照組中Cleaved Caspase-9蛋白表達(dá)在12h點明顯高于其他各時間點(P0.05)；病毒組Cleaved Caspase-9蛋白表達(dá)在3h及6h點與9h、12h、24h時間點間比較差異有顯著性(P0.05),組間比較9h、12h時間點明顯高于對照組(P0.05)、而24h點明顯低于對照組(P0.05)；將Cleaved Caspase-9蛋白表達(dá)值與Caspase-9蛋白表達(dá)值比較,對照組中Cleaved Caspase-9/Caspase-9表達(dá)在12h時間點增高,差異有顯著性(P0.05),病毒組中Cleaved Caspase-9/Caspase-9表達(dá)在3h、6h、9h各時間點比較,差異無顯著性(P0.05),但是隨感染時間的延長表達(dá)增強,至12h時間點出現(xiàn)增高,24h時間點明顯增強。 結(jié)論1.CVB3感染Hela細(xì)胞后Bax、Bim mRNA在24h時間點表達(dá)降低；Bax蛋白表達(dá)在病毒感染后24h時間點明顯降低,而Bim蛋白表達(dá)隨感染時間延長而下降,至24h時間點明顯下降。 2.CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-3mRNA表達(dá)無明顯變化,而Caspase9mRNA在24h時間點表達(dá)降低；Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)均在病毒感染后24h時間點降低,而Cleaved Caspase-9蛋白表達(dá)在病毒感染后12h時間點最強。 3. Bax、Bim、Caspase-3、Caspase-9均在CVB3誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：Hela細(xì)胞 柯薩奇病毒B3 Bax Bim Caspase-3 Caspase-9
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 符號說明11-12
• 1 緒論12-15
• 2 材料和方法15-24
• 2.1 實驗材料15-16
• 2.1.1 細(xì)胞與病毒株15
• 2.1.2 主要試劑15-16
• 2.1.3 主要試劑的配置16
• 2.2 實驗儀器和設(shè)備16-17
• 2.3 實驗方法17-23
• 2.3.1 CVB3病毒擴增17
• 2.3.2 CVB3病毒毒力的測定17
• 2.3.3 實驗?zāi)Ｐ偷慕?/span>17-18
• 2.3.4 Hela細(xì)胞中總RNA的提取18-19
• 2.3.5 RNA的鑒定19
• 2.3.6 cDNA的合成19-20
• 2.3.7 RT-PCR的擴增20-21
• 2.3.8 RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物的電泳鑒定21
• 2.3.9 總蛋白的提取21
• 2.3.10 蛋白電泳凝膠的制備21-22
• 2.3.11 電泳22
• 2.3.12 轉(zhuǎn)膜22
• 2.3.13 封閉22
• 2.3.14 孵育一抗22-23
• 2.3.15 洗脫23
• 2.3.16 孵育二抗23
• 2.3.17 第2次洗脫23
• 2.3.18 顯色反應(yīng)23
• 2.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 3 結(jié)果24-34
• 3.1 CVB3感染Hela細(xì)胞后Bax、Bim的表達(dá)24-27
• 3.1.1 CVB3感染Hela細(xì)胞后Bax mRNA的表達(dá)24-25
• 3.1.2 CVB3感染Hela細(xì)胞后Bax蛋白的表達(dá)25
• 3.1.3 CVB3感染Hela細(xì)胞后Bim mRNA的表達(dá)25-26
• 3.1.4 CVB3感染Hela細(xì)胞后Bim蛋白的表達(dá)26-27
• 3.2 CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-3、Caspase-9的表達(dá)27-34
• 3.2.1 CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-3 mRNA的表達(dá)27-28
• 3.2.2 CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-3蛋白的表達(dá)28-29
• 3.2.3 CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-9 mRNA的表達(dá)29-30
• 3.2.4 CVB3感染Hela細(xì)胞后Caspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表達(dá)30-34
• 4 討論34-38
• 4.1 細(xì)胞的選擇34
• 4.2 CVB3感染Hela細(xì)胞后,Bax、Bim表達(dá)的變化34-36
• 4.3 CVB3感染Hela細(xì)胞后, Caspase-3、Casapse-9表達(dá)的變化36-38
• 5 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果目錄52-53
• 致謝53

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1080229