本文關(guān)鍵詞：miRNA-221-3p在肥大細(xì)胞分泌過程中作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： MiR-221 肥大細(xì)胞 IL-4 PTEN P38

【摘要】：目的探討miRNA-221-3p對肥大細(xì)胞分泌IL-4的影響及可能機(jī)制方法：利用脂多糖LPS刺激小鼠肥大細(xì)胞P815,采用定量RT-PCR技術(shù)檢測P815中miRNA-221-3p(以下簡寫為miR-221)的變化。將P815細(xì)胞分為空白對照組、miR-221過表達(dá)組(轉(zhuǎn)染慢病毒載體)、miR-221表達(dá)沉默組(轉(zhuǎn)染miR-221抑制物)及轉(zhuǎn)染試劑組,利用ELISA檢測不同的miR-221表達(dá)量對細(xì)胞上清IL-4濃度的影響。在進(jìn)一步機(jī)制研究中,利用熒光素酶報(bào)告基因方法、基因芯片技術(shù)及Western Blot技術(shù),初步確定可能參與miRNA-221刺激肥大細(xì)胞分泌IL-4過程的靶基因及信號通路。為了進(jìn)一步印證,在miRNA-221過表達(dá)細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染靶基因過表達(dá)慢病毒使其表達(dá)量增加,及使用通路抑制劑干預(yù),來觀察IL-4的表達(dá)水平的變化。結(jié)果LPS刺激后P815中miR-221相對表達(dá)量增加(P0.05)。而miR-221過表達(dá)組IL-4水平高于空白對照組,miR-221表達(dá)沉默組的IL-4水平低于空白對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。生物信息學(xué)分析、熒光素酶報(bào)告基因方法及Western Blot技術(shù)證實(shí)PTEN為miR-221靶基因。miR-221+PTEN過表達(dá)組中,細(xì)胞上清液中IL-4的濃度較miR-221過表達(dá)組降低(P0.05)。相較于空白對照組,在miR-221過表達(dá)組中,基因芯片結(jié)果提示Toll樣受體通路整體表達(dá)量增加,Western Blot印證磷酸化P38蛋白水平增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相較于miR-221過表達(dá)組,miR-221+P38信號通路抑制劑組中細(xì)胞上清IL-4濃度下降(P0.05)。結(jié)論miR-221可以刺激肥大細(xì)胞分泌IL-4增多,抑制miR-221則使得肥大細(xì)胞分泌IL-4降低。而miRNA-221對P815分泌IL-4的調(diào)節(jié)作用是通過PTEN、磷酸化P38蛋白來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：MiR-221 肥大細(xì)胞 IL-4 PTEN P38
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-26
• 結(jié)果26-33
• 討論33-38
• 小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述一44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述二50-54
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 攻讀學(xué)位期間科研成果及獲得獎(jiǎng)勵(lì)54-55
• 致謝55

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本文編號：1005769