本文關(guān)鍵詞：貴州黑山羊瘤胃溶纖維丁酸弧菌分離鑒定

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【摘要】：目的:共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid,CLA)對人體健康有諸多益處,大量研究表明天然CLA主要來源于反芻動物產(chǎn)品,而反芻動物瘤胃溶纖維丁酸弧菌是合成CLA的主要菌株。因此,通過開展貴州黑山羊瘤胃中溶纖維丁酸弧菌的分離鑒定等試驗研究,為后續(xù)進(jìn)一步在菌株細(xì)胞水平深入研究和系統(tǒng)闡明CLA生物合成機制,以及開發(fā)利用貴州黑山羊瘤胃溶纖維丁酸弧菌奠定基礎(chǔ)。方法:以貴州黑山羊為試驗動物,通過安裝瘤胃瘺管,活體采集瘤胃液,采用現(xiàn)代分子生物學(xué)等實驗手段開展貴州黑山羊瘤胃溶纖維丁酸弧菌分離與鑒定等相關(guān)研究。結(jié)果:(1)給6只貴州黑山羊成功安裝了改良瘤胃瘺管;(2)經(jīng)過革蘭氏染色、形態(tài)觀察、16S r RNA序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建后,1株菌鑒定為溶纖維丁酸弧菌,其16S rRNA GenBank登錄號為X8997.1;革蘭氏染色陰性,菌體呈彎曲桿狀,有錐形端,菌落顏色為乳白色,菌落形狀為圓形,半透明的粘稠菌落;在30℃~37℃和pH7.0環(huán)境下生長良好,硝酸鹽不還原、產(chǎn)硫化氫陰性、觸媒反應(yīng)陰性但具有運動性等生理生化特征;(3)活體瘤胃灌注亞油酸(Linoleic Acid,LA)能促進(jìn)貴州黑山羊瘤胃溶纖維丁酸弧菌增殖,增加瘤胃共軛亞油酸(c9t11-CLA and t10c12-CLA)和反-11-油酸(t11-C18∶1,簡稱TVA)含量,提高亞油酸異構(gòu)酶濃度。結(jié)論:瘤胃溶纖維丁酸弧菌常與其他厭氧菌處于伴生狀態(tài),極難分離純化;連續(xù)3天灌注30mL食品級LA后,能促進(jìn)貴州黑山羊瘤胃內(nèi)CLA、TVA、亞油酸異構(gòu)酶濃度和溶纖維丁酸弧菌數(shù)量不同程度的增加。
【關(guān)鍵詞】：貴州黑山羊 溶纖維丁酸弧菌 分離鑒定 共軛亞油酸 16S rRNA序列
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827;S852.6
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-8
• 第一章 文獻(xiàn)綜述8-25
• 1 貴州黑山羊概述8-10
• 1.1 品種來源、分布及產(chǎn)區(qū)自然生態(tài)條件等8-9
• 1.2 體型外貌和營養(yǎng)價值9-10
• 2 瘤胃溶纖維丁酸弧菌概述10-15
• 2.1 溶纖維丁酸弧菌介紹10-12
• 2.2 溶纖維丁酸弧菌分離鑒定研究進(jìn)展12-13
• 2.3 溶纖維丁酸弧菌在共軛亞油酸的研究進(jìn)展13-15
• 3 共軛亞油酸概述15-23
• 3.1 共軛亞油酸功能及來源15-17
• 3.2 其他微生物合成共軛亞油酸研究進(jìn)展17-20
• 3.2.1 瘤胃細(xì)菌18
• 3.2.2 丙酸菌18-19
• 3.2.3 乳酸菌19-20
• 3.3 共軛亞油酸分析檢測方法20-23
• 3.3.1 光譜分析21
• 3.3.2 色譜分析21-23
• 4 研究目的及意義23-25
• 第二章 貴州黑山羊改良瘤胃瘺管的安裝及護(hù)理25-31
• 1 材料25
• 1.1 試驗動物25
• 1.2 主要藥物25
• 1.3 主要儀器和器材25
• 2 方法25-29
• 2.1 術(shù)前準(zhǔn)備25-26
• 2.1.1 動物準(zhǔn)備25
• 2.1.2 麻醉前給藥25
• 2.1.3 全身麻醉25-26
• 2.1.4 動物保定與術(shù)部無菌準(zhǔn)備26
• 2.2 術(shù)式26-27
• 2.3 術(shù)后護(hù)理27-28
• 2.4 瘺管安裝28-29
• 3 結(jié)果29
• 4 討論29-31
• 第三章 LA對瘤胃溶纖維丁酸弧菌數(shù)量的影響31-43
• 1 材料31
• 1.1 試驗樣品31
• 1.2 主要試劑31
• 1.3 主要儀器31
• 2 方法31-38
• 2.1 試驗分組及樣品采集31-32
• 2.2 DNA提取32-33
• 2.3 目的片段擴(kuò)增33-35
• 2.3.1 目的片段擴(kuò)增33-34
• 2.3.2 克隆34-35
• 2.4 質(zhì)粒DNA提取35-37
• 2.4.1 菌液培養(yǎng)35
• 2.4.2 質(zhì)粒提取35-36
• 2.4.3 質(zhì)粒DNA濃度定量36-37
• 2.5 熒光定量PCR37
• 2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立37-38
• 2.7 拷貝數(shù)含量計算38
• 2.8 統(tǒng)計分析38
• 3 結(jié)果38-41
• 3.1 熒光定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物特異性38-40
• 3.2 溶纖維丁酸弧菌數(shù)量的統(tǒng)計分析結(jié)果40-41
• 4 討論41-43
• 第四章 瘤胃溶纖維丁酸弧菌分離鑒定43-54
• 1 材料43-47
• 1.1 試驗樣品43
• 1.2 主要試劑及配制43-46
• 1.2.1 主要試劑43
• 1.2.2 試劑配制43-46
• 1.3 主要儀器和器材46-47
• 2 方法47-50
• 2.1 瘤胃液采集及處理47
• 2.2 瘤胃細(xì)菌的分離純化47-49
• 2.2.1 瘤胃細(xì)菌的分離48
• 2.2.2 瘤胃細(xì)菌的純化48-49
• 2.3 菌種 16S rRNA序列分析49
• 2.4 溶纖維丁酸弧菌的生理生化試驗49-50
• 2.4.1 革蘭染色49
• 2.4.2 硝酸鹽還原試驗49
• 2.4.3 產(chǎn)硫化氫試驗49
• 2.4.4 觸媒反應(yīng)試驗49-50
• 2.4.5 運動性試驗50
• 2.4.6 不同溫度（20℃、30℃、37℃、39℃、45℃）生長試驗50
• 2.4.7 好氣性試驗50
• 3 結(jié)果50-52
• 3.1 分離純化結(jié)果50-51
• 3.2 菌種 16S rRNA序列分析結(jié)果和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建51-52
• 3.3 生理生化結(jié)果52
• 4 討論52-54
• 第五章 LA對CLA合成的相關(guān)研究54-67
• 1 材料54-55
• 1.1 試驗樣品54
• 1.2 主要試劑和配制54-55
• 1.3 主要儀器55
• 2 方法55-60
• 2.1 試驗分組及樣品采集55
• 2.2 共軛亞油酸和反11油酸55-57
• 2.2.1 樣品前處理55-56
• 2.2.2 CLA及反11油酸含量測定56-57
• 2.2.3 統(tǒng)計分析57
• 2.3 亞油酸異構(gòu)酶測定57-60
• 2.3.1 含酶菌體制備57
• 2.3.2 粗酶制備57
• 2.3.3 主要儀器參數(shù)設(shè)定57-58
• 2.3.4 共軛亞油酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線建立58-59
• 2.3.5 亞油酸酶活力的測定59-60
• 2.4 統(tǒng)計分析60
• 3 結(jié)果60-65
• 3.1 共軛亞油酸甲酯和反11油酸甲酯標(biāo)樣色譜圖和百分比報告60-61
• 3.2 共軛亞油酸和反11油酸統(tǒng)計分析結(jié)果61-64
• 3.3 亞油酸異構(gòu)酶濃度統(tǒng)計分析結(jié)果64-65
• 4 討論65-67
• 第六章 結(jié)論與展望67-69
• 1 結(jié)論67
• 2 創(chuàng)新點67
• 3 研究不足之處和展望67-69
• 致謝69-70
• 參考文獻(xiàn)70-78
• 附錄78-81
• 圖版81-83

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本文編號：982475