本文關(guān)鍵詞：山羊乳腺上皮細(xì)胞中5-HT對PTHrP的調(diào)控作用研究

  更多相關(guān)文章： 5-HT PTHrP 鈣平衡 山羊乳腺上皮細(xì)胞 低血鈣癥

【摘要】：處于哺乳期的母畜,由于泌乳對鈣的需求增加,極易產(chǎn)生低血鈣癥。低血鈣癥是圍產(chǎn)期經(jīng)產(chǎn)奶山羊非常容易發(fā)生的代謝性疾病,給奶山羊產(chǎn)業(yè)帶來極大損失。5-羥色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)是最近發(fā)現(xiàn)的一種哺乳期骨轉(zhuǎn)換的調(diào)節(jié)器。色氨酸羥化酶(Tryptophan Hydroxylase,TPH)是5-羥色胺生物合成中的限速酶,能夠?qū)⑸彼徂D(zhuǎn)化成5-羥色胺酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP)。甲狀旁腺相關(guān)肽(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)是調(diào)控鈣轉(zhuǎn)運的關(guān)鍵基因,同時本實驗室的研究也表明:PTHrP在山羊乳腺細(xì)胞中可以調(diào)控胞內(nèi)Ca2+的濃度。最近對小鼠研究發(fā)現(xiàn):5-HT可能是通過激活Hedgehog(Hh)信號通路來調(diào)控PTHrP表達(dá)。目前,針對奶山羊的5-HT、PTHrP以及Ca2+之間的調(diào)控作用尚未見報道。因此,本論文對奶山羊個體的血清和乳腺上皮細(xì)胞中5-HT和PTHrP的相關(guān)性,以及5-HT對鈣轉(zhuǎn)運關(guān)鍵基因(CaSR、PMCA1、SERCA2、SPCA1、SPCA2)表達(dá)豐度的影響進(jìn)行了研究。獲得以下主要結(jié)果:(1)通過采集并分離圍產(chǎn)期薩能奶山羊血清,利用Elise試劑盒檢測血清中5-HT、PTHrP和鈣離子的濃度,統(tǒng)計分析三者之間的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與生產(chǎn)前相比,產(chǎn)后5-HT、PTHrP和Ca2+濃度上升(P0.05);5-HT與PTHrP濃度之間呈線性相關(guān)關(guān)系,線性回歸方程為:y=0.12x+71(x為5-HT濃度;y為PTHrP濃度),相關(guān)系數(shù)r=0.86(P0.01);5-HT與Ca2+濃度之間存在曲線相關(guān)關(guān)系,曲線方程為:y=2.24(1-e-0.0006x)(x為5-HT濃度;y為Ca2+濃度),相關(guān)系數(shù)r=0.966(P0.01);PTHrP與Ca2+兩者之間的存在曲線相關(guān)關(guān)系,曲線方程為:y=2.3(1-e-0.005x)(x為PTHrP濃度;y為Ca2+濃度),相關(guān)系數(shù)r=0.902(P0.01)。由此表明在圍產(chǎn)期奶山羊血液中,5-HT濃度、PTHrP濃度和Ca2+濃度三者之間兩兩呈正相關(guān)關(guān)系。(2)分別用5-HTP和TPH1-Capra-1274處理山羊乳腺上皮細(xì)胞,檢測PTHrP的mRNA和蛋白表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn):5-HTP處理GMECs后,PTHrP的mRNA和蛋白表達(dá)量升高(P0.05);TPH1-Capra-1274處理GMECs后,PTHrP的mRNA和蛋白表達(dá)量降低(P0.05)。由此表明:5-HT分別在mRNA和蛋白水平上促進(jìn)PTHrP表達(dá)。(3)分別用5-HTP和TPH1-Capra-1274處理山羊乳腺上皮細(xì)胞,在mRNA水平上檢測鈣轉(zhuǎn)運基因(CaSR、PMCA1、SERCA2、SPCA1、SPCA2)的表達(dá)量。結(jié)果表明:5-HT促進(jìn)CaSR表達(dá),抑制PMCA1表達(dá)。5-HT對SPCA1、SPCA2和SERCA2的表達(dá)沒有影響(P0.05)�？傊�,在圍產(chǎn)期奶山羊的血清中,5-HT濃度、PTHrP濃度和Ca2+濃度兩兩之間存在正相關(guān)關(guān)系。與產(chǎn)前相比,產(chǎn)后山羊血清中5-HT、PTHrP濃度和Ca2+濃度顯著升高。在GMECs中,5-HT在mRNA和蛋白水平上促進(jìn)PTHrP基因表達(dá)。在GMECs中,5-HT在mRNA水平上促進(jìn)CaSR表達(dá),抑制PMCA1表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：5-HT PTHrP 鈣平衡 山羊乳腺上皮細(xì)胞 低血鈣癥
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 哺乳動物 5-HT和PTHrP基因以及鈣平衡機制研究進(jìn)展12-24
• 1.1 哺乳動物鈣代謝平衡機制研究進(jìn)展12-17
• 1.1.1 哺乳動物個體水平的鈣平衡機制12-14
• 1.1.2 骨鈣的調(diào)控與低血鈣癥機制14-15
• 1.1.3 乳腺上皮細(xì)胞中的鈣分泌與運輸機制15-17
• 1.2 PTHrP基因的研究進(jìn)展17-19
• 1.2.1 PTHrP的功能17-18
• 1.2.2 PTHrP與血鈣和乳鈣代謝18-19
• 1.3 5-HT的研究進(jìn)展19-23
• 1.3.1 5-HT的發(fā)現(xiàn)歷史19
• 1.3.2 5-HT生物合成19-20
• 1.3.3 5-HT的受體類型20
• 1.3.4 5-HT的功能20-22
• 1.3.5 5-HT與PTHrP的關(guān)系22-23
• 1.4 本研究的目的和意義23-24
• 第二章 圍產(chǎn)期奶山羊血清中 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)濃度的相關(guān)性研究24-29
• 2.1 試驗材料24
• 2.1.1 主要設(shè)備儀器24
• 2.1.2 試驗材料及試劑24
• 2.2 試驗方法24-25
• 2.2.1 5-HT測定方法24
• 2.2.2 PTHrP的測定方法24
• 2.2.3 鈣的測定24-25
• 2.2.4 統(tǒng)計分析25
• 2.3 結(jié)果與分析25-27
• 2.3.1 圍產(chǎn)期奶山羊在生產(chǎn)前后 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)濃度的變化25-26
• 2.3.2 圍產(chǎn)期奶山羊血清中 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)濃度之間的相關(guān)性26-27
• 2.4 討論27-28
• 2.5 小結(jié)28-29
• 第三章 奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中 5-HT對PTHrP以及鈣轉(zhuǎn)運關(guān)鍵基因表達(dá)的調(diào)控29-40
• 3.1 試驗材料29-30
• 3.1.1 主要儀器設(shè)備29
• 3.1.2 試驗材料及試劑29
• 3.1.3 主要試劑配方29-30
• 3.2 試驗方法30-32
• 3.2.1 山羊乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)30
• 3.2.2 奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的不同處理30-31
• 3.2.3 細(xì)胞中總RNA的提取31
• 3.2.4 qRT-PCR31
• 3.2.5 Western Blot31
• 3.2.6 統(tǒng)計分析31-32
• 3.3 結(jié)果與分析32-38
• 3.3.1 有效干擾山羊TPH1基因的siRNA序列篩選32-33
• 3.3.2 5-HT對PTHrP的調(diào)控作用33-35
• 3.3.3 5-HT對鈣轉(zhuǎn)運關(guān)鍵基因表達(dá)的調(diào)控作用35-38
• 3.4 討論38-39
• 3.5 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄46-51
• 縮略詞及中英文對照51-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53

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本文編號：975790