本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒EⅢ基因片段的表達(dá)與EⅢ-間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的研制

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【摘要】：為了研制乙型腦炎病毒EⅢ-間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒,將乙型腦炎病毒EⅢ基因克隆至原核表達(dá)載體p ET-32a(+),重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。以純化后的重組蛋白EⅢ包被酶標(biāo)板,優(yōu)化ELISA反應(yīng)條件,組裝試劑盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重組蛋白分子質(zhì)量約為30ku,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后高效表達(dá),且具有來(lái)良好的免疫原性。優(yōu)化試驗(yàn)確定重組抗原最佳包被濃度為4.7μg/m L,血清樣本的陽(yáng)性臨界值為0.255。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明,重組蛋白與豬瘟、豬偽狂犬、豬圓環(huán)病等多種病原體的陽(yáng)性血清無(wú)交叉反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,血清稀釋至1∶6400時(shí)仍檢測(cè)為陽(yáng)性。該試劑盒的批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于10%。用該試劑盒檢測(cè)224份臨床豬血清樣本,并與商品化ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果比較,兩者的符合率為90.7%。研究結(jié)果表明,原核表達(dá)的豬流行性乙型腦炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的豬流行性乙型腦炎病毒EⅢ-間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒敏感性、特異性和重復(fù)性較好,為豬流行性乙型腦炎的抗體水平檢測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查、類(lèi)癥鑒別等方面提供了重要方法。
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 豬流行性乙型腦炎病毒 原核表達(dá) 間接ELISA
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015B020230009,2015A050502044) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)(2016YFD0500700) 國(guó)家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專(zhuān)項(xiàng)(201203056,201203082)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 流行性乙型腦炎(Epidemic encephalitis B)又稱(chēng)日本腦炎(Japanese encephalitis,JE),簡(jiǎn)稱(chēng)乙腦,是一種人與動(dòng)物共患的蚊媒病毒性疾病[1],對(duì)人類(lèi)危害巨大。該病由黃病毒科黃病毒屬B組蟲(chóng)媒病毒中嗜神經(jīng)的乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)引起。目前該病主要發(fā)生及流

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本文編號(hào)：964502