發(fā)布時間：2017-10-02 13:25

  本文關(guān)鍵詞：CSF免疫豬組織淋巴細胞對PRRSV多肽刺激的應(yīng)答特點

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【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種傳染病,俗稱“豬藍耳病”。PRRSV于20世紀80年代末期,開始出現(xiàn)在世界養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)中并造成巨大經(jīng)濟損失,起源成迷。該病常與豬瘟(Classical swine fever,CSF)相伴感染于豬群中,提高發(fā)病率、病死率,致病機理更加復(fù)雜,防治不夠完善。在PRRS的發(fā)病機制中,IFN-γ、IL-12主要參與免疫預(yù)防,IL-10則在免疫抑制中發(fā)揮重要作用。本試驗以IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌變化為指標,評價機體免疫應(yīng)答的本質(zhì)。試驗選取不含有CSFV、PRRSV、PCV、PRV抗原和抗體的仔豬3頭。待其達到4周齡時,接種兔源CSFV疫苗,再經(jīng)過4周隔離飼養(yǎng),于鎖骨窩處進行前腔靜脈采血,其血清用于檢測有無病毒核酸的存在和免疫狀況。每頭仔豬通過外科手術(shù)方法分別提取四肢長骨骨髓(4種樣本)、五處淋巴結(jié)(即腹股溝、腸系膜、頜下、肩前、肺門淋巴結(jié)共5種樣本)、胸腺以及脾臟(每個脾臟分成脾頭、脾中、脾尾即3種樣本),進而將T淋巴細胞從上述器官每種樣本中對應(yīng)分離,做好標記,并通過流式細胞儀鑒定提取的細胞是否為T淋巴細胞。將每種樣本所得原代T淋巴細胞轉(zhuǎn)移至96孔板并分為兩組,第一組T淋巴細胞在培養(yǎng)達到24h,向其中分別加入四種PRRSV特異性肽進行刺激,留出一孔作空白對照;第二組T淋巴細胞在培養(yǎng)至72h,向其中分別加入四種PRRSV特異性肽進行刺激,留出一孔作空白對照。四種PRRSV特異性肽分別為PRRSV-GP5(aa 100-108)、PRRSV-GP5(aa 96-104)、PRRSV-N(aa 106-114)、PRRSV-N(aa 49-57)分別簡稱G1肽、G2肽、N1肽和N2肽。所有試驗、空白組樣本在37℃恒溫箱中刺激12h后,離心提取細胞上清液,應(yīng)用Porcine ELISA檢測試劑盒檢測上清液中IFN-γ、IL-12以及IL-10的分泌量,通過SPSS統(tǒng)計軟件,分析總結(jié)不同免疫器官在四種PRRSV特異性肽刺激下,IFN-γ、IL-12以及IL-10的變化規(guī)律。24h肽刺激組結(jié)果顯示,骨髓中T淋巴細胞在四種PRRSV特異性肽刺激下,IFN-γ的含量經(jīng)G1、G2、N1肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量顯著降低(P0.05);IL-12的含量經(jīng)G1、G2、N1肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量顯著降低(P0.05);IL-10的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量均顯著降低(P0.05)。淋巴結(jié)中T淋巴細胞在G1、N1、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌量與空白對照組相比,降低,但不明顯;IL-12的含量經(jīng)G2、N1、N2肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量顯著升高(P0.05);IL-10的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量均顯著降低(P0.05)。脾臟中T淋巴細胞在四種特異性肽刺激下,IFN-γ的分泌量與空白對照組相比,均顯著降低(P0.05);IL-12的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,分泌量與空白對照組相比,變化不明顯;IL-10的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量均降低,尤其在N1、N2肽的刺激下,差異顯著(P0.05)。胸腺中T淋巴細胞在四種特異性肽刺激下,IFN-γ的分泌含量與空白對照組相比,均顯著升高(P0.05);IL-12的含量經(jīng)G1、N1、N2肽刺激后,分泌量與空白對照組相比,顯著降低(P0.05);IL-10的分泌含量在四種特異性肽刺激下,與空白對照組相比,均顯著降低(P0.05)。72h肽刺激組結(jié)果顯示,骨髓中T淋巴細胞在G1、G2、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌含量與空白對照組相比,均顯著升高(P0.05);IL-12的含量經(jīng)N1、N2肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量降低;IL-10的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,變化不明顯。淋巴結(jié)中T淋巴細胞在G1、G2、N1肽刺激下,IFN-γ的分泌含量與空白對照組相比,均降低,尤其在G2肽的刺激下,差異顯著(P0.05);IL-12的含量,在四種特異性肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量均顯著降低(P0.05);IL-10的含量在G1、N1、N2肽刺激后,與空白對照組相比,分泌量均降低;脾臟中T淋巴細胞在G1、G2、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌含量與空白對照組相比,升高,尤其在N2肽的刺激下,差異顯著(P0.05);IL-12的分泌量在N2肽的刺激下,與空白對照組相比,顯著升高(P0.05);IL-10的含量經(jīng)四種特異性肽刺激后,與空白對照組相比,其分泌量顯著降低(P0.05)。胸腺中T淋巴細胞在四種特異性肽刺激下,IFN-γ的分泌量與空白對照組相比,均顯著升高(P0.05);IL-12的分泌含量,在G2、N1、N2肽的刺激下,與空白對照組相比,顯著升高(P0.05);IL-10的含量經(jīng)G1、N2肽刺激后,與空白對照組相比,其分泌量顯著升高(P0.05)。結(jié)果表明,豬體在CSFV疫苗免疫成功,即豬瘟病毒抗體檢測合格的情況下,機體對PRRSV特異性肽的刺激能產(chǎn)生較強的免疫應(yīng)答。當(dāng)CSF免疫狀態(tài)良好時,四種特異性肽對于IL-10的分泌均有明顯的抑制作用,阻礙免疫抑制的發(fā)生,有利于具有免疫促進性細胞因子的產(chǎn)生。同時,G1、G2和N1肽在影響IFN-γ、IL-12的分泌上作用不明顯,而N2肽,在影響IFN-γ以及IL-12的分泌上,有促進二者分泌的趨勢,但還需進一步驗證。此外,免疫器官中的細胞因子是在離體培養(yǎng)條件下測得,從試驗數(shù)據(jù)上可看出,當(dāng)細胞培養(yǎng)達到24h,加入PRRSV特異性肽刺激T淋巴細胞,其分泌細胞因子的特點,要比在72h進行刺激作用更有規(guī)律性,有利于評價PRRSV特異性肽的作用效果,為PRRSV合成肽疫苗提供更為準確的參照數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：豬繁殖與呼吸綜合征 PRRSV特異性肽 IFN-γ IL-12 IL-10
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-15
• 引言15-16
• 第一篇 文獻綜述16-35
• 第1章 豬繁殖與呼吸綜合征概述16-33
• 1 病原學(xué)特性17-19
• 2 流行病學(xué)特征19-22
• 3 臨床癥狀22-24
• 4 發(fā)病機理24-26
• 5 PRRSV對免疫系統(tǒng)的影響26-30
• 6 防制30-33
• 第2章 免疫相關(guān)細胞因子的簡介33-35
• 1 干擾素33
• 2 白細胞介素-1233
• 3 白細胞介素-1033-35
• 第二篇 研究內(nèi)容35-71
• 第1章 CSF免疫豬組織淋巴細胞對PRRSV膜蛋白刺激的應(yīng)答特點35-55
• 1 試驗器材36-39
• 2 試驗技術(shù)路線39
• 3 試驗方法39-45
• 4 結(jié)果45-52
• 5 討論52-54
• 6 小結(jié)54-55
• 第2章 CSF免疫豬組織淋巴細胞對PRRSV-N特異性肽刺激的應(yīng)答特點55-71
• 1 試驗器材56-59
• 2 試驗技術(shù)路線59-60
• 3 試驗方法60-62
• 4 結(jié)果62-68
• 5 討論68-70
• 6 小結(jié)70-71
• 結(jié)論71-72
• 參考文獻72-83
• 導(dǎo)師簡介83-84
• 作者簡介84-85
• 致謝85

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 郭敏;郎廣平;梁志選;馮嬌;孔惟博;任少敏;李彬;趙建增;高英杰;;PRRSV特異性肽對CSFV、PRRSV疫苗免疫豬后T淋巴細胞亞群的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2014年03期

2 付云云;單悅;郭敏;郎廣平;白雪;梅林;屈雪琪;溫濤;梁志選;楊舉;羅勝軍;邢海云;趙建增;高英杰;;豬瘟免疫豬接種PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫應(yīng)答及T細胞表型變化特征[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2012年07期

3 白雪;付云云;單月;郭敏;郎廣平;梅林;溫濤;趙建增;梁志選;楊舉;羅勝軍;邢海云;高英杰;;不同CSF免疫狀態(tài)下豬PRRS易感性及IFN-γ分泌細胞應(yīng)答[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2012年01期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 梅林;PRRSV免疫與實驗感染豬血清細胞因子變化規(guī)律的研究[D];吉林大學(xué);2012年

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本文編號：959868