本文關(guān)鍵詞：不同豬種脂肪細(xì)胞分化因子的差異表達(dá)研究

  更多相關(guān)文章： 從江香豬 江口蘿卜豬 大白豬 PPARγ C/EBPα ADD1 表達(dá)量 肉質(zhì)性能 相關(guān)性

【摘要】：本項目以江口蘿卜豬為試驗材料構(gòu)建DNA池,采用測序技術(shù)篩查PPARγ、C/EBPα、ADD1基因多態(tài)性,并作相關(guān)生物信息學(xué)分析;以3、4、5、6、7月齡的江口蘿卜豬、從江香豬和大白豬為試驗材料,提取心、肝、脾、肺、腎、小腸、背最長肌和皮下脂肪的總RNA,應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在3個品種不同月齡各組織中mRNA的相對表達(dá)量,并結(jié)合屠宰試驗進(jìn)行PPARγ、C/EBPα、ADD1基因表達(dá)水平與其肉質(zhì)性能的相關(guān)性分析。獲得主要結(jié)果如下:1.本研究對江口蘿卜豬PPARγ、C/EBPα、ADD1基因進(jìn)行多態(tài)位點檢測。PPARγ基因共篩查出8個多態(tài)位點,其中位于外顯子上有3個,其余5個均位于內(nèi)含子上;ADD1基因共篩查出3個多態(tài)位點,其中位于外顯子上有1個,2個位于內(nèi)含子上;C/EBPα基因未檢測出多態(tài)位點。位于PPARγ基因3個外顯子中,exon2-C50T、exon7-G53T、exon9-C32T均為錯義突變,對應(yīng)的氨基酸由蘇氨酸(Thr)改變?yōu)楫惲涟彼?Ile)、天冬氨酸(Asp)改變?yōu)槔野彼?Tyr)、丙氨酸(Ala)改變?yōu)樘於彼?Asp);位于ADD1基因外顯子上的exon8-G87A位點為同義突變,其突變未引起氨基酸的改變。對引起錯義突變的多態(tài)位點進(jìn)行生物信息學(xué)分析表明突變前后mRNA二級結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)二級、三級結(jié)構(gòu)均有差異。2.PPARγ、C/EBPα、ADD1在大白豬3、4、5、6、7月齡各組織中均有表達(dá),在肝、小腸、背最長肌、皮下脂肪的表達(dá)水平較高,心、脾、肺、腎的表達(dá)水平較低。其中PPARγ在小腸、背最長肌、皮下脂肪中3、4月齡分別與6、7月齡的表達(dá)量差異極顯著(P0.01)。C/EBPα、ADD1在肝、肺、小腸、皮下脂肪中3月齡與6、7月齡差異極顯著(P0.01);PPARγ、C/EBPα、ADD1在江口蘿卜豬心、脾、肺、腎、背最長肌的表達(dá)量最低,在皮下脂肪中最高,具有組織特異性。其表達(dá)量隨月齡遞增而上升,皮下脂肪的增加幅度最大。其中PPARγ、ADD1在小腸、背最長肌、皮下脂肪中3、4月齡與6、7月齡的表達(dá)量差異極顯著(P0.01)。C/EBPα在小腸、皮下脂肪中3月齡與5、6、7月齡的表達(dá)量均差異極顯著(P0.01);PPARγ、C/EBPα、ADD1在從江香豬心、肝、脾、肺、腎、小腸、背最長肌的表達(dá)量較低,在皮下脂肪的表達(dá)量最高,PPARγ的表達(dá)量隨月齡增加而上升的幅度較小,C/EBPα、ADD1在各組織中的表達(dá)量隨時間增加而上升。其在小腸、皮下脂肪、背最長肌中3、4月齡與6、7月齡的表達(dá)量差異極顯著(P0.01)。總體上PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在各組織均有表達(dá),組織間的表達(dá)量存在差異,皮下脂肪的表達(dá)量最高,其次肝、肺、小腸、背最長肌中較高,心、脾、腎中的表達(dá)量最低,其中在肝、小腸、皮下脂肪中為高豐度表達(dá)。隨著月齡的增加,PPARγ、C/EBPα、ADD1基因mRNA的表達(dá)模式基本相同,總體呈現(xiàn)上升趨勢,6、7月齡的表達(dá)水平較高,即隨著月齡的增加而逐漸上升,到生長后期維持一個相對穩(wěn)定水平。不同品種間PPARγ、C/EBPα、ADD1在相同月齡各組織中的表達(dá)量存在差異,總體上大白豬肝、小腸、皮下脂肪中PPARγ、C/EBPα、ADD1 mRNA的表達(dá)量分別與江口蘿卜豬、從江香豬差異顯著(P0.05)。綜合而言,PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在脂肪型江口蘿卜豬、從江香豬的表達(dá)量高于瘦肉型大白豬。3.從江香豬、江口蘿卜豬、大白豬肌肉的大理石紋、pH值、剪切力、肌內(nèi)脂肪含量、粗蛋白含量隨著月齡的增加而升高,失水率、滴水損失、水份含量、蒸煮損失隨著月齡的增加而下降。從江香豬、江口蘿卜豬其肉質(zhì)性能測定均在正常范圍之內(nèi),大白豬中其大理石紋評分、肉色評分、肌內(nèi)脂肪含量在3、4月齡時較低,之后隨著月齡增加而上升到正常值�？傮w上從江香豬、江口蘿卜豬的肌內(nèi)脂肪含量比大白豬高,6、7月齡時為4%以上。PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在從江香豬、江口蘿卜豬、大白豬的表達(dá)量與肉質(zhì)性能均為正相關(guān)。在心、脾、肺、腎的表達(dá)量與肉色、pH值、滴水損失、大理石紋、失水率、蒸煮損失、剪切力、水份含量、粗蛋白含量、肌內(nèi)脂肪含量相關(guān)性較小,在肝、小腸、背最長肌、皮下脂肪的表達(dá)量與大理石紋、剪切力、肌內(nèi)脂肪含量、粗蛋白含量有較高相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：從江香豬 江口蘿卜豬 大白豬 PPARγ C/EBPα ADD1 表達(dá)量 肉質(zhì)性能 相關(guān)性
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-31
• 第一節(jié) 脂肪沉積及其調(diào)控的研究12-18
• 1.1 脂肪組織的發(fā)育規(guī)律12-13
• 1.2 脂肪組織的功能13-14
• 1.3 脂肪細(xì)胞的分化14-16
• 1.4 脂肪沉積的調(diào)控16-18
• 第二節(jié) 肌內(nèi)脂肪與肉質(zhì)性能的相關(guān)研究18-21
• 2.1 肌內(nèi)脂肪的生成及研究現(xiàn)狀19
• 2.2 肌內(nèi)脂肪對肉品質(zhì)的影響19-21
• 第三節(jié) 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因的研究進(jìn)展21-29
• 3.1 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子PPARs基因家族21-26
• 3.2 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C/EBPs基因家族26-28
• 3.3 脂肪細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子ADD1基因28-29
• 第四節(jié) 研究目的及意義29-31
• 第二章 江口蘿卜豬PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的多態(tài)性檢測31-42
• 2.1 試驗材料31-32
• 2.1.1 試驗樣本31
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備31-32
• 2.1.3 主要試劑32
• 2.2 試驗方法32-35
• 2.2.1 基因組DNA提取32-33
• 2.2.2 基因引物設(shè)計33-34
• 2.2.3 PCR擴(kuò)增34
• 2.2.4 測序及序列分析34
• 2.2.5 生物信息學(xué)分析34-35
• 2.3 結(jié)果與分析35-40
• 2.3.1 DNA提取結(jié)果35
• 2.3.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果35-36
• 2.3.3 測序結(jié)果36-38
• 2.3.4 mRNA二級結(jié)構(gòu)分析38-39
• 2.3.5 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分析39
• 2.3.6 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)分析39-40
• 2.4 討論40-41
• 2.5 結(jié)論41-42
• 第三章 PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表達(dá)規(guī)律研究42-61
• 3.1 材料與方法42-44
• 3.1.1 試驗動物42
• 3.1.2 試驗儀器42
• 3.1.3 主要試劑42
• 3.1.4 引物的設(shè)計與合成42-43
• 3.1.5 總RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄43-44
• 3.1.6 熒光實時定量PCR44
• 3.1.7 數(shù)據(jù)分析44
• 3.2 結(jié)果與分析44-58
• 3.2.1 總RNA提取結(jié)果44-45
• 3.2.2 熒光定量PCR擴(kuò)增曲線和熔解曲線45-46
• 3.2.3 同一品種不同時期各組織PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表達(dá)差異46-54
• 3.2.4 不同品種相同時期各組織PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表達(dá)差異54-58
• 3.3 討論58-60
• 3.4 結(jié)論60-61
• 第四章 豬肉質(zhì)性能測定及基因表達(dá)量與其相關(guān)性分析61-74
• 4.1 材料與方法61-64
• 4.1.1 試驗動物61
• 4.1.2 主要儀器61
• 4.1.3 肉質(zhì)性能測定61-64
• 4.1.4 數(shù)據(jù)分析64
• 4.2 結(jié)果與分析64-72
• 4.2.1 江口蘿卜豬肉質(zhì)性能及其與基因表達(dá)的相關(guān)性分析64-67
• 4.2.2 大白豬肉質(zhì)性能及其與基因表達(dá)的相關(guān)性分析67-69
• 4.2.3 從江香豬肉質(zhì)性能及其與基因表達(dá)的相關(guān)性分析69-72
• 4.3 討論72-73
• 4.4 結(jié)論73-74
• 參考文獻(xiàn)74-87
• 致謝87-88
• 附錄88-89

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