本文關(guān)鍵詞：豬四種病毒性腹瀉病原多重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：分別以豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M基因、豬輪狀病毒(Po RV)VP6基因、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)N基因、豬源牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)Npro基因?yàn)榘谢?參照Gen Bank上登錄的基因序列,利用DNAStar和Oligo7軟件設(shè)計(jì)了4對引物。采用PCR分別擴(kuò)增各病毒基因,并克隆至p MD18-T載體,獲得4個(gè)陽性重組質(zhì)粒。以重組質(zhì)粒為模板,進(jìn)行多重PCR方法的優(yōu)化。特異性試驗(yàn)檢測可分別擴(kuò)增出相應(yīng)的病毒基因片段;敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,檢測PEDV、TGEV、Po RV及BVDV質(zhì)粒的最低拷貝數(shù)分別為730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。應(yīng)用該方法對豬場44份豬腹瀉樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果檢出15份PEDV樣品,3份TGEV樣品,2份BVDV樣品,其中PEDV與TGEV混合感染樣品2份,TGEV與BVDV混合感染樣品1份。隨機(jī)抽取其中2份PEDV陽性樣品進(jìn)行病毒分離,病毒經(jīng)細(xì)胞傳3代以上PCR檢測均為陽性,對PCR產(chǎn)物測序證實(shí)為PEDV。結(jié)果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、簡便、特異性強(qiáng)、敏感度高的特點(diǎn),能夠?qū)EDV、Po RV、TGEV和BVDV單個(gè)或混合感染的臨床樣品進(jìn)行快速鑒別診斷。
【作者單位】： 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 豬病毒性腹瀉病原 多重PCR檢測技術(shù) PEDV TGEV Po RV BVDV
【基金】：上海市農(nóng)委重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目[滬農(nóng)科攻字(2013)第5-5號,滬農(nóng)科攻字(2013)第3-6號] 上海市揚(yáng)帆計(jì)劃項(xiàng)目(15YF1410300)
【分類號】：S858.28
【正文快照】： 豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(porcine trans-missible gastroenteritis virus,TGEV)、豬輪狀病毒(porcine rotavirus,Po RV)是引起豬病毒性腹瀉的重要病原,感染豬臨床表現(xiàn)為嚴(yán)重腹瀉、嘔吐及脫水,各年齡段豬都可感染,發(fā)病率高

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余麗蕓;趙志剛;侯喜林;曹宏偉;王桂華;;乳酸菌表面表達(dá)PEDV S1蛋白的研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2008年04期

2 高慎陽;劉延慶;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年12期

3 古洪浪;鄧勝朝;崔進(jìn);劉曉露;劉超;袁航;馬嵐;張桂紅;;豬流行性腹瀉病毒PEDV-GD12株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

4 杜曉莉;王一成;吳潤;徐麗華;袁秀芳;李軍星;周曉麗;;2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2014年03期

5 鄧祖麗穎;陳陸;;豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年01期

6 ;PEDV已出現(xiàn)了部分基因變異[J];畜禽業(yè);2014年01期

7 栗柱;;美國養(yǎng)豬業(yè)探討飼料在預(yù)防PEDV擴(kuò)散中的作用[J];獸醫(yī)導(dǎo)刊;2014年06期

8 李寶賢;馬廣鵬;葛俊偉;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒功能性受體的鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2009年03期

9 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

10 田克恭;;兔胸水滲出病[J];上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué);1993年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 余麗蕓;侯喜林;;Development and Evalutaion of Enzyme-Linked mmunosorbent Assay Based on Recombinant Nucleocapsid Protein for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea (PEDV) Antibodies[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

2 王金洛;宋維平;徐福洲;楊兵;賴平安;王琴;孟燕妮;;抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體(PEDV-IgY)及其特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

3 孫東波;馮力;時(shí)洪艷;陳建飛;;豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

4 孫東波;朗洪武;時(shí)洪艷;陳建飛;崔曉辰;王承寶;佟有恩;馮力;;PEDV S蛋白B細(xì)胞抗原表位的篩選和鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 鄭逢梅;趙軍;霍金耀;李歡;楊霞;常洪濤;杜季梅;王曉夢;王川慶;;PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表達(dá)及ELISA方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

6 ;Identification of two novel B cell epitopes on porcine epidemic diarrhea virus spike protein[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

7 李嘉愛;賴月輝;鄒永新;羅映霞;吳文福;巫月生;;PEDV免疫母雞血清抗體和蛋黃抗體的消長規(guī)律及其相關(guān)性測定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

8 ;Spike protein region (aa 636～789) of porcine epidemic diarrhea virus is essentIal for induction of neutralizing antibodies[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

9 董世娟;朱于敏;于瑞嵩;李震;;我國PEDV分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 石達(dá);宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47對PEDV復(fù)制影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 曹麗艷;豬流行性腹瀉病毒感染豬小腸上皮細(xì)胞抑制IFN-β產(chǎn)生及激活NF-κB機(jī)理研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 張?jiān)?豬流行性腹瀉病毒S基因變異分析及嗜酸乳桿菌口服疫苗的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 李任峰;河南省豬流行性腹瀉病毒遺傳進(jìn)化分析及免疫學(xué)檢測方法的建立[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

5 孫瑞芹;華南地區(qū)豬流行性腹瀉病毒的分子流行病學(xué)與病原學(xué)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

6 畢靜;豬流行性腹瀉病毒AJ1102株的分離、鑒定及其分子進(jìn)化特征[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 葛俊偉;豬流行性腹瀉病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白不同抗原片段在重組干酪乳桿菌中的表達(dá)及其免疫學(xué)評價(jià)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張百靈;豬流行性腹瀉病毒（PEDV）木瓜樣蛋白酶功能研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

2 石明明;豬流行性腹瀉病毒（PEDV）及其抗體檢測方法的研究與應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 徐天;豬IEC酵母cDNA文庫的構(gòu)建及與PEDV結(jié)構(gòu)蛋白互作蛋白的篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 潘溪;豬流行性腹瀉病毒的分離鑒定及ELISA檢測方法的初步建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 許夏澎;某規(guī)�；i場豬流行性腹瀉病毒檢測及主要毒力基因克隆分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

6 王佳;豬群腹瀉癥候群病原和病因研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

7 蔡青秀;豬流行性腹瀉病毒主要結(jié)構(gòu)基因遺傳變異分析及ELISA檢測方法的建立[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2015年

8 劉連增;豬流行性腹瀉病毒全長cDNA克隆及復(fù)制子的構(gòu)建[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 朱衛(wèi)霞;豬流行性腹瀉病毒HBMC/2012株的致病性與免疫研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 周兵強(qiáng);河南省豬流行性腹瀉病毒流行病學(xué)調(diào)查及CHHeN-ZZ株培養(yǎng)特性研究[D];河南科技大學(xué);2015年

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本文編號：944115