本文關(guān)鍵詞：6種中藥成分對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒的體外抑制作用

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【摘要】：【目的】為探討連翹苷等6種中藥成分抗豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)的作用機(jī)制,明確其體外抗病毒作用效果,為抗TGEV的藥物篩選提供依據(jù)�！痉椒ā坷脛�(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),采用MTT比色法和細(xì)胞病變(CPE)觀察法相結(jié)合,測(cè)定連翹苷、連翹苷元、綠原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚6種中藥成分不同濃度下對(duì)豬睪丸細(xì)胞(ST)的毒性作用,通過觀察細(xì)胞CPE情況,確定藥物對(duì)細(xì)胞作用的最大安全濃度;同時(shí)測(cè)定病毒的TCID_(50),用細(xì)胞維持液配成100·TCID_(50)病毒懸液備用;將6種藥物在最大安全濃度范圍內(nèi)連續(xù)2倍倍比稀釋后,分別采用先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、藥與病毒混合后感染細(xì)胞3種不同作用方式進(jìn)行體外增殖抑制試驗(yàn),各試驗(yàn)組均設(shè)置正常細(xì)胞對(duì)照組和病毒對(duì)照組,每組設(shè)置3個(gè)重復(fù),通過酶標(biāo)儀測(cè)得630 nm處OD值,計(jì)算出不同作用方式下中藥成分分別對(duì)TGEV的抑制率,篩選出抗TGEV活性較好的中藥成分,并分別記錄抗病毒效果最佳時(shí)藥物的濃度;6種中藥成分與病毒作用后,測(cè)定TGEV的病毒滴度并進(jìn)行比較分析、RT-PCR鑒定各個(gè)藥物單體對(duì)病毒RNA合成的抑制情況,進(jìn)一步明確各中藥成分對(duì)TGEV的抑制作用�！窘Y(jié)果】連翹苷、連翹苷元、綠原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚的最大安全濃度分別為320、200、80、125、100、200μmol·L~(-1);抗病毒效果最佳時(shí)藥物的濃度分別為:160、100、20、62.5、25、100μmol·L~(-1)。根據(jù)Karber法計(jì)算出初始TGEV的TCID_(50)為10~(-6.25)/0.1 m L;6種中藥成分對(duì)TGEV在ST細(xì)胞上均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸濃度為62.5μmol·L~(-1)時(shí)與100·TCID_(50)病毒混合作用后的病毒增殖抑制效果最好,相互作用72 h時(shí),細(xì)胞形態(tài)依然能夠保持圓滑、無固縮、完整,且細(xì)胞間輪廓清晰,僅有少量細(xì)胞脫落、死亡;此時(shí)測(cè)上清病毒的TCID_(50)為10~(-3.75)/0.1 m L,結(jié)果顯示咖啡酸組病毒含量比病毒對(duì)照組10~(-6.45)/0.1 m L差異極顯著(P0.01);通過酶標(biāo)儀測(cè)得630 nm處OD值計(jì)算出抑制率能夠達(dá)到84.4%,咖啡酸直接滅活病毒作用極其顯著。其次是連翹苷、連翹苷元、綠原酸、丹皮酚及丁香酚,其病毒滴度分別為:10~(-4.75)、10~(-5.55)、10~(-5.55)、10~(-5.65)、10~(-5.75)/0.1 m L,但是這幾種中藥成分對(duì)病毒的抑制作用不夠顯著,抑制率大多在50%以下。另外,各中藥成分對(duì)TGEV在ST細(xì)胞上的增殖抑制作用均為對(duì)TGEV的直接滅活作用最好,其次為對(duì)TGEV吸附阻斷作用,最后為對(duì)TGEV的復(fù)制阻斷作用。RT-PCR鑒定中藥成分對(duì)病毒抑制作用,結(jié)果顯示咖啡酸組條帶與病毒對(duì)照組相比較暗,病毒效價(jià)較低,對(duì)病毒抑制作用效果顯著;其次是連翹苷、連翹苷元、綠原酸、丹皮酚及丁香酚。【結(jié)論】6種中藥成分在ST細(xì)胞上對(duì)TGEV均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸直接滅活病毒作用最顯著,有望被開發(fā)成抗病毒藥物。
【作者單位】： 河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院/河南科技大學(xué)動(dòng)物疫病與公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 中藥成分 豬傳染性胃腸炎病毒 抗病毒作用 咖啡酸
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31302105) 河南科技大學(xué)青年科學(xué)基金(2013QN017)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 0引言【研究意義】豬傳染性胃腸炎(swine transmissiblegastroenteritis,TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(swinetransmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一種高度傳染性豬病。TGEV是冠狀病毒屬成員之一,為單股正鏈RNA病毒。該病毒感染可導(dǎo)致仔豬嚴(yán)重腹瀉、嘔吐,一周齡以，

本文編號(hào)：940999