本文關鍵詞：遼寧部分地區(qū)奶牛隱性乳房炎鏈球菌耐藥性與其整合子-基因盒攜帶情況相關性研究

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【摘要】：奶牛乳房炎一直是威脅奶牛養(yǎng)殖業(yè)的重大棘手問題之一。其中隱性乳房炎造成的經(jīng)濟損失及潛在危害不亞于臨床型乳房炎。本研究對遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎發(fā)生情況進行了調(diào)查,并對鏈球菌在該地奶牛隱性乳房炎中的檢出率及其耐藥性和耐藥性獲得的機制進行了研究,以期明確遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎的有效防治提供理論指導。采用體細胞計數(shù)法(SCC)對沈陽、阜新兩地六家不同規(guī)模的奶牛場中306頭臨床表現(xiàn)健康的奶牛進行隱性乳房炎調(diào)查,并對檢測后的陽性乳樣進行病原菌的分離、鑒定及藥敏試驗。本試驗主要對乳房炎的主要致病菌之—鏈球菌進行鑒定。結(jié)果顯示,六家奶牛場隱性乳房炎的平均檢出率為34.31%,最高的場子檢出率為76.67%,最低檢出率為10%。通過法國梅里埃API 20 Strep試劑條共鑒定出鏈球菌55株,頭分離率為52.4%。其中屎腸球菌39株、鳥腸球菌13株、糞腸球菌1株、乳房鏈球菌2株。采用肉湯微量稀釋法測定9類21種抗菌藥物對55株鏈球菌的體外抗菌活性,結(jié)果表明,鏈球菌分離株對磺胺類及頭孢氨芐、苯唑西林及林可霉素耐藥性最嚴重,耐藥率分別為100%、100%、90.9%、90.9%；對土霉素、多西環(huán)素、紅霉素及阿奇霉素的耐藥率均在85%以上；對阿莫西林、青霉素、頭孢噻呋、泰樂菌素、恩諾沙星的耐藥率均在60%以上；但菌株對氧氟沙星、阿米卡星及環(huán)丙沙星表現(xiàn)出較高的敏感性,敏感率分別為65.5%、63.6%、47.3%。故臨床上治療該地區(qū)奶牛隱性乳房炎時可首選這3種敏感藥物。55株鏈球菌共形成33種耐藥譜型,至少耐3類藥物,最多耐8類藥物。本試驗采用PCR擴增技術,檢測奶牛隱性乳房炎鏈球菌分離株Ⅰ、Ⅱ型整合子攜帶情況,Ⅰ、Ⅱ型整合子的檢出率分別為45.5%、14.5%。其中,同時攜帶Ⅰ、Ⅱ型整合子的菌株檢出率為10.9%,未檢測出Ⅲ型整合子。16株Ⅰ型整合子陽性菌株中攜帶基因盒,包括編碼小多藥耐藥蛋白基因(smr),編碼氨基糖苷類抗生素的耐藥基因(aadA1、 aadA2)及編碼二氫葉酸還原酶基因(dfrA15),編碼ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶的基因(arr-3)和編碼氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶的基因(aacA4)。Ⅱ型整合子中未檢出耐藥基因盒且無法確定同時攜帶Ⅱ型整合子陽性菌株中攜帶的耐藥基因。本研究旨在幫助了解遼寧地區(qū)奶牛隱性乳房炎的流行情況,并根據(jù)分離菌株耐藥性測定分析結(jié)果,為隱性乳房炎的防治提供合理有效的理論依據(jù)。通過對鏈球菌耐藥性獲得機制的探討分析,為日后深入研究奶牛隱性乳房炎鏈球菌耐藥性產(chǎn)生的分子機制奠定了基礎。
【關鍵詞】：隱性乳房炎 鏈球菌 耐藥性 整合子 基因盒
【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23
【目錄】：

• 中文摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-16
• 1 奶牛隱性乳房炎的研究進展11-12
• 2 奶牛隱性乳房炎鏈球菌耐藥性研究進展12-13
• 3 鏈球菌整合子-基因盒系統(tǒng)的研究概況13-15
• 4 本研究的目的與意義15-16
• 試驗一 遼寧部分地區(qū)奶牛隱性乳房炎鏈球菌的分離與鑒定16-22
• 1.1 材料16-17
• 1.1.1 培養(yǎng)基16
• 1.1.2 質(zhì)控菌16
• 1.1.3 生化鑒定試劑16
• 1.1.4 主要儀器16-17
• 1.2 方法17-18
• 1.2.1 乳樣采集17
• 1.2.2 隱性乳房炎檢測17
• 1.2.3 鏈球菌的分離17-18
• 1.2.4 API鑒定鏈球菌18
• 1.3 結(jié)果與分析18-20
• 1.3.1 隱性乳房炎檢測結(jié)果18-19
• 1.3.2 鏈球菌分離鑒定結(jié)果19-20
• 1.4 討論20-21
• 1.5 小結(jié)21-22
• 試驗二 遼寧部分地區(qū)奶牛隱性乳房炎鏈球菌耐藥性測定與分析22-31
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 菌株22
• 2.1.2 培養(yǎng)基22
• 2.1.3 抗菌藥物22-23
• 2.1.4 主要儀器23
• 2.1.5 其他材料23
• 2.2 方法23-24
• 2.2.1 菌液的制備23
• 2.2.2 抗菌藥液的配制23
• 2.2.3 MIC的測定23-24
• 2.2.4 MIC_(50)和MIC_(90)的計算24
• 2.3 結(jié)果與分析24-28
• 2.3.1 奶牛隱性乳房炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感性分析24-26
• 2.3.2 奶牛隱性乳房炎鏈球菌對21種抗菌藥物的多藥耐藥性分析26-27
• 2.3.3 奶牛隱性乳房炎鏈球菌對9類抗菌藥物的耐藥譜分析27-28
• 2.4 討論28-29
• 2.5 小結(jié)29-31
• 試驗三 奶牛隱性乳房炎鏈球菌整合子-基因盒檢測與分析31-46
• 3.1 材料31-32
• 3.1.1 菌株31
• 3.1.2 主要酶和試劑31
• 3.1.3 主要設備及儀器31-32
• 3.2 方法32-37
• 3.2.1 主要藥液、培養(yǎng)基及試劑的制備32-33
• 3.2.2 引物設計及合成33
• 3.2.3 鏈球菌基因組DNA的提取33-34
• 3.2.4 PCR擴增Ⅰ、Ⅱ型整合酶基因34-35
• 3.2.5 整合子-基因盒的PCR檢測35-36
• 3.2.6 整合子-基因盒檢測結(jié)果與耐藥相關性分析36-37
• 3.3 結(jié)果與分析37-43
• 3.3.1 鏈球菌基因組DNA提取結(jié)果37
• 3.3.2 鏈球菌整合子PCR擴增結(jié)果37-38
• 3.3.3 鏈球菌基因盒PCR擴增結(jié)果與分析38-41
• 3.3.4 鏈球菌整合子攜帶情況與其耐藥表型的關系分析41-43
• 3.4 討論43-44
• 3.5 小結(jié)44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-53
• 附錄53-58
• 致謝58-59

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