本文關(guān)鍵詞：豬瘟病毒抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立及優(yōu)化

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【摘要】：以原核表達(dá)、純化的豬瘟病毒(CSFV)E2主要抗原區(qū)蛋白為目標(biāo)檢測(cè)物,通過(guò)對(duì)各反應(yīng)條件的篩選和優(yōu)化,建立了檢測(cè)CSFV抗體的間接ELISA檢測(cè)方法。結(jié)果表明,本研究的最佳抗原包被濃度和最佳血清稀釋度分別為1.0μg/mL和1∶200;最佳抗原包被條件和最佳封閉時(shí)間均為37℃1h;最佳酶標(biāo)二抗稀釋度和作用時(shí)間分別為1∶10 000和37℃45min;陰性臨界值判斷標(biāo)準(zhǔn)為當(dāng)D450nm0.30時(shí)豬血清樣品為CSFV抗體陰性;批內(nèi)和批間重復(fù)試驗(yàn)變異系數(shù)分別為4.8%和6.9%,表明該檢測(cè)方法具有較高的穩(wěn)定性;特異性試驗(yàn)結(jié)果表明,間接ELISA方法與豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒(PCV)、豬細(xì)小病毒(PPV)陽(yáng)性血清均無(wú)交叉反應(yīng);應(yīng)用該間接ELISA方法隨機(jī)檢測(cè)80份豬血清樣品,與進(jìn)口阻斷ELISA試劑盒相比其陽(yáng)性符合率為83.58%,陰性符合率為76.92%,總體符合率為80.25%。結(jié)果表明本試驗(yàn)建立的間接ELISA方法具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心;新鄉(xiāng)學(xué)院生物技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 豬瘟病毒 E蛋白 間接ELISA 抗體檢測(cè)
【基金】：河南省基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究(122300410003) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31201877) 新鄉(xiāng)學(xué)院博士科研啟動(dòng)經(jīng)費(fèi)(1399020164) 河南省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(13A230837)
【分類號(hào)】：S852.4
【正文快照】： 豬瘟(classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起豬的一種高度接觸性、致死性傳染病[1]。病毒基因組為12.3kb的單股正鏈線性RNA,包含1個(gè)開(kāi)放性閱讀框架(ORF),編碼1個(gè)由3 898個(gè)氨基酸組成的多聚蛋白,包括4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(C、E0、E1、E2)和8個(gè)

【相似文獻(xiàn)】

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