本文關(guān)鍵詞：鴨疫里默氏桿菌與大腸桿菌耐藥性的傳遞研究

  更多相關(guān)文章： 鴨疫里默氏菌 大腸桿菌 混合傳代培養(yǎng) 耐藥性傳遞

【摘要】：鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)病和大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)病是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)最為嚴(yán)重的兩大細(xì)菌性傳染病,兩種細(xì)菌感染均可引起鴨敗血癥、纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎等。這兩種病原在臨床上常出現(xiàn)混合感染現(xiàn)象,混合感染容易發(fā)生耐藥性的水平傳遞,使得二者的耐藥譜擴(kuò)大,導(dǎo)致藥物治療失敗,給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。作為細(xì)菌混合感染的耐藥性傳遞已有不少研究,但是鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌兩個不同種屬間耐藥性的傳遞研究還沒有報道。本文篩選出耐藥性的RA和敏感性的E.coli進(jìn)行體外混合傳代培養(yǎng),并對混合傳代培養(yǎng)后篩選到的耐藥性大腸桿菌進(jìn)行了耐藥性分析。本實(shí)驗(yàn)從山東地區(qū)疑似發(fā)病鴨進(jìn)行病料收集、細(xì)菌分離鑒定共獲得鴨疫里默氏桿菌4株,采用k-B紙片法進(jìn)行了4株RA分離株及2株E.coli標(biāo)準(zhǔn)株對24種常用抗生素的藥物敏感試驗(yàn)。藥敏結(jié)果顯示,4株RA對氨基糖苷類(慶大霉素、妥布霉素和卡那霉素)及喹諾酮類(環(huán)丙沙星、氧氟沙星和諾氟沙星)均為耐藥,2株大腸桿菌對這6種抗生素均為敏感,根據(jù)具體數(shù)據(jù),選擇RA P3菌株和E.coli標(biāo)準(zhǔn)株8099分別作為耐藥性轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)的供體菌和受體菌,用于混合傳代培養(yǎng)。并采用試管雙倍稀釋法進(jìn)行了RA P3菌株和E.coli標(biāo)準(zhǔn)株CMCC 8099對慶大霉素、妥布霉素、卡那霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星和諾氟沙星最低抑菌濃度(MIC)的測定。篩選出的RA和E.coli試驗(yàn)菌株,進(jìn)行混合傳代培養(yǎng),因RA培養(yǎng)對營養(yǎng)條件要求比較高,需摸索兩種菌混合傳代培養(yǎng)的條件。最終確定混合傳代培養(yǎng)條件:RA和E.coli先單獨(dú)培養(yǎng);混合培養(yǎng)第一代,取10μL E.coli菌懸液(濃度為1.5×103 CFU/mL)與50μL RA菌懸液(濃度為15×108 CFU/mL)接種在4 mL含4%血清的胰蛋白胨大豆肉湯TSB培養(yǎng)基中,混合培養(yǎng)9~12 h;從混合培養(yǎng)第二代開始,取10μL混合培養(yǎng)上一代菌液(濃度為1.5×105 CFU/mL)與50μL RA菌液(濃度為15×108 CFU/mL)接種在4 mL含4%血清的TSB培養(yǎng)基中,混合培養(yǎng)9~12 h。混合傳代培養(yǎng)后耐藥性大腸桿菌的篩選,吸取每一代的混合培養(yǎng)菌液涂布高于E.coli標(biāo)準(zhǔn)株8099兩倍最低抑菌濃度的麥康凱抗性篩選板,環(huán)丙沙星(0.25μg/mL)、氧氟沙星(1μg/mL)、諾氟沙星(1μg/mL)抗性板上均無菌生長,卡那霉素(32μg/mL)、慶大霉素(10μg/mL)、妥布霉素(8μg/mL)抗性板上有單個菌落,分別命名為E1、E2、E3�；旌蟼鞔囵B(yǎng)前后耐藥性分析,篩選到的大腸桿菌耐藥菌株E1、E2、E3對上述6種抗生素進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)和最低抑菌濃度的測定,與大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株8099相比,耐藥菌株E1對氨基糖苷類的慶大霉素、妥布霉素和卡那霉素敏感性顯著變化,最低抑菌濃度也顯著的增加。為了進(jìn)一步研究RA與E.coli間耐藥性的水平傳遞,選取氨基糖苷類耐藥基因,氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶基因aac6-Ⅰ及aac3-Ⅱ、氨基糖苷腺苷轉(zhuǎn)移酶基因aadA1、氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶基因aph3-Ⅱ設(shè)計(jì)引物,利用PCR方法對RA P3菌株、E.coli標(biāo)準(zhǔn)株8099及篩選到的大腸桿菌耐藥株E1進(jìn)行檢測和序列測定。結(jié)果顯示,RA P3菌株及篩選的E.coli耐藥菌株E1均檢測到了基因aac6-Ⅰ,其他基因均未檢測到。大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株8099未檢測到任何耐藥基因。本研究對鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌成功進(jìn)行了混合傳代培養(yǎng),同時對混合傳代培養(yǎng)前后耐藥性進(jìn)行了分析,確定了RA與E.coli間耐藥性的水平傳遞,為在此研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行敏感藥物篩選和新藥研發(fā)打下了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鴨疫里默氏菌 大腸桿菌 混合傳代培養(yǎng) 耐藥性傳遞
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一章 綜述9-19
• 1. 鴨疫里默氏菌研究概述9-11
• 2. 禽大腸桿菌病研究11-13
• 3. 細(xì)菌耐藥性研究13-16
• 4. 細(xì)菌共感染耐藥性轉(zhuǎn)移研究16-17
• 5. 選題依據(jù)及研究意義17-19
• 第二章 臨床鴨疫里默氏菌的分離鑒定及試驗(yàn)菌株的選擇19-30
• 1. 材料19
• 2. 方法19-22
• 3. 結(jié)果22-27
• 4. 討論27-30
• 第三章 鴨疫里默氏菌和大腸桿菌體外混合傳代培養(yǎng)及耐藥菌株的篩選30-36
• 1. 材料30
• 2. 方法30-32
• 3. 結(jié)果32-34
• 4. 討論34-36
• 第四章 體外混合傳代前后耐藥性分析36-46
• 1. 材料36
• 2. 方法36-39
• 3. 結(jié)果39-43
• 4. 討論43-46
• 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-54
• 附錄54-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章及專利58-60
• 致謝60

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