本文關(guān)鍵詞：華南地區(qū)豬場流感病毒血清學(xué)調(diào)查及重組H3N2亞型SIV候選疫苗株的初步研究

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【摘要】：豬是流感病毒重要的宿主之一,不僅能感染人流感病毒,而且能感染禽流感病毒,對當(dāng)前的流感生態(tài)環(huán)境的形成起到重要的作用。甲型H1N1/2009流感病毒的爆發(fā),說明豬能夠獨立地促進(jìn)流感毒株的產(chǎn)生。豬流感(Swine Influenza,SI)由豬流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起,是一種急性和高度感染性呼吸系統(tǒng)性疾病,一般呈現(xiàn)地方流行性。典型的臨床癥狀表現(xiàn)為突發(fā)性咳嗽、高熱、嗜睡、厭食、鼻涕、呼吸困難和體重下降等,具有高發(fā)病率但低死亡率的特征。SI極易導(dǎo)致繼發(fā)感染或混合感染,以致進(jìn)一步發(fā)展成豬呼吸道疾病綜合癥,造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。H1N1、H1N2和H3N2亞型豬流感病毒是目前主要的流行毒株。為了調(diào)查中國華南地區(qū)豬群豬流感病毒和甲型H1N1/2009流感病毒(H1N1pdm09)的流行情況,本研究于2013年10月至2014年9月期間,在中國華南地區(qū)的廣東省、江西省、湖南省、福建省和廣西壯族自治區(qū)共73個豬場,采集未進(jìn)行流感疫苗免疫的臨床健康豬的血清樣品2,208份。采用歐亞類禽豬流感H1N1、類人豬流感H3N2和甲型H1N1pdm09流感病毒,通過血凝抑制試驗(HI),對這2,208份血清進(jìn)行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清學(xué)檢測。結(jié)果顯示流感病毒抗體為陽性的血清共1,269份(57.42%)。SIV和H1N1pdm09流感病毒的流行存在明顯的區(qū)域性差異,其中廣東省和廣西壯族自治區(qū)的感染率最高(p0.01),分別為64.48%和75.00%。EA H1N1、H3N2 SIV和H1N1pdm09流感病毒抗體陽性率分別是22.51%、32.97%和26.49%。H1N1pdm09流感病毒的抗體幾何平均滴度(Geometric Mean Antibody Titers,GMT)最高(91.93±1.04,p0.05)。EA H1N1和H3N2 SIV在冬季血清陽性率最高,然而在冬末(2月)陽性率卻最低(p0.01)。H1N1pdm09流感病毒抗體陽性率在5月和9月出現(xiàn)高峰(p0.01)。母豬體內(nèi)的EA H1N1和H1N1pdm09流感病毒抗體陽性率分別為25.93%和28.04%,均比仔豬(19.63%和23.29%)和育肥豬(22.32%和27.16%)高,但仔豬的H3N2 SIV抗體陽性率卻比較高。本研究為華南地區(qū)豬場SIV和H1N1pdm09流感病毒的預(yù)防提供參考依據(jù)。普遍認(rèn)為,疫苗是抵抗流感病毒感染最有效的方法。至今,油佐劑的全病毒滅活疫苗是應(yīng)用最廣泛且技術(shù)最成熟的豬流感病毒疫苗。本研究利用反向遺傳技術(shù),成功構(gòu)建了H3N2亞型豬流感病毒L22的8質(zhì)粒系統(tǒng)。將A/swine/Guangdong/L22/2010(H3N2)豬流感病毒的HA、NA基因與A/Puerto Rico/8/1934的6個內(nèi)部基因片段重組,拯救出rL22/PR8。經(jīng)鑒定,rL22/PR8的基因序列與親本毒株和PR8的相應(yīng)基因片段序列一致。將rL22/PR8接種至9日齡的SPF雞胚后,其HA血凝效價提高到210,EID50結(jié)果提高到1.78×109EID50/mL,且未見雞胚死亡,說明重組病毒rL22/PR8具有良好的雞胚適應(yīng)性。將rL22/PR8全病毒滅活疫苗輔以佐劑免疫小鼠,通過檢測血清中的HI抗體評價其免疫效果,結(jié)果表明該疫苗能有效刺激小鼠產(chǎn)生高滴度的HI抗體,可達(dá)1920。研究為疫苗的研發(fā)奠定了基礎(chǔ),rL22/PR8可以作為疫苗候選株。
【關(guān)鍵詞】：豬流感 血清學(xué)調(diào)查 滅活疫苗 反向遺傳學(xué)技術(shù) 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 縮略詞表7-11
• 1 前言11-23
• 1.1 豬流感概述11-19
• 1.1.1 豬流感的感染特征11-12
• 1.1.2 豬流感病原學(xué)12-16
• 1.1.3 豬流感病毒的復(fù)制16-17
• 1.1.4 豬流感的流行病學(xué)17-19
• 1.2 豬流感疫苗19-21
• 1.2.1 滅活疫苗19
• 1.2.2 重組蛋白疫苗19-20
• 1.2.3 載體疫苗20
• 1.2.4 DNA疫苗20-21
• 1.3 反向遺傳技術(shù)21-22
• 1.4 本實驗研究的目的和意義22-23
• 2 材料與方法23-42
• 2.1 材料23-28
• 2.1.1 毒株23
• 2.1.2 血清樣品收集23-24
• 2.1.3 儀器及試劑24-26
• 2.1.4 菌種26
• 2.1.5 雞胚26
• 2.1.6 細(xì)胞系26
• 2.1.7 實驗動物26-27
• 2.1.8 雞紅細(xì)胞27
• 2.1.9 質(zhì)粒和載體27
• 2.1.10 引物27-28
• 2.2 試驗方法28-42
• 2.2.1 豬流感病毒和甲型流感病毒的血清學(xué)調(diào)查的方法28-34
• 2.2.2 重組H3N2流感病毒疫苗株的構(gòu)建與鑒定34-41
• 2.2.3 重組H3N2滅活疫苗的免疫效果評價的方法41-42
• 3 結(jié)果與分析42-53
• 3.1 血清學(xué)調(diào)查結(jié)果42-48
• 3.1.1 豬流感病毒HA基因擴(kuò)增結(jié)果42
• 3.1.2 豬流感病毒HA基因序列分析結(jié)果42-44
• 3.1.3 血清抗體檢測結(jié)果44-45
• 3.1.4 血清抗體滴度分布情況以及其GMT45-46
• 3.1.5 流感病毒的季節(jié)性流行特征46
• 3.1.6 華南地區(qū)不同省份豬場流感病毒的感染情況46-47
• 3.1.7 不同生長階段豬群流感病毒的感染情況47-48
• 3.2 重組疫苗株的構(gòu)建與鑒定結(jié)果48-52
• 3.2.1 H3N2豬流感病毒L22的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果48
• 3.2.2 重組p HW2000陽性質(zhì)粒鑒定結(jié)果48-49
• 3.2.3 拯救病毒的鑒定結(jié)果49-50
• 3.2.4 病毒HA血凝效價的測定結(jié)果50-51
• 3.2.5 病毒EID50的測定結(jié)果51
• 3.2.6 病毒TCID50的測定結(jié)果51
• 3.2.7 病毒的雞胚生長曲線結(jié)果51-52
• 3.3 滅活疫苗的免疫效果評價52-53
• 4 討論53-59
• 4.1 血清學(xué)調(diào)查結(jié)果討論53-55
• 4.2 制備重組H3N2滅活疫苗的結(jié)果討論55-57
• 4.3 疫苗免疫效果討論57-58
• 4.4 全文總結(jié)58-59
• 致謝59-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 附錄69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 何淑儀;馬駿;方博;孫彥闊;羅永峰;秦鋒;鄭運(yùn);曹振鵬;周沛;粟碩;張桂紅;;華南地區(qū)豬場豬流感和甲型H1N1/2009流感病毒的血清學(xué)調(diào)查[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2015年09期

2 王艷平;;影響疫苗免疫效果的因素及措施[J];中國動物保健;2015年08期

3 李穎婷;謝劍鋒;鄭奎城;;流感病毒反向遺傳技術(shù)的研究進(jìn)展[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2015年03期

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本文編號：875214