本文關(guān)鍵詞：雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)

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【摘要】：產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)是革蘭氏陽性厭氧桿菌,普遍存在于環(huán)境以及人和動(dòng)物胃腸道中,是人和動(dòng)物胃腸道正常菌群,同時(shí)也是多種重要疾病的病原。產(chǎn)氣莢膜梭菌能夠產(chǎn)生至少17種外毒素和酶,這些毒素和酶與產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的各種疾病密切相關(guān),可根據(jù)其中4種主要毒素的產(chǎn)生及基因攜帶狀況將C.perfringens分為5個(gè)毒素型(A(α)、B(α、β、ε)、C(α、β)、D(α、ε)和E(α、ι))。產(chǎn)氣莢膜梭菌的毒素基因和抗藥基因可隨著質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移,在同種細(xì)菌或不同種細(xì)菌之間穿梭,擴(kuò)散細(xì)菌的毒素基因和抗藥性基因。實(shí)驗(yàn)中比較分析3種不同的產(chǎn)氣莢膜梭菌的質(zhì)粒提取方法,并通過方法改進(jìn)獲得了有效的質(zhì)粒提取方法,為進(jìn)一步研究質(zhì)�？顾幮曰虻於ɑA(chǔ)。為了解一些地區(qū)產(chǎn)氣莢膜梭菌的毒素型分布情況及其抗藥性情況,于2014年5月至2015年8月從廣東新興、開平、廣西桂林、武鳴、玉林、云南石林,陸良、安寧地區(qū),甘肅景泰,海南文昌、瓊海地區(qū)共5省11個(gè)區(qū)縣的養(yǎng)雞場采集樣品704個(gè),分離產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株199株,分離率為28.5%,其中A型187株,C型12株。檢測到NetB毒素基因陽性菌株6株,β2毒素基因陽性菌株54株。實(shí)驗(yàn)選取11種獸醫(yī)常用抗生素進(jìn)行產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥物敏感性檢測,根據(jù)MIC值判斷產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)這些藥物的敏感性,分析不同地區(qū)細(xì)菌的抗藥譜以及抗藥性程度。C.perfringens質(zhì)粒的提取實(shí)驗(yàn)根據(jù)Mahony.et al(1986),Roberts.et al(1986)以及Hussain.et al(1993)的產(chǎn)氣莢膜梭菌質(zhì)粒提取方法進(jìn)行質(zhì)粒提取方法的優(yōu)化,結(jié)果顯示Mahony.et al(1986)的方法提取質(zhì)粒效果不理想,幾乎檢測不到結(jié)果。Roberts(1986)的方法雜質(zhì)較少但是質(zhì)粒濃度很低,因此我們?cè)赗oberts(1986)方法的基礎(chǔ)上同時(shí)吸取了Hussain.et al(1993)的質(zhì)粒提取經(jīng)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行改進(jìn),取得了較好的結(jié)果。提取結(jié)果條帶清晰但濃度不滿足測序條件,且容易降解。
【關(guān)鍵詞】：產(chǎn)氣莢膜梭菌 多重PCR 毒素型分型 抗藥性 質(zhì)粒提取
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文縮略表9-10
• 第一章 引言10-18
• 1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌及其對(duì)家禽養(yǎng)殖業(yè)的危害10-15
• 1.1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌10-11
• 1.1.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌的5種毒素型及引起的疾病11-13
• 1.1.3 產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的雞的壞死性腸炎13-15
• 1.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌質(zhì)粒研究進(jìn)展15-18
• 1.2.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素質(zhì)粒研究進(jìn)展15-16
• 1.2.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌抗藥性質(zhì)粒研究進(jìn)展16-18
• 第二章 產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離純化和毒素分型18-34
• 2.1 材料和主要儀器18-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1.2 主要儀器19
• 2.2 方法19-24
• 2.2.1 樣品采集19
• 2.2.2 細(xì)菌分離與純化19
• 2.2.3 菌株保存19-20
• 2.2.4 細(xì)菌形態(tài)觀察和生化鑒定20
• 2.2.5 分子生物學(xué)鑒定20-24
• 2.3 結(jié)果24-31
• 2.3.1 菌株分離24-25
• 2.3.2 形態(tài)學(xué)觀察25-26
• 2.3.3 生理生化鑒定26
• 2.3.4 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果26-31
• 2.4 討論31-33
• 2.5 小結(jié)33-34
• 第三章 產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥敏實(shí)驗(yàn)34-38
• 3.1 主要試劑和藥物34
• 3.1.1 主要試劑及儀器34
• 3.1.2 主要藥物及純度34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 3.2.1 藥物溶液配制34-35
• 3.2.2 藥敏實(shí)驗(yàn)方法35
• 3.3 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-36
• 3.4 討論與小結(jié)36-38
• 3.4.1 討論36-37
• 3.4.2 小結(jié)37-38
• 第四章 產(chǎn)氣莢膜梭菌質(zhì)粒的提取38-42
• 4.1 材料38
• 4.1.1 材料和試劑38
• 4.1.2 主要儀器38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 4.2.1 細(xì)菌的復(fù)蘇38-39
• 4.2.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌質(zhì)粒的提取39-40
• 4.2.2.1 方法一39
• 4.2.2.2 方法二39-40
• 4.2.3 瓊脂糖凝膠電泳40
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40
• 4.4 討論和小結(jié)40-42
• 4.4.1 討論40-41
• 4.4.2 小結(jié)41-42
• 第五章 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 致謝48-49
• 作者簡介49

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