本文關鍵詞：雞源產氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實驗

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【摘要】：產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)是革蘭氏陽性厭氧桿菌,普遍存在于環(huán)境以及人和動物胃腸道中,是人和動物胃腸道正常菌群,同時也是多種重要疾病的病原。產氣莢膜梭菌能夠產生至少17種外毒素和酶,這些毒素和酶與產氣莢膜梭菌引起的各種疾病密切相關,可根據其中4種主要毒素的產生及基因攜帶狀況將C.perfringens分為5個毒素型(A(α)、B(α、β、ε)、C(α、β)、D(α、ε)和E(α、ι))。產氣莢膜梭菌的毒素基因和抗藥基因可隨著質粒的轉移,在同種細菌或不同種細菌之間穿梭,擴散細菌的毒素基因和抗藥性基因。實驗中比較分析3種不同的產氣莢膜梭菌的質粒提取方法,并通過方法改進獲得了有效的質粒提取方法,為進一步研究質�？顾幮曰虻於ɑA。為了解一些地區(qū)產氣莢膜梭菌的毒素型分布情況及其抗藥性情況,于2014年5月至2015年8月從廣東新興、開平、廣西桂林、武鳴、玉林、云南石林,陸良、安寧地區(qū),甘肅景泰,海南文昌、瓊海地區(qū)共5省11個區(qū)縣的養(yǎng)雞場采集樣品704個,分離產氣莢膜梭菌菌株199株,分離率為28.5%,其中A型187株,C型12株。檢測到NetB毒素基因陽性菌株6株,β2毒素基因陽性菌株54株。實驗選取11種獸醫(yī)常用抗生素進行產氣莢膜梭菌的藥物敏感性檢測,根據MIC值判斷產氣莢膜梭菌對這些藥物的敏感性,分析不同地區(qū)細菌的抗藥譜以及抗藥性程度。C.perfringens質粒的提取實驗根據Mahony.et al(1986),Roberts.et al(1986)以及Hussain.et al(1993)的產氣莢膜梭菌質粒提取方法進行質粒提取方法的優(yōu)化,結果顯示Mahony.et al(1986)的方法提取質粒效果不理想,幾乎檢測不到結果。Roberts(1986)的方法雜質較少但是質粒濃度很低,因此我們在Roberts(1986)方法的基礎上同時吸取了Hussain.et al(1993)的質粒提取經驗對實驗方法進行改進,取得了較好的結果。提取結果條帶清晰但濃度不滿足測序條件,且容易降解。
【關鍵詞】：產氣莢膜梭菌 多重PCR 毒素型分型 抗藥性 質粒提取
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文縮略表9-10
• 第一章 引言10-18
• 1.1 產氣莢膜梭菌及其對家禽養(yǎng)殖業(yè)的危害10-15
• 1.1.1 產氣莢膜梭菌10-11
• 1.1.2 產氣莢膜梭菌的5種毒素型及引起的疾病11-13
• 1.1.3 產氣莢膜梭菌引起的雞的壞死性腸炎13-15
• 1.2 產氣莢膜梭菌質粒研究進展15-18
• 1.2.1 產氣莢膜梭菌毒素質粒研究進展15-16
• 1.2.2 產氣莢膜梭菌抗藥性質粒研究進展16-18
• 第二章 產氣莢膜梭菌的分離純化和毒素分型18-34
• 2.1 材料和主要儀器18-19
• 2.1.1 實驗材料18-19
• 2.1.2 主要儀器19
• 2.2 方法19-24
• 2.2.1 樣品采集19
• 2.2.2 細菌分離與純化19
• 2.2.3 菌株保存19-20
• 2.2.4 細菌形態(tài)觀察和生化鑒定20
• 2.2.5 分子生物學鑒定20-24
• 2.3 結果24-31
• 2.3.1 菌株分離24-25
• 2.3.2 形態(tài)學觀察25-26
• 2.3.3 生理生化鑒定26
• 2.3.4 分子生物學鑒定結果26-31
• 2.4 討論31-33
• 2.5 小結33-34
• 第三章 產氣莢膜梭菌的藥敏實驗34-38
• 3.1 主要試劑和藥物34
• 3.1.1 主要試劑及儀器34
• 3.1.2 主要藥物及純度34
• 3.2 實驗方法34-35
• 3.2.1 藥物溶液配制34-35
• 3.2.2 藥敏實驗方法35
• 3.3 藥敏實驗結果35-36
• 3.4 討論與小結36-38
• 3.4.1 討論36-37
• 3.4.2 小結37-38
• 第四章 產氣莢膜梭菌質粒的提取38-42
• 4.1 材料38
• 4.1.1 材料和試劑38
• 4.1.2 主要儀器38
• 4.2 實驗方法38-40
• 4.2.1 細菌的復蘇38-39
• 4.2.2 產氣莢膜梭菌質粒的提取39-40
• 4.2.2.1 方法一39
• 4.2.2.2 方法二39-40
• 4.2.3 瓊脂糖凝膠電泳40
• 4.3 實驗結果40
• 4.4 討論和小結40-42
• 4.4.1 討論40-41
• 4.4.2 小結41-42
• 第五章 全文結論42-43
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 作者簡介49

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1 孔慶娟;;產氣莢膜梭菌α毒素的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年01期

2 李璐;趙寶華;;產氣莢膜梭菌主要致死性毒素的研究進展[J];畜牧與飼料科學;2011年04期

3 于立新;蘇佳;趙曉慧;馬學恩;么宏強;;A型產氣莢膜梭菌α毒素的基因擴增和提純鑒定[J];內蒙古農業(yè)大學學報(自然科學版);2011年04期

4 趙宇亮;張聰敏;王琳;霍萍萍;趙寶華;;產氣莢膜梭菌α毒素的研究進展[J];安徽農業(yè)科學;2013年12期

5 陳興祥,薛家賓,黃克和,王啟明,徐為中;A型產氣莢膜梭菌α毒素的提純試驗[J];畜牧與獸醫(yī);2002年03期

6 李永明,王開功,文明,周碧君;產氣莢膜梭菌α-毒素的提取與鑒定[J];中國獸醫(yī)科技;2002年02期

7 文其乙,劉秀梵;多重PCR方法快速檢測糞樣中產氣莢膜梭菌[J];中國預防獸醫(yī)學報;2002年01期

8 文明,王開功;幾種分離產氣莢膜梭菌培養(yǎng)基的比較[J];中國獸醫(yī)雜志;2002年12期

9 梁源祥,李會創(chuàng),冼恩廣,李布勇;牛產氣莢膜梭菌的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)科技;2004年05期

10 趙志軍,許崇波,曾瑾,王玉炯;A型產氣莢膜梭菌α毒素基因的高效表達[J];生物技術;2004年05期

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1 王海榮;呂長輝;趙凱;柴同杰;陸承平;;山東省兔腹瀉病例產氣莢膜梭菌的分離及基因定型[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第十二次人獸共患病學術研討會暨第六屆第十四次教學專業(yè)委員會論文集[C];2012年

2 么宏強;蘇佳;于立新;馬學恩;;A型產氣莢膜梭菌α毒素的提純鑒定及其基因的克隆[A];2012年中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分會暨中國病理生理學會動物病理生理專業(yè)委員會學術研討會論文集[C];2012年

3 田冬青;蔣玉文;陳小云;楊京嵐;丁家波;;產氣莢膜梭菌多重PCR定型方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2006學術年會論文集（下冊）[C];2006年

4 李娜;吳建勇;李建軍;楊學云;王登峰;段新華;王治才;;D型產氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆與高效表達[A];生態(tài)環(huán)境與畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展學術研討會暨中國畜牧獸醫(yī)學會2012年學術年會和第七屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術研討會會議論文集——T07家畜微生態(tài)與健康養(yǎng)殖專題[C];2012年

5 許崇利;歐陽紅生;許崇波;張艷平;;乳糖誘導劑對重組C型產氣莢膜梭菌α毒素基因表達的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第十二次人獸共患病學術研討會暨第六屆第十四次教學專業(yè)委員會論文集[C];2012年

6 王光華;周繼章;藺國珍;鄭福英;曹小安;韓文祥;楊良存;宋竹青;邱昌慶;;產氣莢膜梭菌青海分離株α毒素基因克隆與核苷酸序列分析[A];第九屆中國生物毒素學術研討會論文摘要[C];2009年

7 梁光軍;趙李祥;楊旭芹;賈紅;張小榮;文其乙;劉秀梵;;應用多重PCR方法鑒定糞樣和食品中產氣莢膜梭菌[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

8 許崇波;陳向東;許崇利;逄越;高鳳山;;C型產氣莢膜梭菌α、β1、β2基因融合[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第三屆豬病防控學術研討會論文集[C];2008年

9 裴鳴;張和平;唐昌茂;史寧花;孔芳玲;于維東;白慧勤;馬遠征;;家畜產氣莢膜梭菌病的病理形態(tài)學觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分會第十一次獸醫(yī)病理學、第十次動物病理生理學學術研討會論文集[C];2001年

10 李潔萍;倪學勤;曾東;劉麗達;魏豪;;體外篩選拮抗產氣莢膜梭菌的雞源乳酸桿菌[A];第四屆第十次全國學術研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（上冊）[C];2010年

中國博士學位論文全文數據庫 前4條

1 林初文;產氣莢膜梭菌B型C58-1株α、β1和ε毒素的高效表達與免疫效力評價及生產工藝改進[D];吉林大學;2015年

2 王光華;產氣莢膜梭菌的分子診斷與免疫研究[D];中國農業(yè)科學院;2010年

3 蔡玉梅;山東省四大湖（庫）淡水魚產氣莢膜梭菌毒素型調查及致病機理研究[D];山東農業(yè)大學;2008年

4 宋佰芬;產氣莢膜梭菌α毒素基因在干酪乳桿菌基因組中的表達及免疫效果評價[D];東北農業(yè)大學;2014年

中國碩士學位論文全文數據庫 前10條

1 喬藝然;A型產氣莢膜梭菌感染雛雞病理形態(tài)學研究[D];東北農業(yè)大學;2015年

2 吳潔;A型產氣莢膜梭菌家兔感染模型的建立[D];山東農業(yè)大學;2015年

3 劉雪慧;C、D型產氣莢膜梭菌二價類毒素疫苗及抗毒素血清的研制[D];山東農業(yè)大學;2015年

4 聶思靜;產氣莢膜梭菌NetB毒素阻斷ELISA方法的建立與應用[D];東北農業(yè)大學;2015年

5 何宇;產氣莢膜梭菌β、ε毒素不同片段的融合表達及免疫原性研究[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2011年

6 馬壯;廣州市冷鮮雞產氣莢膜梭菌的污染分析及netB菌株的致病性研究[D];甘肅農業(yè)大學;2016年

7 鮑長磊;產氣莢膜梭菌不同毒素型多重PCR和α毒素抗體ELISA檢測方法的建立及初步應用[D];西北農林科技大學;2016年

8 孫劉妹;產氣莢膜梭菌四聯外毒素基因α-β2-ε-β1在重組干酪乳酸桿菌表達及遺傳穩(wěn)定性分析[D];東北農業(yè)大學;2016年

9 王瑩瑩;A型產氣莢膜梭菌主要抗原蛋白篩選及其免疫保護作用[D];東北農業(yè)大學;2016年

10 康文娟;雞源產氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實驗[D];中國農業(yè)科學院;2016年

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