發(fā)布時(shí)間：2017-09-17 16:07

  本文關(guān)鍵詞：沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的研制及其應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 沙丁胺醇 膠體金 免疫層析試紙條 動(dòng)物組織 飼料

【摘要】：沙丁胺醇是一種人工合成的選擇性β-受體激動(dòng)劑藥物,也是治療平喘類(lèi)疾病的藥物。這種物質(zhì)非法使用于動(dòng)物飼養(yǎng)中,可以提高瘦肉率,但是人們食用含有沙丁胺醇含量高的動(dòng)物組織后,會(huì)有頭痛、神經(jīng)過(guò)敏、心悸等癥狀,嚴(yán)重會(huì)損傷肝臟,威脅著人們的身體健康。目前,沙丁胺醇的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是色譜法,此方法樣品前處理復(fù)雜,需要大型儀器和專(zhuān)業(yè)人員操作,耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。膠體金免疫層析技術(shù)是一種將膠體金作為標(biāo)記物免疫學(xué)分析技術(shù),應(yīng)用于食品安全、生物技術(shù)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、人類(lèi)醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域,此技術(shù)優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)快速、靈敏,操作簡(jiǎn)單方便,成本低易于工廠化生產(chǎn)。本研究旨在建立一種沙丁胺醇的膠體金免疫層析檢測(cè)方法。通過(guò)采用檸檬酸三鈉法制備兩種不同粒徑的膠體金溶液,將具有沙丁胺醇特異性的金標(biāo)探針均勻噴在GL0194型的玻璃纖維素膜上,烘干后即為金標(biāo)墊。經(jīng)比較試驗(yàn)選用Millipore 135硝酸纖維素膜作為層析膜;控制線(T線)選用1.0 mg/mL的羊抗兔IgG;用濃度為0.6 mg/mL的沙丁胺醇包被抗原(SAL-BSA)噴涂檢測(cè)線(C線),最后組裝成試紙條,并且對(duì)試紙條應(yīng)用于動(dòng)物組織和飼料樣品前處理方法進(jìn)行單因素優(yōu)化,選出合適的方案。通過(guò)比較兩種粒徑大小不同的膠體金溶液進(jìn)行最佳蛋白標(biāo)記量、最適pH以及金標(biāo)探針制備的離心條件的確定,進(jìn)而選擇出適合沙丁胺醇的最佳膠體金溶液是在100 mL的0.01%膠體金溶液中添加1%檸檬酸三鈉的量為1.8 mL所對(duì)應(yīng)的膠體金粒徑;通過(guò)紫外-可見(jiàn)光分析和外觀觀察試驗(yàn)確定了金標(biāo)探針的最佳蛋白標(biāo)記量為6μg/mL,最適pH為0.2mol/L碳酸鉀的加入量為8μL/mL;金標(biāo)復(fù)溶液的配方為0.01 mol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液加10%蔗糖、0.5%PEG、1%BSA和0.1%Na Cl,稀釋倍數(shù)為6倍;樣品墊的處理液配方為0.01 mol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液加1%的蔗糖和1%的吐溫-20。樣品前處理方案為動(dòng)物組織采用的前處理方法是5%三氯乙酸水解和超聲提取結(jié)合的方式,飼料采用的是0.2mol/L磷酸-甲醇(V:V,4:1)和超聲提取結(jié)合的方法。單因素優(yōu)化的結(jié)果為:樣品用量為2g,提取液體積為4 mL,超聲時(shí)間為8 min,離心時(shí)間為5 min。用制備好的免疫層析試紙條檢測(cè)沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品與已知含量的沙丁胺醇的動(dòng)物組織和飼料,檢測(cè)限分別為3μg/L、10μg/kg和12μg/kg,在其檢測(cè)限范圍內(nèi)重現(xiàn)性為100%,沒(méi)有假陽(yáng)性及假陰性出現(xiàn)。對(duì)制備的沙丁胺醇試紙條的驗(yàn)證試驗(yàn)表明,該試紙條穩(wěn)定性良好,對(duì)沙丁胺醇的特異性強(qiáng),可以很好地應(yīng)用于動(dòng)物組織和飼料樣品的實(shí)際檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：沙丁胺醇 膠體金 免疫層析試紙條 動(dòng)物組織 飼料
【學(xué)位授予單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S859.84;S816.17
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 主要符號(hào)表11-12
• 第1章 引言12-24
• 1.1 沙丁胺醇概述12-14
• 1.1.1 沙丁胺醇的理化性質(zhì)12
• 1.1.2 沙丁胺醇的藥理作用12-13
• 1.1.3 沙丁胺醇的營(yíng)養(yǎng)再分配作用13
• 1.1.4 沙丁胺醇的毒性作用13
• 1.1.5 沙丁胺醇的國(guó)內(nèi)外應(yīng)用現(xiàn)狀13-14
• 1.2 沙丁胺醇的代謝規(guī)律14
• 1.2.1 沙丁胺醇的吸收代謝規(guī)律14
• 1.2.2 沙丁胺醇在動(dòng)物體內(nèi)殘留的消除規(guī)律14
• 1.3 沙丁胺醇的國(guó)內(nèi)外檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)14-17
• 1.3.1 國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)14-17
• 1.3.2 國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)17
• 1.4 沙丁胺醇?xì)埩魴z測(cè)方法17-20
• 1.4.1 感官檢測(cè)法17-18
• 1.4.2 液相色譜法18
• 1.4.3 氣相色譜法18
• 1.4.4 免疫分析法(IA)18-19
• 1.4.5 毛細(xì)管電泳法（CE）19
• 1.4.6 熒光光度法和電化學(xué)免疫法19-20
• 1.5 膠體金免疫層析技術(shù)的研究現(xiàn)狀20-23
• 1.5.1 膠體金免疫層析及其原理20
• 1.5.2 膠體金免疫層析的特點(diǎn)20-21
• 1.5.3 膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用21-22
• 1.5.4 膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)及展望22-23
• 1.6 論文研究目的與研究?jī)?nèi)容23-24
• 1.6.1 研究目的23
• 1.6.2 研究?jī)?nèi)容23-24
• 第2章 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的研制24-49
• 2.1 試驗(yàn)材料24-25
• 2.1.1 主要藥品試劑24-25
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備25
• 2.1.3 主要試驗(yàn)耗材25
• 2.2 試驗(yàn)方法25-32
• 2.2.1 膠體金溶液的制備25-26
• 2.2.2 膠體金溶液質(zhì)量的鑒定26
• 2.2.3 金標(biāo)探針的制備26-28
• 2.2.4 金標(biāo)探針的鑒定及分析28-29
• 2.2.5 樣品墊的制備29
• 2.2.6 金標(biāo)墊的制備29-30
• 2.2.7 NC膜劃線30
• 2.2.8 試紙條的組裝與結(jié)果判斷30-31
• 2.2.9 試紙條的性能測(cè)定及評(píng)價(jià)31-32
• 2.3 試驗(yàn)結(jié)果32-46
• 2.3.1 膠體金溶液的制備及其質(zhì)量鑒定32-33
• 2.3.2 金標(biāo)探針的制備33-36
• 2.3.3 金標(biāo)探針的鑒定與分析36-38
• 2.3.4 樣品墊的選擇與處理38-39
• 2.3.5 金標(biāo)墊的選擇與制備39-41
• 2.3.6 NC膜劃線41-43
• 2.3.7 試紙條性能測(cè)試43-46
• 2.4 討論46-47
• 2.4.1 膠體金溶液的制備46
• 2.4.2 金標(biāo)探針的制備46-47
• 2.4.3 試紙條的組裝材料47
• 2.4.4 環(huán)境的溫度、濕度47
• 2.5 本章小結(jié)47-49
• 2.5.1 膠體金溶液的制備、鑒定及選擇47-48
• 2.5.2 金標(biāo)探針的鑒定48
• 2.5.3 試紙條的組裝48
• 2.5.4 試紙條性能測(cè)試48-49
• 第3章 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的應(yīng)用49-63
• 3.1 試驗(yàn)材料49-50
• 3.1.1 主要試劑與材料49-50
• 3.1.2 主要儀器設(shè)備50
• 3.2 膠體金免疫層析試紙條樣品的前處理方法選擇50-52
• 3.2.1 新鮮動(dòng)物組織的樣品前處理50-51
• 3.2.2 飼料的樣品前處理51-52
• 3.3 樣品前處理方法的優(yōu)化52-53
• 3.3.1 樣品用量m的選擇52
• 3.3.2 提取液體積V的選擇52
• 3.3.3 超聲提取時(shí)間t_1的選擇52
• 3.3.4 離心時(shí)間t_2的選擇52-53
• 3.4 高效液相色譜法串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)動(dòng)物組織和飼料中的沙丁胺醇53
• 3.4.1 新鮮動(dòng)物組織和飼料的樣品前處理53
• 3.4.2 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)定條件53
• 3.5 樣品前處理方法的選擇結(jié)果53-56
• 3.5.1 新鮮動(dòng)物組織的樣品前處理53-55
• 3.5.2 飼料的樣品前處理55-56
• 3.6 樣品前處理方法的優(yōu)化結(jié)果56-60
• 3.6.1 樣品用量m的選擇56-57
• 3.6.2 提取液體積V的選擇57-58
• 3.6.3 超聲時(shí)間t_1的選擇58
• 3.6.4 離心時(shí)間t_2的選擇58-59
• 3.6.5 樣品檢測(cè)限結(jié)果59-60
• 3.7 沙丁胺醇膠體金免疫層試紙條與HPLC-MS的相關(guān)性60-62
• 3.7.1 HPLC-MS方法的結(jié)果60-61
• 3.7.2 沙丁胺醇試紙條和HPLC-MS的相關(guān)性61-62
• 3.8 討論62
• 3.9 本章小結(jié)62-63
• 3.9.1 膠體金免疫層析試紙條樣品的前處理方法選擇62
• 3.9.2 樣品前處理方法的優(yōu)化及檢測(cè)限62-63
• 第4章 結(jié)論與展望63-65
• 4.1 結(jié)論63-64
• 4.1.1 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的制備63-64
• 4.1.2 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的應(yīng)用64
• 4.2 展望64-65
• 致謝65-66
• 參考文獻(xiàn)66-72

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6 李Y，

本文編號(hào)：870362