本文關鍵詞：三種常用IBV商品弱毒疫苗對廣西主要流行毒株免疫保護作用的比較研究

  更多相關文章： 雞傳染性支氣管炎病毒 商品弱毒疫苗 廣西分離株 免疫保護 病毒載量 細胞因子

【摘要】：雞傳染性支氣管炎(infectious bronchitis, IB)是目前危害全球養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的一種主要疫病,給世界養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴重的損失。疫苗免疫為IB防控主要措施,目前養(yǎng)殖場應用較多的疫苗為H120弱毒苗,近年4/91和LDT3-A弱毒苗使用出現(xiàn)增多趨勢。研究表明,目前廣西大部分IBV流行株發(fā)生了變異,而且絕大多數(shù)流行株與目前常用疫苗株血清型不同。為了解目前常用的商品化弱毒疫苗對廣西IBV主要流行株的免疫保護作用,為選擇正確疫苗進行免疫預防提供參考,本研究選取廣西IBV優(yōu)勢血清型Ⅰ、Ⅱ型的代表性分離株GX-YL5、GX-GL11079以及與4/91血清型相同的血清V型的GX-NN09032,對三種常用商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A進行免疫保護作用的評價和比較。三種商品弱毒疫苗H120、4/91和LDT3-A按照推薦劑量經(jīng)滴鼻點眼途徑對7日齡SPF雛雞進行免疫,免疫后0、1、2、3周分別應用間接ELISA和流式細胞術檢測血清IBV特異性抗體水平和外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞百分含量,同時應用實時熒光定量PCR方法對外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。免疫后3周應用廣西IBV代表性分離株GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032進行交叉攻毒,攻毒后觀察21天,記錄各試驗組的發(fā)病率、死亡率、臨床癥狀和剖檢病變,并進行感染率和保護率的統(tǒng)計；同時應用實時熒光定量PCR方法對攻毒后5、14、21天各試驗組雛雞氣管沖洗液和腎臟組織中的IBV載量及氣管沖洗液中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。ELISA方法檢測結(jié)果表明,免疫后一周各免疫組開始產(chǎn)生抗體,H120和4/91免疫組在免疫后第二周抗體水平達到峰值,LDT3-A在免疫后第三周抗體水平繼續(xù)上升。免疫后三周內(nèi)各免疫組抗體水平與未免疫組比較差異極顯著(P0.01)或差異顯著(P0.05), LDT3-A免疫組抗體水平顯著(P0.05)高于H120和4/91免疫組,H120免疫組抗體水平略高于4/91免疫組,但差異不顯著(P0.05)。流式細胞術檢測結(jié)果表明,免疫后三周內(nèi)各免疫組CD4+、CD8+T淋巴細胞百分含量呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢,均顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)高于未免疫組,4/91免疫組CD4+、CD8+T淋巴細胞含量在整體水平上要比LDT3-A免疫組高(P0.05),而LDT3-A免疫組CD4+、CD8+T淋巴細胞含量在整體水平上與H120免疫組相當。應用實時熒光定量PCR方法對外周血中IL-1β、IL-6、IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果表明,免疫后三周內(nèi),各免疫組外周血中IL-1β、IL-6和IL-12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與未免疫組比較均出現(xiàn)不同程度的上調(diào)。整體水平上,4/91免疫組IL-1β、IL-6和IL-12的相對表達高于其他兩個免疫組,H120免疫組次之,LDT3-A免疫組較低。免疫攻毒結(jié)果表明,4/91弱毒苗對三株廣西流行毒株的保護率達到75%-83.7%, LDT3-A免疫組為66.7%-75%,而H120免疫組僅為41.7%-58.3%。病毒載量檢測結(jié)果表明,不同毒株攻毒后各免疫組雛雞氣管沖洗液和腎臟中IBV載量顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)低于未免疫攻毒組,4/91免疫組氣管沖洗液和腎臟組織中IBV載量最低,LDT3-A免疫組次之,H120免疫組比較高。另一方面,血清Ⅲ型的H120弱毒疫苗對血清型分別為Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ型的GX-YL5、GX-GL11079和GX-NN09032廣西IBV分離株的免疫保護作用較弱,4/91弱毒疫苗對具有相同血清V型的GX-NN09032有很好的免疫保護作用,對血清Ⅰ、Ⅱ型的GX-YL5、 GX-GL11079的保護作用相對較弱。攻毒后檢測結(jié)果表明,各免疫組雛雞氣管沖洗液中的IL-1β、IL-6和IL-12 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在攻毒后5、14天均發(fā)生不同程度上調(diào),總體水平上比未免疫攻毒組高,表明各免疫組氣管粘膜通過分泌細胞因子,從而發(fā)揮細胞因子功能作用進行免疫調(diào)節(jié)的能力有所增強。綜上所述,本課題研究表明,H120、4/91和LDT3-A商品弱毒疫苗均能夠有效刺激機體產(chǎn)生不同程度的體液免疫和細胞免疫應答,從而不同程度地抵抗和消除IBV感染,同時能夠誘導分泌細胞因子,從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用；4/91商品弱毒疫苗對IBV廣西主要流行毒株有較好的臨床保護作用和病毒抑制效果,LDT3-A弱毒疫苗的免疫效果和病毒抑制效果較4/91稍低,H120弱毒疫苗的臨床保護力和病毒抑制效果欠佳；4/91弱毒疫苗對同一血清型的GX-NN09032分離株具有良好的免疫保護作用。
【關鍵詞】：雞傳染性支氣管炎病毒 商品弱毒疫苗 廣西分離株 免疫保護 病毒載量 細胞因子
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 文獻綜述14-24
• 1.1 雞傳染性支氣管炎病毒的研究進展14-23
• 1.1.1 IBV的生物學特性14-15
• 1.1.2 IBV的致病性15-16
• 1.1.3 感染IBV雞的臨床癥狀及病理變化16-17
• 1.1.3.1 臨床癥狀16
• 1.1.3.2 病理變化16-17
• 1.1.4 IBV診斷技術與防控技術研究概況17-20
• 1.1.4.1 IBV診斷技術概述17-19
• 1.1.4.2 IBV防控技術19-20
• 1.1.5 IB疫苗的研究進展20-22
• 1.1.5.1 弱毒疫苗20-21
• 1.1.5.2 滅活疫苗21
• 1.1.5.3 基因工程疫苗21-22
• 1.1.6 國內(nèi)外IBV弱毒疫苗的免疫保護試驗的研究情況22-23
• 1.1.6.1 國外IBV弱毒疫苗的免疫保護情況22
• 1.1.6.2 國內(nèi)IBV弱毒疫苗的免疫保護情況22-23
• 1.2 所選課題的研究目的與意義23-24
• 第二章 三種常用IBV商品弱毒疫苗對廣西主要流行毒株免疫保護作用的比較研究24-53
• 2.1 材料24-25
• 2.1.1 疫苗株與分離株24-25
• 2.1.2 試驗動物與雞胚25
• 2.1.3 試驗試劑與儀器25
• 2.2 試驗方法25-31
• 2.2.1 IBV毒株的增殖25
• 2.2.2 IBV毒株的鑒定25-27
• 2.2.3 雞胚氣管環(huán)半數(shù)感染量(TOC-ID_(50))的測定27
• 2.2.4 動物試驗27-28
• 2.2.5 樣品的采集及處理28
• 2.2.6 樣品總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄28-29
• 2.2.7 免疫雞外周血血清中IgG抗體水平的檢測29-30
• 2.2.8 免疫雞外周血中特異性T淋巴細胞百分含量的檢測30
• 2.2.9 免疫雞外周血中相關細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測30-31
• 2.2.10 攻毒后各試驗組免疫雞氣管沖洗液和腎臟中病毒載量的檢測31
• 2.2.11 攻毒后各試驗組免疫雞氣管中相關細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測31
• 2.2.12 數(shù)據(jù)處理與分析31
• 2.3 試驗結(jié)果31-48
• 2.3.1 IBV流行毒株的鑒定結(jié)果31-32
• 2.3.2 雞胚氣管環(huán)半數(shù)感染量(TOC-ID_(50))的測定結(jié)果32-33
• 2.3.3 免疫雞血清中IgG抗體水平33-34
• 2.3.4 免疫雞外周血中特異性T淋巴細胞百分含量34-37
• 2.3.5 攻毒后各試驗組雛雞臨床癥狀與剖檢病變37-40
• 2.3.6 免疫雞外周血中相關細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平40-42
• 2.3.7 攻毒后各試驗組免疫雞氣管沖洗液和腎臟病毒載量42-45
• 2.3.8 攻毒后各試驗組免疫雞氣管中相關細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平45-48
• 2.4 分析與討論48-53
• 2.4.1 免疫雞血清抗體水平與免疫保護力的關系分析48-49
• 2.4.2 免疫雞外周血中特異性T淋巴細胞百分含量分析49-50
• 2.4.3 不同IBV攻毒后各試驗組免疫攻毒保護率的比較分析50-51
• 2.4.4 免疫雞外周血中和攻毒后免疫雞氣管中相關細胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平分析51-53
• 第三章 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62-63
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況63

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本文編號：862689