本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌對奶牛乳腺上皮細(xì)胞TGF-β1、bFGF和PDGF表達(dá)的影響

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【摘要】：大腸桿菌是引起奶牛乳腺炎最主要的病原菌,大多引起臨床型乳腺炎,嚴(yán)重的引發(fā)乳腺纖維化。本實驗?zāi)康氖翘接懏?dāng)大腸桿菌作用于奶牛乳腺上皮細(xì)胞(BMEC)時對TGF-β1、TPR1、bFGF、FGFR2、PDGF和PDGFRβ的表達(dá)影響,以及宿主對大腸桿菌的免疫應(yīng)答過程中是否有TLR2和TLR4的參與,且其作用如何,以便探索奶牛乳腺纖維化的發(fā)病機(jī)理,為奶牛乳腺纖維化的防治提供指導(dǎo)。本實驗采用熱滅活大腸桿菌菌液(0.105cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL)作用于體外培養(yǎng)的BMEC,于不同時間點(6h、12h、24h、48h)用熒光定量PCR和Western blot兩種方法檢測受作細(xì)胞TGF-β1、bFGF、PDGF及其受體mRNA及蛋白的表達(dá),同時采用相同方法檢測TLR2和TLR4 mRNA及蛋白的表達(dá),采用Western blot方法檢測AP-1和NF-κB蛋白的表達(dá)情況。研究結(jié)果表明：(1)不同濃度的熱滅活E.coli作用于BMEC,不同時間點(6h、12h、24h、48h)均可促進(jìn)TGF-β1、bFGF和PDGF及其受體mRNA和蛋白的表達(dá)。TGF-β1、 bFGF和PDGF及其受體的表達(dá)水平基本隨著時間的延長、濃度的增加而增加,呈時間和濃度依賴性。TGF-β1、TβR1 mRNA表達(dá)水平在12h最高,蛋白表達(dá)水平在24h最高,106cfu/mL菌液濃度處理組在四個時間點表達(dá)水平均最高;bFGF和FGFR2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均高于對照組,24h表達(dá)水平最高；PDGF-BB mRNA表達(dá)量在12h達(dá)到最大,PDGF-BB蛋白表達(dá)量在24h達(dá)到最大。PDGFRβ蛋白表達(dá)水平在12h達(dá)到最高。(2)熱滅活E.coli作用于BMEC均能促進(jìn)TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表達(dá)。TLR2和TLR4的表達(dá)水平基本隨時間的延長,濃度的增大而增高。TLR2 mRNA表達(dá)水平在12h達(dá)到最高,與對照組相比差異極顯著(P0.01), TLR2蛋白表達(dá)水平在48h達(dá)最高,差異顯著(P0.05); TLR4mRNA表達(dá)水平在24h達(dá)到最大。TLR4蛋白表達(dá)水平均高于對照組,有統(tǒng)計學(xué)意義。(3)熱滅活E.coli能促進(jìn)NF-κB和AP-1蛋白表達(dá),表達(dá)水平均高于對照組,基本呈時間和濃度依賴性。NF-κB蛋白表達(dá)水平與對照組相比雖不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但均較對照組高,105cfu/mL菌液處理組濃度表達(dá)水平最高。AP-1表達(dá)水平隨著時間的延長,濃度的增大,表達(dá)增加,106 cfu/mL濃度表達(dá)水平最高,在12h、24h差異極顯著(P0.01)。綜上所述,熱滅活的E.coli可以促進(jìn)BMEC TGF-β1、bFGF和PDGF三種細(xì)胞因子及其受體的mRNA及蛋白的表達(dá),呈一定的時間和濃度依賴性；熱滅活E.coli可促進(jìn)TLR2、TLR4mRNA及蛋白的表達(dá),具有時間和濃度依賴關(guān)系；熱滅活E.coli促進(jìn)BMEC NF-κB和AP-1的蛋白的表達(dá),提示E.coli促進(jìn)BMEC表達(dá)促纖維化細(xì)胞因子,可能與NF-κB和AP-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 BMEC 奶牛乳腺纖維化 TGF-β1 bFGF PDGF TLR2 TLR4 AP-1 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 引言11-19
• 1.1 大腸桿菌對奶牛乳腺的致病性11-15
• 1.1.1 大腸桿菌的病原學(xué)12
• 1.1.2 奶牛乳腺對大腸桿菌的先天性免疫反應(yīng)12-13
• 1.1.3 Toll-like receptor13-14
• 1.1.4 TLRs-NF-κB和TLRs-AP-1信號通路在大腸桿菌感染過程中發(fā)揮的作用14-15
• 1.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體生物學(xué)特性和在組織器官纖維化中的發(fā)揮作用15-17
• 1.2.1 組織器官纖維化的研究15
• 1.2.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體生物學(xué)特性和在組織器官纖維化中發(fā)揮的作用15-17
• 1.3 研究目的及意義17-19
• 2 實驗一 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體表達(dá)的影響19-46
• 2.1 實驗材料與方法19-24
• 2.1.1 實驗材料19-20
• 2.1.2 實驗方法20-24
• 2.1.3 數(shù)據(jù)分析24
• 2.2 實驗結(jié)果24-43
• 2.2.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1/TβR1表達(dá)的影響24-31
• 2.2.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對bFGF/FGFR2表達(dá)的影響31-37
• 2.2.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對PDGF-BB/PDGFRβ表達(dá)的影響37-43
• 2.3 討論43-45
• 2.3.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1/TβR1 mRNA和蛋白表達(dá)的影響43
• 2.3.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對bFGF/FGFR2 mRNA和蛋白表達(dá)的影響43-44
• 2.3.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對PDGF-BB/PDGFRβ mRNA和蛋白表達(dá)的影響44-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 3 實驗二 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2、TLR4、NF-κB和AP-1的表達(dá)影響46-60
• 3.1 實驗材料與方法46-47
• 3.1.1 實驗材料46
• 3.1.2 實驗方法與內(nèi)容46-47
• 3.2 實驗結(jié)果47-58
• 3.2.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2表達(dá)的影響47-51
• 3.2.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR4表達(dá)的影響51-54
• 3.2.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對NF-κB/AP-1蛋白表達(dá)的影響54-58
• 3.3 討論58-59
• 3.3.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2和TLR4表達(dá)的影響58
• 3.3.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對NF-κB和AP-1表達(dá)的影響58-59
• 3.4 小結(jié)59-60
• 4 全文結(jié)論60-61
• 致謝61-62
• 參考文獻(xiàn)62-69
• 作者簡介69

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1 王愛華,靳亞平,沈文正;CD58對山羊子宮內(nèi)膜γδT細(xì)胞活化及其分泌TGF-βs的作用[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2002年06期

2 靳亞平,王愛華,王建辰;妊娠期母-胎界面TGF-β與妊娠[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2000年S1期

3 武艷萍,傅金戀,李寧,王曉鳳,盧紀(jì)和,王愛國;不同豬種TGF-β1基因單核苷酸多態(tài)性分析[J];中國畜牧雜志;2005年04期

4 高麗霞;李宏濱;杜立新;宋雪梅;李珍祖;李善剛;魏彩虹;;不同品種綿羊TGF-β1基因單核苷酸多態(tài)性及其與繁殖力關(guān)系的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2008年04期

5 沈文正,靳亞平,王愛華,李引乾,薛海斌;PHA-P及孕酮對孕早期山羊子宮內(nèi)膜γδ~+T細(xì)胞體外分泌TGF-βs的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;2005年04期

6 ;[J];;年期

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1 陳權(quán);焦安欽;徐俊秀;袁泉;李玲;苗德光;陳則潤;;腎力康顆粒對系膜增生性腎小球腎炎患者TGF-β1與CTGF水平影響的臨床研究[A];第10屆全國中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 張玉震;孫金龍;李猛;李相坤;王鵬;魏麟;;TGF-β1與慢性交通性腦積水形成機(jī)制研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 白泉;姜輝;閆征;朱積川;;TGF-β1反義寡核苷酸抑制大鼠陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞膠原的合成及其意義[A];21世紀(jì)男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會第五次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

4 張玉震;孫金龍;李猛;李相坤;魏麟;孟祥靖;孔建新;劉廣存;郭建;崔友強(qiáng);;TGF—β1與慢性交通性腦積水形成機(jī)制研究進(jìn)展[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

5 國紅;金宇宣;許賢豪;石川翰男;肖保國;Hans Link;;TGF-β1可能抑制實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的機(jī)制探討[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];1998年

6 李豐衣;張琳;孫勁暉;田德祿;祝世功;劉霞;王慶寶;;調(diào)肝理脾方對酒精性肝纖維化大鼠轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)蛋白表達(dá)的影響[A];第十二屆中國科協(xié)年會22分會場——“中醫(yī)藥在重大公共衛(wèi)生事件中的地位和作用論壇”論文集[C];2010年

7 冷非;張佳瑩;劉平;高維奇;;抗青光眼眼表藥物與結(jié)膜成纖維細(xì)胞TGF—β1的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

8 周玉平;涂國卿;曹耀興;;針刺對肝纖維化模型大鼠的防治作用及對TGF-β1的影響[A];江西省第四次中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

9 石一寧;張純濤;;TGF-β_1、TGF-βR Ⅱ及Smad4蛋白在原發(fā)性翼狀胬肉中的表達(dá)[A];全國第九次中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2010年

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1 新華;TGF—β導(dǎo)致癌細(xì)胞“越治越擴(kuò)散”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2007年

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1 朱曉燕;靶向TGF-βⅡ型受體的適配子殼聚糖緩釋凝膠對大鼠濾過術(shù)后結(jié)膜瘢痕的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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5 崔趙麗;氣虛、陽虛體質(zhì)與慢性原發(fā)性腎小球疾病中醫(yī)證候及TGF-β相關(guān)性分析[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

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7 張婷;Th17細(xì)胞及TGF-β1與原發(fā)性膽汁性肝硬化分期的相關(guān)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

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10 常媛;JNK通路介導(dǎo)TGF-β1調(diào)控角膜基質(zhì)CTGF表達(dá)和創(chuàng)傷后瘢痕形成的作用研究[D];山東大學(xué);2009年

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1 董莉;Sirt1過表達(dá)對TGF-β1誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞株凋亡的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 楊玲云;miR-30e*/Snail1軸在TGF-β1誘導(dǎo)的近端腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

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5 桑遙彩;辛伐他汀對BMSCs成骨分化過程中TGF-β1/smad信號通路的影響[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

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本文編號：850764