本文關(guān)鍵詞：禽沙門氏菌的分離鑒定、生物被膜測(cè)定及耐藥性分析

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【摘要】：沙門氏菌(Salmonella)既可感染動(dòng)物,表現(xiàn)出敗血癥或胃腸炎,也可以感染人,引起食品中毒,因此是重要的人獸共患病原菌。由于抗生素的濫用,沙門氏菌的多重耐藥性已成為世界性關(guān)注的問題。我國(guó)的家禽養(yǎng)殖業(yè)非常發(fā)達(dá),而沙門氏菌感染仍然是家禽生產(chǎn)過程中常見一個(gè)現(xiàn)象。由于沙門氏菌的流行與耐藥隨著時(shí)間和環(huán)境的變化不斷發(fā)生改變,因此有必要對(duì)沙門氏菌的流行情況和耐藥情況進(jìn)行持續(xù)跟蹤調(diào)查。本研究利用實(shí)驗(yàn)室前期建立的多重PCR方法(mPCR)對(duì)疑似沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)鑒定,通過藥敏實(shí)驗(yàn)測(cè)定沙門氏菌的耐藥性,測(cè)定了分離株的生物被膜形成能力,分析了生物被膜和Ⅰ類整合子與沙門氏菌耐藥性的關(guān)系,為沙門氏菌的防控提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)支撐和理論指導(dǎo)。1禽沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析2014年2月至2015年7月在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院采集病死雞、鴨、鵝等禽類的肝臟和膽囊,無菌劃線接種麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng),獲得無色、透明或半透明、圓形、光滑菌落。經(jīng)mPCR鑒定,共分離鑒定出61株沙門氏菌,其中鼠傷寒沙門氏菌33株,腸炎沙門氏菌3株,雞白痢沙門氏菌25株。雞源分離株主要是雞白痢沙門氏菌(22/24,91.67%),鵝源分離株主要是鼠傷寒沙門氏菌(29/33,87.88%)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,所分離的禽沙門氏菌普遍對(duì)青霉素、苯唑西林、利福平和萬古霉素的耐藥率達(dá)到了100%,但對(duì)美福仙、諾氟沙星、阿米卡星、卡那霉素、氯霉素、氟苯尼考有較好的敏感性。96.72%沙門氏菌對(duì)6種及其以上抗菌藥耐藥,說明沙門氏菌的多重耐藥性比例高。2沙門氏菌分離株的生物被膜測(cè)定與耐藥性的關(guān)系通過結(jié)晶紫染色定量法測(cè)定分離到的61株禽沙門氏菌生物被膜形成能力,共有54株沙門氏菌有較強(qiáng)的生物被膜形成能力(54/61,88.52%),其中,鼠傷寒沙門氏菌28株(28/33,84.84%),雞白痢沙門氏菌23株(23/25,92%),腸炎沙門氏菌3株(3/3,100%,)。選擇生物被膜形成能力強(qiáng)的雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌各3株,測(cè)定抗生素的MIC和MBC。相對(duì)沙門氏菌浮游菌,生物被膜形成后阿米卡星、慶大霉素、氯霉素和氟苯尼考MIC值和MBC值提高了20倍以上。因此,絕大多數(shù)沙門氏菌可形成生物被膜,細(xì)菌在生物被膜狀態(tài)下可顯著提高其對(duì)抗生素的抵抗力。3禽沙門氏菌Ⅰ類整合子的檢測(cè)及序列分析通過遞減PCR方法測(cè)定篩選出的59株多重耐藥沙門氏菌的Ⅰ類整合子,共擴(kuò)增出5個(gè)菌株的Ⅰ類整合子,長(zhǎng)度約1.6 kb,其中包括4株雞白痢沙門氏菌檢出,1株腸炎沙門氏菌,而鼠傷寒沙門氏菌未檢測(cè)出Ⅰ類整合子。Ⅰ類整合子序列分析顯示核苷酸同源性達(dá)到100%。通過NCBI BLAST分析,Ⅰ類整合子的基因盒均含有dfr17和aadA5基因,表明這幾株多重耐藥沙門氏菌可以耐受磺胺甲基異惡唑、鏈霉素和甲氧芐氨嘧啶的選擇壓力。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示這5株菌株全部對(duì)復(fù)方新諾明有耐藥性,證明了Ⅰ類整合子與這些菌株對(duì)磺胺類藥物的耐藥性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：家禽 沙門氏菌 耐藥性 生物被膜 Ⅰ類整合子
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-8
• 符號(hào)說明8-9
• 文獻(xiàn)綜述9-22
• 參考文獻(xiàn)17-22
• 第一章 禽沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析22-32
• 1 材料22-23
• 2 方法23-25
• 3 結(jié)果25-28
• 4 討論28-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 第二章 沙門氏菌分離株的生物被膜測(cè)定與耐藥性的關(guān)系32-44
• 1 材料32-33
• 2 方法33-34
• 3 結(jié)果34-41
• 4 討論41-43
• 參考文獻(xiàn)43-44
• 第三章 禽沙門氏菌Ⅰ類整合子的檢測(cè)及序列分析44-53
• 1 材料44-45
• 2 方法45-46
• 3 結(jié)果46-49
• 4 討論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 全文小結(jié)53-54
• 致謝54-55

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