本文關(guān)鍵詞：腎型IBV山西分離株感染雛雞后細(xì)胞因子相對(duì)表達(dá)量與病理變化的關(guān)系

  更多相關(guān)文章： IBV 病理變化 石蠟切片 細(xì)胞因子 熒光定量PCR

【摘要】：目的：對(duì)1日齡的雛雞接種腎型IBV山西分離株,探討機(jī)體炎性因子IFN-γ,IL-4,IL-12,IL-10相對(duì)表達(dá)量與雛雞病理?yè)p傷程度變化的關(guān)系。方法：本試驗(yàn)人工感染1日齡雛雞。試驗(yàn)組處理,通過(guò)滴鼻點(diǎn)眼接種IBV,每只雛雞接種0.2 mL IBV尿囊液,對(duì)照組接種SPF雞胚的尿囊液。試驗(yàn)組和對(duì)照組分開(kāi)飼養(yǎng),飲水和飼料完全一樣。每天觀察雛雞的精神狀態(tài),攻毒2-7 d,14 d,21 d隨機(jī)抽取兩組雛雞心臟血液,提取血液淋巴細(xì)胞mRNA,進(jìn)行Real-Time PCR測(cè)定炎性因子相對(duì)表達(dá)量;并進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)。結(jié)果：攻毒后1-3 d,雛雞精神狀態(tài)良好,4-5 d出現(xiàn)臨床癥狀,6-7 d臨床癥狀顯著,8d以后精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)趨于良好。病理剖檢1-3 d無(wú)明顯的病理變化,4d輸尿管腫大,5d出現(xiàn)腎臟出血,腫大。6-7 d腎臟明顯地蒼白,腫大、腎小管、輸尿管內(nèi)充滿尿酸鹽,形成典型的“花斑腎”,8d開(kāi)始恢復(fù)正常。病理組織學(xué)檢查,2d無(wú)明顯眼觀病變,3d腎小球囊壁界限不清,4-5 d腎臟組織出現(xiàn)紅細(xì)胞,腎小管上皮細(xì)胞脫落,6-7d癥狀更明顯,8-21 d病理變化逐漸消失。免疫組化技術(shù)：IBV病毒主要侵染腎臟腎小管上皮細(xì)胞。對(duì)照組無(wú)上述病變。細(xì)胞因子相對(duì)表達(dá)量：攻毒后,IFN-γ, IL-4, IL-12在5-7d相對(duì)表達(dá)量上調(diào)并在7d達(dá)到峰值后降低;IL-10,5-7d相對(duì)表達(dá)量上調(diào),但是相比IFN-γ, IL-4, IL-12相對(duì)表達(dá)量較低。結(jié)論：嗜腎型IBV感染雞早期血淋巴炎性細(xì)胞因子IL-4, IL-12, IFN-γ,IL-10mRNA相對(duì)表達(dá)量的升高可誘導(dǎo)機(jī)體的非特異性免疫應(yīng)答,同時(shí)對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重的腎損傷,出現(xiàn)腎臟蒼白,腫大,腎小管上皮細(xì)胞變性壞死等病變。
【關(guān)鍵詞】：IBV 病理變化 石蠟切片 細(xì)胞因子 熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要7-8
• 前言8-18
• 1 試驗(yàn)材料18-20
• 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物18
• 1.2 主要儀器及設(shè)備18-19
• 1.3 主要試驗(yàn)試劑與耗材19-20
• 1.4 主要試劑的配制20
• 2 試驗(yàn)方法20-28
• 2.1 病毒的增殖培養(yǎng)20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攻毒21
• 2.3 病理切片的制備21-22
• 2.3.1 腎臟組織的固定21
• 2.3.2 腎臟組織脫水及透明21-22
• 2.3.3 腎臟組織浸蠟與包埋22
• 2.3.4 腎臟組織石蠟切片制備及HE染色22
• 2.4 免疫組織化學(xué)22-23
• 2.5 雞血液淋巴細(xì)胞的總RNA提取23-24
• 2.5.1 雞血液淋巴細(xì)胞的分離23-24
• 2.5.2 淋巴細(xì)胞總RNA提取24
• 2.5.3 mRNA質(zhì)量檢驗(yàn)24
• 2.6 反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA24-25
• 2.7 病毒的檢測(cè)25-26
• 2.7.1 IBV引物的設(shè)計(jì)25
• 2.7.2 PCR擴(kuò)增25-26
• 2.7.3 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)26
• 2.8 熒光定量PCR檢測(cè)目的基因26-28
• 2.8.1 引物的設(shè)計(jì)26-27
• 2.8.2 引物鑒定27
• 2.8.3 RT-PCR反應(yīng)體系建立27-28
• 3 試驗(yàn)結(jié)果28-38
• 3.1 傳染性支氣管炎病毒(IBV)增殖28
• 3.2 攻毒后雛雞臨床剖檢病理變化28-30
• 3.3 組織病理切片觀察30-32
• 3.4 免疫組化結(jié)果32
• 3.5 血液淋巴細(xì)胞分離結(jié)果32-33
• 3.6 血液淋巴細(xì)胞總mRNA質(zhì)量鑒定33
• 3.7 血液中IBV的檢測(cè)33-34
• 3.8 目的基因引物的鑒定34-38
• 3.8.1 Real Time-PCR35-37
• 3.8.2 細(xì)胞因子的相對(duì)表達(dá)量變化37-38
• 4 分析與討論38-40
• 4.1 本試驗(yàn)選取試驗(yàn)動(dòng)物的的依據(jù)38
• 4.2 組織病理學(xué)分析38
• 4.3 石蠟切片對(duì)腎臟病理?yè)p傷呈現(xiàn)38-39
• 4.4 免疫組化對(duì)病原侵襲部位的定位39
• 4.5 RT-PC民護(hù)增驗(yàn)證目的基因39
• 4.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)IFN-Y,IL-10,IL-12,IL-4相對(duì)表達(dá)量的變化39
• 4.7 抗炎細(xì)胞因子相對(duì)表達(dá)量分析39-40
• 5 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• Abstract45-47
• 致謝47

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