本文關(guān)鍵詞：奶牛舍空氣微生物快速計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)與優(yōu)化

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【摘要】：中國在乳制品生產(chǎn)食用方面位于世界前列,但近些年來,乳制品安全問題發(fā)生日益頻繁,其中,微生物污染是原料奶生產(chǎn)過程中重要的污染源,不僅對(duì)乳制品質(zhì)量和奶牛本身健康造成影響,更對(duì)我國消費(fèi)者人身健康存在重大威脅,因而原料奶生產(chǎn)過程中的質(zhì)量和安全日益受到企業(yè)和研究人員的關(guān)注。為保障原料奶衛(wèi)生健康安全,提高微生物計(jì)數(shù)檢測(cè)速率,縮短微生物計(jì)數(shù)時(shí)間。本課題針對(duì)哈爾濱周邊奶牛場(chǎng)配合微生物空氣采樣器進(jìn)行四季空氣采樣,并采用基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜法進(jìn)行鑒定,鑒定結(jié)果得出四季檢出率最高的致病菌分別屬于芽孢桿菌屬(Bacillus):枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus);腸球菌屬(Enterococcus):糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌(Enterococcus faecium);葡萄球菌屬(Staphylococcus):木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、產(chǎn)色葡萄球菌(Staphylococcus chromogenes);不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter):洛菲不動(dòng)桿菌(Acinetobacter lwoffii)、鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii);棒狀桿菌屬(Corynebacterium):結(jié)膜干燥棒狀桿菌(Corynebacterium xerosis)。所得結(jié)果與國內(nèi)外研究報(bào)道基本相一致。本研究以這9種代表性致病菌為研究對(duì)象,參考國內(nèi)外計(jì)數(shù)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加酵母浸出粉及葡萄糖,并用胰蛋白胨替代蛋白胨,制成基底培養(yǎng)基。優(yōu)化后基底培養(yǎng)基配比為:胰蛋白胨10g/L,葡萄糖13g/L,酵母浸出粉10g/L,牛肉膏3g/L,Na Cl 5g/L。在基底培養(yǎng)基基礎(chǔ)上用涂布計(jì)數(shù)法篩選出促代表菌共同生長的營養(yǎng)物質(zhì):甘露醇、丙酮酸鈉、硫酸鎂、生物素及西紅柿汁。單因素法確定各促生長物質(zhì)的適宜濃度范圍,再采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法對(duì)比促生長物質(zhì)之間關(guān)系,優(yōu)化各促生長物質(zhì)濃度,最終確定培養(yǎng)基配比制成快速計(jì)數(shù)培養(yǎng)基,從而縮短空間微生物的計(jì)數(shù)時(shí)間并提高計(jì)數(shù)效率。快速計(jì)數(shù)培養(yǎng)基添加促生長物質(zhì)結(jié)果為:甘露醇、硫酸鎂、丙酮酸鈉、生物素及西紅柿汁。以此培養(yǎng)基對(duì)代表菌采用涂布計(jì)數(shù)方法,恒溫培養(yǎng)10h可計(jì)數(shù),菌落計(jì)數(shù)可達(dá)1.28×109CFU/m L。應(yīng)用其與空氣采樣器配合使用,奶牛場(chǎng)實(shí)際采回樣品培養(yǎng)24h即可計(jì)數(shù),與常規(guī)48h計(jì)數(shù)比較無差異,且為NA培養(yǎng)基計(jì)數(shù)時(shí)間的一半。達(dá)到了快速計(jì)數(shù)的目的,填補(bǔ)國內(nèi)外空間微生物快速計(jì)數(shù)的空白,為實(shí)現(xiàn)微生物質(zhì)量安全快速檢測(cè)提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：培養(yǎng)基 計(jì)數(shù) 促生長 響應(yīng)面優(yōu)化
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.6
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-19
• 1.1 空氣微生物對(duì)乳制品安全的影響12-13
• 1.1.1 空氣微生物在原料奶生產(chǎn)過程中的污染12
• 1.1.2 空氣微生物在原料奶加工過程中的污染12-13
• 1.2 奶牛舍空氣微生物概述13-17
• 1.2.1 奶牛舍空氣微生物種類13-14
• 1.2.2 奶牛舍空氣微生物常見計(jì)數(shù)方法14-15
• 1.2.3 奶牛舍空氣微生物計(jì)數(shù)培養(yǎng)基15-17
• 1.3 研究的目的與意義17
• 1.4 研究的內(nèi)容及創(chuàng)新之處17-19
• 2 材料與方法19-27
• 2.1 材料19-20
• 2.1.1 菌株19
• 2.1.2 試劑19
• 2.1.3 培養(yǎng)基19-20
• 2.1.4 主要儀器與設(shè)備20
• 2.2 方法20-27
• 2.2.1 奶牛舍空氣代表性微生物的篩選20-22
• 2.2.2 菌種保存與保藏22
• 2.2.3 代表菌在不同培養(yǎng)基的對(duì)比生長研究22-23
• 2.2.4 基底培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與優(yōu)化23-24
• 2.2.5 促生長物質(zhì)的篩選24-25
• 2.2.6 響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.2.7 廢棄培養(yǎng)基的處理26
• 2.2.8 實(shí)際應(yīng)用對(duì)比26-27
• 3 結(jié)果與分析27-70
• 3.1 奶牛舍空氣微生物選擇27
• 3.2 代表菌在不同培養(yǎng)基的對(duì)比生長研究27-31
• 3.2.1 適宜稀釋濃度的篩選27-28
• 3.2.2 各菌在培養(yǎng)基的生長情況28-31
• 3.3 基底培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與優(yōu)化31-35
• 3.3.1 葡萄糖濃度的優(yōu)化31-32
• 3.3.2 酵母浸出粉濃度的優(yōu)化32-33
• 3.3.3 胰蛋白胨濃度的優(yōu)化33
• 3.3.4 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與優(yōu)化33-35
• 3.4 營養(yǎng)物質(zhì)的篩選35-57
• 3.4.1 甘露醇35-37
• 3.4.2 硫酸鎂37-40
• 3.4.3 丙酮酸鈉40-42
• 3.4.4 甘氨酸42-44
• 3.4.5 硝酸鑭44-47
• 3.4.6 生物素47-49
• 3.4.7 土豆汁49-51
• 3.4.8 西紅柿汁51-54
• 3.4.9 小結(jié)54-57
• 3.5 響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)57-70
• 3.5.1 單因素實(shí)驗(yàn)57-60
• 3.5.2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)60-66
• 3.5.3 實(shí)際應(yīng)用對(duì)比66-70
• 4 討論70-72
• 4.1 代表菌在不同培養(yǎng)基對(duì)比生長研究70
• 4.2 基底培養(yǎng)基設(shè)計(jì)與優(yōu)化70
• 4.3 促生長物質(zhì)的篩選70-71
• 4.4 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)71
• 4.5 實(shí)際應(yīng)用對(duì)比71-72
• 5 結(jié)論72-73
• 致謝73-74
• 參考文獻(xiàn)74-79
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文79

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本文編號(hào)：793153