發(fā)布時間：2017-08-31 18:15

  本文關鍵詞：陜西白絨山羊和奶山羊羊口瘡病原調查及滅活疫苗免疫效果評估

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【摘要】：羊口瘡又稱羊傳染性膿皰(contagious ecthyma,CE),是由羊傳染性膿皰病毒引起的一種人畜共患的急性熱性傳染性疾病,主要感染山羊等小型反芻動物。該病主要臨床表現為山羊唇部等無毛部位皮膚出現丘疹、水泡、膿皰和結痂。在羊口瘡流行地區(qū),羊口瘡發(fā)病率達90%以上,死亡率達10%。榆林市和渭南市分別為陜西省白絨山羊和奶山羊的主要養(yǎng)殖基地,并成為陜西省重點支持的特色產業(yè)。近年來這兩個地區(qū)的羊口瘡在多家養(yǎng)殖場屢有發(fā)生,但關于這兩個地區(qū)的羊口瘡流行現狀我們并不很清楚,這直接影響到對該病防控策略以及措施的制定和實施。本研究分別對陜西省榆林市榆陽區(qū)、橫山縣、神木縣和渭南市富平縣4個地區(qū)進行了羊口瘡的分子病原學調查,并用本實驗室分離的FX0910株制備羊口瘡病毒滅活疫苗,進行安全試驗和免疫效果評估。本研究的主要內容及結果如下:1、進行羊口瘡病原調查分別采集榆陽區(qū)、橫山縣和神木縣外觀健康白絨山羊的血樣,富平縣采集外觀健康奶山羊的血樣。用NaI法提取血樣中病毒DNA,用本實驗室建立的PCR檢測方法檢測樣品中的ORF病原。結果顯示,榆陽區(qū)、橫山縣、神木縣,羊口瘡病原總檢出率分別為30.0%、29.6%和24.1%,富平縣某養(yǎng)殖場羊口瘡病原總檢出率為82.6%。2、羊口瘡病毒滅活疫苗的制備及免疫效果評估以FX0910株作為病毒材料,在犢牛睪丸原代細胞進行擴增,測定病毒滴度,用0.4%甲醛溶液滅活羊口瘡病毒液48 h,分別在犢牛睪丸原代細胞和羔羊口唇內部接種滅活病毒,檢測滅活效果;滅活的病毒與鋁膠鹽佐劑按照比例混勻,制成羊口瘡病毒滅活疫苗;在羔羊腹股溝劃痕接種制備的滅活疫苗,觀察羊體反應,檢測滅活疫苗的安全性;進行免疫試驗,選擇預產期為35 d~45 d的孕羊,分兩組即免疫組(120只)和空白對照組(80只),頸部皮下注射免疫,免疫劑量為2 mL/只。分別于免疫前和第1次、第2次免疫后的第14 d采集外周血,采用PCR檢測外周血中的ORFV,采用中和試驗測定外周血中的ORFV中和抗體效價;采集兩組新生羔羊的臍帶血,采用PCR檢測方法對臍帶血進行病原檢測;統(tǒng)計1月齡以內新生羔羊的羊口瘡發(fā)病率。結果顯示:(1)在犢牛睪丸原代細胞上增殖的羊口瘡病毒TCID50為106.8TCID50/100μL;(2)甲醛滅活的病毒不能引起細胞病變,也不能引起羔羊發(fā)病,表明FX0910病毒滅活完全;(3)免疫組孕羊免疫前病原檢出率為100%,2次免疫后免疫組孕羊血樣病原檢出率為56.0%,空白對照組免疫前后ORFV檢出率分別為90.0%、87.5%;免疫前兩組孕羊體內中和抗體效價均為1:2,連續(xù)免疫兩次后,其中和抗體滴度均明顯升高,中和抗體效價達到1:24.02;免疫組臍帶血ORFV檢出率為14.3%,空白對照組為71.4%;對羔羊連續(xù)跟蹤1個月,統(tǒng)計其羊口瘡發(fā)病率,免疫組羔羊全部健康,發(fā)病率0%,空白對照組羔羊發(fā)病率36.7%。結論:1.摸清了陜北白絨山羊和關中奶山羊主要養(yǎng)殖地區(qū)羊口瘡的感染現狀;2.以羊口瘡病毒滅活疫苗免疫孕羊2次,能夠顯著提高孕羊體內的中和抗體水平,降低孕羊羊口瘡感染率,有效阻止羊口瘡病毒經胎盤感染胎兒。
【關鍵詞】：羊口瘡 羊口瘡病毒 流行病學 滅活疫苗 免疫效果評估
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.27
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 文獻綜述12-15
• 第一章 羊口瘡研究進展12-15
• 1.1 病原學研究進展12-13
• 1.1.1 形態(tài)結構和基因組特征12-13
• 1.1.2 理化特性13
• 1.1.3 病毒體外培養(yǎng)與增殖特性13
• 1.2 病原性13-14
• 1.3 致病機制14
• 1.4 宿主免疫防御機制14
• 1.5 病毒免疫逃避機制14-15
• 試驗研究15-32
• 第二章 羊口瘡病原調查15-21
• 2.1 材料15-16
• 2.1.1 主要試劑15
• 2.1.2 實驗動物15
• 2.1.3 主要儀器15
• 2.1.4 主要溶液配方15-16
• 2.2 方法16-18
• 2.2.1 樣品的采集與處理16-17
• 2.2.2 樣品檢測17-18
• 2.3 結果與分析18-19
• 2.3.1 樣品陽性檢測結果18
• 2.3.2 ORFV PCR檢測結果18-19
• 2.4 討論19-20
• 2.5 小結20-21
• 第三章 羊口瘡病毒滅活疫苗的制備及免疫效果評估21-32
• 3.1 材料21-22
• 3.1.1 實驗動物21
• 3.1.2 羊口瘡病毒21
• 3.1.3 主要試劑21
• 3.1.4 主要儀器21
• 3.1.5 主要溶液配方21-22
• 3.2 方法22-26
• 3.2.1 制備和培養(yǎng)原代細胞22-23
• 3.2.2 擴增病毒23
• 3.2.3 測定病毒感染力23-24
• 3.2.4 羊口瘡病毒的滅活24
• 3.2.5 羊口瘡病毒滅活檢測24
• 3.2.6 疫苗佐劑及滅活疫苗的制備24-25
• 3.2.7 動物試驗25
• 3.2.8 動物免疫25
• 3.2.9 孕羊抗體測定25-26
• 3.2.10 羊口瘡病原檢測26
• 3.2.11 羔羊羊口瘡發(fā)病率統(tǒng)計26
• 3.3 結果與分析26-30
• 3.3.1 羊口瘡病毒增殖結果26
• 3.3.2 病毒感染力測定結果26-27
• 3.3.3 ORFV滅活檢測結果27-28
• 3.3.4 ORFV滅活疫苗的免疫效果28-30
• 3.4 討論30-31
• 3.5 小結31-32
• 結論32-33
• 參考文獻33-37
• 致謝37-38
• 作者簡介38

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