本文關(guān)鍵詞：抗大腸桿菌復(fù)方中藥的篩選及其對(duì)大腸桿菌感染小鼠腸道結(jié)構(gòu)和微生物的影響

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【摘要】：大腸桿菌病是由某些血清型的致病性大腸埃希氏菌,簡(jiǎn)稱大腸桿菌所引起的傳染病,可引起多種動(dòng)物發(fā)病,仔豬主要表現(xiàn)為仔豬白痢和仔豬黃痢,雞臨床表現(xiàn)為多種癥型,較常見(jiàn)的有肉芽腫、肝周炎、敗血癥、心包炎、腸炎、氣囊炎等,常給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)的損失。目前,大腸桿菌病的防治還比較困難,主要因其血清型眾多,現(xiàn)有的疫苗不能有效預(yù)防。在治療時(shí)由于抗生大量使用,導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生,使治療效果不佳,若是加大治療劑量或是延長(zhǎng)治療時(shí)間使得抗生素殘留在肉蛋等產(chǎn)品中,形成有害殘留,危害食品安全。因此研發(fā)更加安全且有效的中藥制劑并闡明其作用機(jī)理將具有重要的理論研究與臨床應(yīng)用價(jià)值。本課題選用三組復(fù)方中藥采用水煎法制備水提物,進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及最小抑菌濃度的體外測(cè)定,篩選對(duì)大腸桿菌抑菌作用較好的組方。采用人工誘發(fā)小鼠大腸桿菌病的病理模型,進(jìn)行復(fù)方中藥對(duì)小鼠大腸桿菌病的療效研究,以選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)空腸菌群并觀察復(fù)方中藥對(duì)小鼠空腸內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌和腸球菌數(shù)量的影響,并觀察十二指腸、空腸小腸黏膜厚度和絨毛長(zhǎng)度及杯狀細(xì)胞的分布及其數(shù)量的變化。進(jìn)一步用熒光定量PCR檢測(cè)黏膜免疫相關(guān)指標(biāo)Muc2和Muc3的表達(dá)量。結(jié)果如下：1、抑制大腸桿菌的復(fù)方中藥篩選結(jié)果表明,三種復(fù)方中藥對(duì)兩株大腸桿菌均有不同程度的抑制作用,其中,復(fù)方中藥一抑菌直徑最大,且MIC最小。2、成功建立大腸桿菌感染小鼠模型,模型組小鼠菌群失衡,腸桿菌、腸球菌數(shù)量極顯著升高,乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量極顯著降低(P0.01)：腸黏膜絨毛斷裂,腸上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死和脫落;杯狀細(xì)胞數(shù)量減少；Muc2、Muc3 mRNA水平與正常小鼠相比極顯著降低(P0.01)。復(fù)方中藥組小鼠菌群基本恢復(fù),與空白組小鼠空腸菌群無(wú)顯著差異(P0.05);與模型組相比,腸道黏膜形態(tài)得到較好改善;Muc2、Muc3 mRNA表達(dá)水平有極顯著的升高(P0.01)。恩諾沙星組小鼠菌群腸桿菌和腸球菌數(shù)量減少,與空白組小鼠腸道菌群無(wú)顯著差異(P0.05),乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量依舊與空白組有極顯著的差異(P0.01);與模型組相比,腸道黏膜形態(tài)略有改善；Muc2、Muc3 mRNA水平有極顯著的升高(P0.01),但與空白組小鼠相比,差異仍顯著(P0.01)。本試驗(yàn)證實(shí)：復(fù)方中藥具有抗大腸桿菌感染的作用,并闡明了其抗大腸桿菌作用的部分機(jī)制,為大腸桿菌的防止提供了新的途徑,也為該復(fù)方的開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：試驗(yàn)動(dòng)物小鼠 大腸桿菌 復(fù)方中藥 恩諾沙星 腸道微生物 黏膜修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S859.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• 文獻(xiàn)綜述8-14
• 1 大腸桿菌病研究進(jìn)展8-13
• 1.1 病原學(xué)8
• 1.2 大腸桿菌病的臨床癥狀8-9
• 1.3 ETEC的致病機(jī)制9-12
• 1.4 大腸桿菌病的防治12-13
• 2 本研究的目的與意義13-14
• 試驗(yàn)研究14-32
• 1 試驗(yàn)材料14-16
• 1.1 菌種14
• 1.2 試驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.3 中藥14
• 1.4 試劑與藥品14-15
• 1.5 主要儀器設(shè)備15-16
• 2 試驗(yàn)方法16-21
• 2.1 中藥液的制備16
• 2.2 對(duì)大腸桿菌的抑制作用16
• 2.3 復(fù)方中藥對(duì)大腸桿菌的MIC測(cè)定16
• 2.4 大腸桿菌半數(shù)致死量(LD_(50))測(cè)定16-17
• 2.5 動(dòng)物分組17
• 2.6 臨床觀察及記錄17-18
• 2.7 采樣18
• 2.8 腸道菌群選擇培養(yǎng)18
• 2.9 HE染色18-19
• 2.10 甲苯胺藍(lán)染色19
• 2.11 基因表達(dá)的檢測(cè)19-21
• 3 試驗(yàn)結(jié)果與分析21-28
• 3.1 復(fù)方中藥對(duì)大腸桿菌的抑制作用21-22
• 3.2 復(fù)方中藥對(duì)2株大腸桿菌的MIC22
• 3.3 大腸桿菌半數(shù)致死量確定22-23
• 3.4 治療試驗(yàn)結(jié)果23
• 3.5 各組小鼠腸道菌群的變化23-24
• 3.6 各組小鼠十二指腸和空腸絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度的變化24-25
• 3.7 各組小鼠杯狀細(xì)胞的變化25-26
• 3.8 各組小鼠基因表達(dá)的變化26-28
• 4 討論28-32
• 4.1 中藥的組方原則28-30
• 4.2 復(fù)方中藥對(duì)大腸桿菌感染小鼠的腸道結(jié)構(gòu)、功能和微生物的影響30-32
• 全文結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• Abstract36-38
• 英文縮略詞對(duì)照表38-40
• 致謝40

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：756365