本文關鍵詞：羊流產(chǎn)衣原體細胞滅活疫苗的研究

  更多相關文章： 流產(chǎn)衣原體 適應性培養(yǎng) 滅活疫苗 滅活劑 佐劑

【摘要】：流產(chǎn)衣原體(Chlamydia abortus)是專性細胞內(nèi)寄生的、革蘭氏陰性細菌。流產(chǎn)衣原體是羊地方性流產(chǎn)(ovine enzootic abortion,OEA)的病原,能引起豬、牛等多種脊椎動物在妊娠晚期發(fā)生流產(chǎn),主要寄生于這些動物生殖道黏膜表面的上皮細胞內(nèi),造成生殖道黏膜損傷,導致母畜流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎等,引發(fā)公畜睪丸炎、包皮炎、尿道炎等,偶爾也會感染妊娠婦女,引起急性感染或流產(chǎn)。所以,流產(chǎn)衣原體也是一種人獸共患病病原,其防控研究具有重要的公共衛(wèi)生及經(jīng)濟意義。本研究利用接種雞胚卵黃囊的方法從甘肅省肅南縣分離到一株羊衣原體,根據(jù)Gen Bank公布的流產(chǎn)衣原體helicase gene clone 8的核苷酸序列,設計衣原體helicase gene clone 8的引物,參考相關文獻,進行了PCR-RFLP試驗,PCR產(chǎn)物經(jīng)Alu I酶切后原本479 bp大小的基因被切為兩個小片段,與S26/3流產(chǎn)衣原體標準株一致,由此可鑒定為流產(chǎn)衣原體。本研究采用了Hela細胞、BHK細胞、L929細胞、Mc Coy細胞這四種細胞,分別接種分離到的羊流產(chǎn)衣原體進行培養(yǎng),通過Giemsa染色的方法觀察不同細胞的感染率,選出對羊流產(chǎn)衣原體最為敏感的細胞為Hela細胞,進行了衣原體的擴大培養(yǎng),收集的衣原體滴度測定為1.2735×105 IFU/m L,并利用電子顯微鏡觀察流產(chǎn)衣原體的形態(tài),可以看到呈球形或橢球形的、小而致密的顆粒結構為原體(Elementary body,EB),直徑為0.2~0.5μm,另一種具有大而疏松的結構為網(wǎng)狀體(Reticulate body,RB),直徑為0.6~1.5μm。本研究進行了羊流產(chǎn)衣原體細胞滅活苗的研究,主要從滅活劑和佐劑的篩選方面展開,以Balb/c小鼠為實驗動物,進行免疫,最終選擇了以甲醛滅活、206+CpG為佐劑制備羊流產(chǎn)衣原體細胞滅活苗。免疫組小鼠血清抗體IHA檢測效價達到1:65536;抗體亞型的測定結果為IgG1型,輕鏈主要為κ鏈;免疫組小鼠血清以及淋巴細胞培養(yǎng)上清中的IFN-γ含量均比生理鹽水對照組的高;遲發(fā)型超敏反應(DTH)檢測免疫組小鼠足墊增厚厚度顯著大于生理鹽水組;淋巴細胞增殖試驗中C.abortus刺激孔的淋巴細胞增殖比刀豆球蛋白(Con A)刺激孔和陰性對照孔都顯著;中和試驗中免疫組血清中和后的C.abortus接種細胞形成的包涵體數(shù)量遠遠小于生理鹽水組的IFU數(shù)量;攻毒試驗中生理鹽水組小鼠的脾臟重量明顯大于免疫組小鼠脾臟、免疫組DNA擴增陰性,有效抵抗C.abortus的侵襲。這些評價指標的結果表明機體在接種了該疫苗以后,誘導產(chǎn)生特異性免疫應答,包括Th1型細胞免疫應答和Th2型體液免疫應答。綜上所述,本研究成功分離培養(yǎng)了羊流產(chǎn)衣原體,并完成了在Hela細胞內(nèi)的適應性培養(yǎng),另外,以甲醛滅活、206+Cp G為佐劑制備的羊流產(chǎn)衣原體細胞滅活苗,具有良好的免疫效果,為羊流產(chǎn)衣原體細胞培養(yǎng)滅活疫苗的制備提供一個新的方法。
【關鍵詞】：流產(chǎn)衣原體 適應性培養(yǎng) 滅活疫苗 滅活劑 佐劑
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 英文縮略表10-12
• 第一章 引言12-17
• 1.1 衣原體概述12
• 1.2 衣原體疫苗的研究進展12-16
• 1.2.1 滅活與減毒活疫苗12-13
• 1.2.2 亞單位疫苗13
• 1.2.3 核酸疫苗13-14
• 1.2.4 其他衣原體疫苗14-16
• 1.3 本研究目的和意義16-17
• 第二章 羊流產(chǎn)衣原體的分離鑒定17-24
• 2.1 引言17
• 2.2 材料與方法17-21
• 2.2.1 材料17-18
• 2.2.2 方法18-21
• 2.3 結果與分析21-22
• 2.3.1 病原雞胚分離的結果21
• 2.3.2 helicase gene clone 8 的 PCR 擴增結果21-22
• 2.3.3 helicase gene clone 8 的 RFLP 結果22
• 2.4 討論22-24
• 第三章 羊流產(chǎn)衣原體細胞適應株的培育及純化24-32
• 3.1 引言24
• 3.2 材料與方法24-27
• 3.2.1 材料24-25
• 3.2.2 方法25-27
• 3.3 結果與分析27-30
• 3.3.1 羊流產(chǎn)衣原體在不同細胞的增殖情況27-28
• 3.3.2 間接免疫熒光法檢測羊流產(chǎn)衣原體在Hela細胞中的增殖情況28
• 3.3.3 羊流產(chǎn)衣原體滴度測定結果28-29
• 3.3.4 透射電鏡結果29-30
• 3.3.5 掃描電鏡結果30
• 3.4 討論30-32
• 第四章 羊流產(chǎn)衣原體細胞滅活疫苗的研究32-45
• 4.1 引言32
• 4.2 材料與方法32-38
• 4.2.1 材料32-34
• 4.2.2 方法34-38
• 4.3 結果與分析38-42
• 4.3.1 滅活效果38
• 4.3.2 滅活試驗各組小鼠血清抗體IHA檢測結果38-39
• 4.3.3 佐劑試驗小鼠血清抗體IHA檢測結果39
• 4.3.4 疫苗效果評價39-42
• 4.4 討論42-45
• 4.4.1 關于滅活劑42-43
• 4.4.2 關于佐劑43
• 4.4.3 關于免疫效果評價43-45
• 第五章 全文結論45-46
• 參考文獻46-51
• 附錄51-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：687351