本文關(guān)鍵詞：廣東省H3N2亞型犬流感血清流行病學(xué)調(diào)查和病毒的分離、鑒定及遺傳進(jìn)化分析

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【摘要】：流感病毒包括人流感病毒和動物流感病毒,是一種重要的人畜共患病病毒。流感病毒能發(fā)生跨物種感染和傳播,近年來,不斷有禽源和其他動物源的流感病毒感染人類的報道,對人類健康和公共衛(wèi)生構(gòu)成了巨大威脅。2004年美國首次分離了犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)。2006年我國華南農(nóng)業(yè)大學(xué)外科教研室分離得到第一株H3N2亞型CIV。犬已成為流感病毒一個新型的哺乳動物宿主,也使犬成為流感病毒傳播給人的潛在中間宿主。犬群中流行的主要是美洲流行株CIV H3N8和亞洲流行株CIV H3N2兩種亞型。我國對于CIV的流行病學(xué)情況和該病毒的致病機(jī)制了解甚少。為了更好地對H3N2亞型CIV的感染、傳播和流行進(jìn)行監(jiān)測,本研究對廣東地區(qū)H3N2亞型CIV從血清流行病學(xué)和病原學(xué)兩個方面進(jìn)行了研究,旨在全面了解CIV流行病學(xué)情況,并探索犬流感病毒對犬的致病分子機(jī)制。血清流行病學(xué)調(diào)查:2013年11月-2014年12月,從寵物市場犬、活禽市場犬和農(nóng)村犬三個犬群分別進(jìn)行隨機(jī)血清采樣,共采集了764份血清樣品,通過血凝抑制試驗(HI)和微量中和實驗(MN)對所采集的樣品進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:寵物犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亞型抗體陽性率為17.7%(67/378);農(nóng)村犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亞型抗體陽性率為15.0%(28/216);活禽交易市場犬群中HI≥1:20和MN≥1:80的CIV H3N2亞型抗體陽性率為13.5%(23/170)。整體的陽性率為15.4%(118/764)。表明寵物犬感染犬流感病毒的風(fēng)險較大,活禽市場犬和農(nóng)村犬感染禽流感病毒在流感生態(tài)圈和流感病毒的傳播中發(fā)揮著一定的作用。病毒的分離鑒定:為了分析廣州地區(qū)的流行毒株的特點,從廣州市24家寵物醫(yī)院根據(jù)犬感染流感病毒的臨床癥狀,共采集到17只疑似犬流感病例的鼻拭子,通過對樣品進(jìn)行血凝實驗(HA:hemagglutination)和M基因DNA擴(kuò)增技術(shù)(PCR:polymerase chain reaction)的鑒定,從中成功分離到一株H3N2亞型的犬流感病毒,暫命名為:A/canine/Guangdong/10/2014(H3N2),把分離得到的八個片段輸入genotype tool進(jìn)行重組鑒定,分析顯示該病毒為非重組的禽源H3N2亞型犬流感。通過MEGA 5.0分析軟件,將該株新分離的H3N2CIV毒株的各個基因的開放閱讀框(Open reading frame,ORF)中的核苷酸序列進(jìn)行比對,并在此基礎(chǔ)上繪制系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。結(jié)果顯示,該病毒為禽源的H3N2亞型流感病毒,和之前本實驗室分離到的毒株的進(jìn)化關(guān)系較近。這說明H3N2亞型犬流感病毒在廣東省犬群中流行和傳播,暫沒有發(fā)生大的變異。然而對H3N2亞型犬流感病毒還需要持續(xù)不斷的跟蹤監(jiān)測。
【關(guān)鍵詞】：犬流感 血清學(xué) 流行病學(xué) 分離 鑒定 遺傳進(jìn)化分析
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S855.3
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-22
• 1 A型流感病毒9-15
• 1.1 A型流感病毒概況9
• 1.2 A型流感病毒的形態(tài)9-10
• 1.3 A型IAVs基因組的結(jié)構(gòu)和功能10-14
• 1.4 生態(tài)學(xué)和傳染病學(xué)14-15
• 1.5 流感病毒的防治措施15
• 2 犬流感病毒概述15-20
• 2.1 不同亞型的犬流感病毒16-19
• 2.2 犬流感的診斷19-20
• 2.3 犬流感的治療和預(yù)防20
• 3 本研究的設(shè)計思路20-22
• 第二章 廣東省H3N2亞型犬流感的血清流行病學(xué)調(diào)查22-31
• 1 材料22-24
• 1.1 樣品來源22-23
• 1.2 參考毒株、血清、細(xì)胞和雞胚23
• 1.3 主要試劑23
• 1.4 其他試劑23-24
• 1.5 主要儀器24
• 2 方法24-27
• 2.1 血清樣品處理24
• 2.2 血凝抑制試驗(HI)24-25
• 2.3 微量中和實驗（Microneutralization assay，MN）25-27
• 3 結(jié)果27-29
• 3.1 寵物犬血清中流感抗體檢測27-28
• 3.2 活禽交易市場犬和農(nóng)村犬血清中流感抗體檢測28-29
• 4 討論與分析29-31
• 第三章 廣州地區(qū)H3N2亞型犬流感病毒的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析31-51
• 1 材料31-33
• 1.1 樣品采集31
• 1.2 試劑和雞胚31-32
• 1.3 其他試劑32
• 1.4 主要儀器32
• 1.5 引物設(shè)計與合成32-33
• 2 方法33-37
• 2.1 雞胚接種33-34
• 2.2 紅細(xì)胞凝集（HA）試驗34
• 2.3 保存樣品34
• 2.4 病毒的RT-PCR檢測34-37
• 3 結(jié)果與分析37-50
• 3.1 八個片段pcr擴(kuò)增結(jié)果37
• 3.2 病毒全基因組同源性分析37-38
• 3.3 病毒全基因組的遺傳進(jìn)化分析38-50
• 3.3.1 HA基因分析38-41
• 3.3.2 NA基因分析41-43
• 3.3.3 M基因分析43-44
• 3.3.4 NS基因分析44-45
• 3.3.5 NP基因分析45
• 3.3.6 PB1基因分析45-47
• 3.3.7 PB2基因分析47-48
• 3.3.8 PA基因分析48-50
• 4 小結(jié)50-51
• 第四章 全文結(jié)論51-52
• 致謝52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 個人簡介58-59
• 導(dǎo)師簡介59-60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：680571