本文關(guān)鍵詞：1,8-桉油素體外殺螨活性及其作用機(jī)理的研究

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【摘要】：桉油為桃金娘科植物藍(lán)桉(Eucalyptus globulus Labill.)、樟科植物樟(Cinnamomum camphora (L.) Sieb.)或上述兩科同屬其他植物經(jīng)水蒸氣蒸鎦得到的揮發(fā)油。桉油具有抑菌(真菌和細(xì)菌)、殺蟲、鎮(zhèn)痛抗炎、抗氧化和抗癌等藥理活性。1,8-桉油素(1,8-cineole),又稱桉油精,是桉油的主要有效成分,含量為58.55%。為緩解目前抗寄生蟲藥物的生物毒性、耐藥性等弊端,尋找新的抗兔疥螨(Sarcoptes scabiei var.cuniculi)藥物,本課題對1,8-桉油素的殺螨活性進(jìn)行測定,并通過形態(tài)學(xué)及測定蟲體內(nèi)各種酶活性的變化,初步評價(jià)1,8-桉油素的殺螨機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：1.1,8-桉油素的體外抗疥螨活性測定：采用離體浸殺的方法,評價(jià)1,8-桉油素的體外抗疥螨活性并測定其抗兔疥螨的半數(shù)致死濃度(Lethal Concentration of 50%, LC50)和半數(shù)致死時(shí)間(Lethal Temperature of 50%, LT50)。結(jié)果顯示：1,8-桉油素在12h的LC50為2.77 mg/mL,當(dāng)1,8-桉油素濃度為9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL時(shí),其LT50分別為3.606 h、7.416 h、11.296 h。以上結(jié)果表明,1,8-桉油素具有較好的殺螨活性,其作用效果呈現(xiàn)一定的濃度依耐性。2.1,8-桉油素對兔疥螨形態(tài)學(xué)的影響：用濃度為2.3 mg/mL、4.6 mg/mL、9.2mg/mL的1,8-桉油素處理兔疥螨,在光學(xué)顯微鏡下觀察幼螨的運(yùn)動情況,并制作超薄切片,研究藥物對疥螨蟲體超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果表明：在光學(xué)顯微鏡下,用藥后的開始不停地急劇運(yùn)動,興奮異常;一段時(shí)間后蟲體擴(kuò)散逃逸,發(fā)現(xiàn)大量蟲卵；最后蟲體收縮變小、死亡。超微電鏡下,正常組蟲體皮膚層具有規(guī)律性的條紋,體腔細(xì)胞完整;用藥組蟲體皮膚層變得無規(guī)律,體腔細(xì)胞細(xì)胞膜溶解,線粒體空泡化,細(xì)胞核溶解消失。由此可知,1,8-桉油素可能主要通過影響蟲體的吞噬系統(tǒng)、能量代謝系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng),最終導(dǎo)致蟲體死亡。3.1,8-桉油素對兔疥螨酶活性的影響：以濃度為9.2 mg/mL、4.6 mg/mL、2.3 mg/mL的1,8-桉油素作為實(shí)驗(yàn)組,液體石蠟作為空白對照組處理兔疥螨,分別在4h、8h和12h采集蟲體提取酶原液,分別測定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione-s-transferases, GSTs)、單胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)、乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase, AchE)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的活性。結(jié)果表明：保護(hù)酶類的酶活性的變化：在12h內(nèi),不同濃度的1,8-桉油素處理疥螨蟲體后,蟲體的SOD酶活性均升高,其中,1,8-桉油素濃度處理蟲體4 h時(shí),SOD升高率最高為43.83%；1,8-桉油素處理蟲體12h時(shí),SOD升高率最低為6.11%。結(jié)果表明1,8-桉油素能夠誘導(dǎo)疥螨蟲體SOD活性的升高。防御酶類的酶活性的變化：在12 h內(nèi),不同濃度的1,8-桉油素處理疥螨蟲體后,蟲體的GSTs酶活性均升高,其中,1,8-桉油素處理12h時(shí)GSTs活性升高率最高為684.02%；處理4h時(shí)GSTs活性升高率最低為41.10%。結(jié)果表明1,8-桉油素能夠激活蟲體的防御系統(tǒng),誘導(dǎo)GSTs活性升高,降低1,8-桉油素對機(jī)體的損傷。神經(jīng)傳遞酶類的酶活性的變化：在12 h內(nèi),不同濃度的1,8-桉油素處理疥螨蟲體后,蟲體的MAO酶活性均升高,其中1,8-桉油素處理4h時(shí)MAO活性升高率最高為244.73%;處理12 h時(shí)MAO活性升高率最低為17.99%。結(jié)果表明1,8-桉油素能夠升高M(jìn)AO活性,導(dǎo)致神經(jīng)傳遞加快,引起蟲體興奮異常。在0-8 h,不同濃度的1,8-桉油素處理疥螨蟲體后,蟲體的Ca2+-ATPase的活性升高；在12 h,蟲體的Ca2+-ATPase的活性是被抑制的。結(jié)果表明在1,8-桉油素作用前期,蟲體興奮異常,急劇運(yùn)動,消耗大量ATP；隨著藥物作用時(shí)間的延長,蟲體逐漸趨于死亡,機(jī)體對ATP的需求減少,酶活性降低。神經(jīng)效應(yīng)酶類的酶活性的變化：在12h內(nèi),不同濃度的1,8-桉油素處理疥螨蟲體后,蟲體的AChE酶活性均被抑制,濃度為9.2 mg/mL時(shí)AChE酶活性抑制率最大為65.52%,濃度為2.3 mg/mL時(shí)抑制率最小為10.87%。結(jié)果表明1,8-桉油素能夠抑制AchE活性,引起蟲體突觸間隙乙酰膽堿(Ach)積累,導(dǎo)致蟲體持續(xù)興奮,且1,8-桉油素濃度越高,酶活性的抑制率越高。在12h內(nèi),用不同濃度1,8-桉油素處理兔疥螨,當(dāng)1,8-桉油素濃度為9.2 mg/mL時(shí),NOS的活性被抑制,抑制率最高為52.98%；當(dāng)1,8-桉油素濃度為4.6 mg/mL和2.3 mg/mL時(shí),NOS的活性升高,升高率最高為269.12%。結(jié)果表明1,8-桉油素對疥螨NOS活性呈現(xiàn)高濃度抑制、低濃度促進(jìn)的作用。通過對1,8-桉油素的殺螨活性的測定、形態(tài)學(xué)的觀察和疥螨蟲體酶活性的測定,研究結(jié)果表明1,8-桉油素主要通過影響疥螨體內(nèi)跟神經(jīng)信號傳導(dǎo)有關(guān)的Ca2+-ATPase和NOS的活性,引起蟲體過度興奮而死亡。
【關(guān)鍵詞】：1 8-桉油素 殺螨活性 超微結(jié)構(gòu) 酶活性
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略詞表9-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述及研究目的與意義13-20
• 1 文獻(xiàn)綜述13-18
• 1.1 桉油的來源13
• 1.2 桉油的藥理研究概況13-18
• 2 研究目的及意義18-20
• 2.1 研究目的18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)流程圖19-20
• 第二章 1,8-桉油素體外殺螨活性研究20-25
• 1 材料與方法20-21
• 1.1 材料20-21
• 1.2 方法21
• 2 結(jié)果21-24
• 2.1 疥螨幼蟲的鑒定21-22
• 2.2 半數(shù)致死濃度的測定22-23
• 2.3 半數(shù)致死時(shí)間測定23-24
• 3 分析與討論24
• 4 小結(jié)24-25
• 第三章 1,8-桉葉油素對疥螨形態(tài)學(xué)的影響25-29
• 1 材料與方法25-26
• 1.1 材料25
• 1.2 方法25-26
• 2 結(jié)果26-27
• 2.1 1,8-桉油素殺螨癥狀觀察26
• 2.2 1,8-桉油素體外殺螨的超微結(jié)構(gòu)觀察26-27
• 3 分析與討論27-28
• 3.1 1,8-桉油素殺螨癥狀觀察27
• 3.2 透射電鏡觀察1,8-桉油素對疥螨幼蟲的超微結(jié)構(gòu)影響27-28
• 4 小結(jié)28-29
• 第四章 1,8-桉葉油素對疥螨體內(nèi)保護(hù)酶的影響29-34
• 1 材料與方法29-31
• 1.1 材料29
• 1.2 方法29-31
• 2 結(jié)果31-32
• 3 分析與討論32-33
• 4 小結(jié)33-34
• 第五章 1,8-桉葉油素對疥螨體內(nèi)解毒酶的影響34-38
• 1 材料與方法34-35
• 1.1 材料34
• 1.2 方法34-35
• 1.3 數(shù)據(jù)處理35
• 2 結(jié)果35-37
• 3 分析與討論37
• 4 小結(jié)37-38
• 第六章 1,8-桉葉油素對疥螨體內(nèi)神經(jīng)傳遞酶類的影響38-46
• 1 材料與方法38-41
• 1.1 材料38-39
• 1.2 方法39-41
• 1.3 數(shù)據(jù)處理41
• 2 結(jié)果41-44
• 2.1 MAO測量結(jié)果41-42
• 2.2 Ca~(2+)-ATPase測量結(jié)果42-44
• 3 分析與討論44-45
• 3.1 1,8-桉油素對兔疥螨幼蟲MAO活性的影響44
• 3.2 1,8-桉油素對兔疥螨幼蟲Ca~(2+)-ATPase活性的影響44-45
• 4 小結(jié)45-46
• 第七章 1,8-桉葉油素對疥螨體內(nèi)神經(jīng)效應(yīng)酶類的影響46-53
• 1 材料與方法46-48
• 1.1 材料46-47
• 1.2 方法47-48
• 2 結(jié)果48-52
• 2.1 AChE活性測量結(jié)果48-50
• 2.2 NOS活性測量結(jié)果50-52
• 3 討論與分析52
• 3.1 1,8-桉油素對兔疥螨幼蟲Ache活性的影響52
• 3.2 1,8-桉油素對兔疥螨幼蟲NOS活性的影響52
• 4 小結(jié)52-53
• 第八章 結(jié)論與創(chuàng)新53-54
• 1 結(jié)論53
• 2 創(chuàng)新53-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 致謝63-64
• 附圖64-66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：667323