本文關(guān)鍵詞：E種腸道病毒HY12的分離鑒定與雙抗體夾心ELISA檢測(cè)病毒抗原方法的建立及其應(yīng)用

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【摘要】：牛腸道病毒感染是由牛腸道病毒(Bovine enterovirus,BEV)引起的一種臨床上以發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、腹瀉和繁殖障礙為主要特征的傳染病,嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展。該病在國(guó)內(nèi)為新發(fā)傳染病,其發(fā)病機(jī)理、診斷方法與防治等方面缺乏研究。本研究對(duì)長(zhǎng)春地區(qū)暴發(fā)的臨床上以發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、嚴(yán)重腹瀉、高發(fā)病率(47%)和致死率(51%)為特征的病因未明疫病進(jìn)行了研究。應(yīng)用病毒分離技術(shù)從腹瀉病牛糞便中分離到大小20-30 nm的病毒粒子。電鏡觀察、理化學(xué)特性鑒定和基因組序列擴(kuò)增與序列分析,確定所分離的病毒為牛腸道病毒(BEV),命名為HY12毒株。與其它報(bào)道的牛腸道病毒不同,HY12毒株具有很高的感染性,TCID50高達(dá)10-11/0.1 mL。核苷酸序列分析結(jié)果表明,HY12毒株與國(guó)外分離的牛腸道病毒株SL305的同源性高達(dá)90%,而與國(guó)內(nèi)分離的毒株同源性只有75%。進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn),HY12毒株屬于腸道病毒屬的E種腸道病毒。這是國(guó)內(nèi)分離出的首株E種腸道病毒。應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),擴(kuò)增、克隆和表達(dá)了HY12編碼的結(jié)構(gòu)蛋白VP1和VP2基因,制備出針對(duì)VP1和VP2蛋白的多克隆抗抗體和單克隆抗體,并建立了檢測(cè)BEV病毒抗原的雙抗體夾心ELISA方法,同時(shí)對(duì)吉林省不同地區(qū)的牛群感染BEV進(jìn)行了病原流行病學(xué)調(diào)查。方陣法確定了抗VP1鼠源IgG的最佳包被量為0.75μg/孔,酶標(biāo)抗體的最佳稀釋度為1:3 600。檢測(cè)大量陰性糞便樣品及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,確定了夾心ELISA檢測(cè)BEV的判定標(biāo)準(zhǔn):當(dāng)被檢樣品OD490值≥0.145時(shí),樣品判定為陽(yáng)性。與病毒分離試驗(yàn)和RT-PCR方法進(jìn)行比較,建立的檢測(cè)BEV抗原的雙抗體夾心ELISA方法具有特異、敏感、快速、操作簡(jiǎn)便和易在基層推廣應(yīng)用等特點(diǎn)。應(yīng)用建立的雙抗體夾心ELISA方法,檢測(cè)了吉林省不同地區(qū)牛群腸道病毒的感染情況,發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)BEV感染率高達(dá)8.16%-58.7%,該結(jié)果將為今后本病的防治提供流行病學(xué)的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：牛腸道病毒 HY12 原核表達(dá) 單克隆抗體 雙抗體夾心ELISA 流行病學(xué)調(diào)查
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞11-12
• 引言12-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-21
• 1 病原學(xué)概況13-16
• 2 BEV流行病學(xué)研究16-19
• 3 BEV感染的診斷研究19-21
• 第二章 牛腸道病毒（HY12）的分離與鑒定21-34
• 2.1 材料21-22
• 2.2 方法22-26
• 2.3 結(jié)果26-31
• 2.4 討論31-33
• 2.5 小結(jié)33-34
• 第三章 HY12結(jié)構(gòu)蛋白基因VP1和VP2的原核表達(dá)與純化34-51
• 3.1 材料34-37
• 3.2 方法37-45
• 3.3 結(jié)果45-49
• 3.4 討論49-50
• 3.5 小結(jié)50-51
• 第四章 抗VP1和VP2抗體制備與純化51-63
• 4.1 材料51-53
• 4.2 方法53-58
• 4.3 結(jié)果58-61
• 4.4 討論61-62
• 4.5 小結(jié)62-63
• 第五章 雙抗體夾心ELISA方法的建立與吉林省BEV流行病學(xué)調(diào)查63-71
• 5.1 材料63-64
• 5.2 方法64-65
• 5.3 結(jié)果65-68
• 5.4 討論68-70
• 5.5 小結(jié)70-71
• 結(jié)論71-72
• 參考文獻(xiàn)72-80
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介80-81
• 作者簡(jiǎn)介81-83
• 致謝83

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本文編號(hào)：649979