本文關(guān)鍵詞：BMP15通過FAT1調(diào)控豬卵丘細(xì)胞凋亡及其關(guān)鍵分子通路分析

  更多相關(guān)文章： 豬卵丘細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 FAT1 分子調(diào)控通路

【摘要】：豬卵丘細(xì)胞屬于卵泡顆粒細(xì)胞的一種,是位于卵母細(xì)胞外的一層顆粒細(xì)胞,除具有保護(hù)和支撐卵母細(xì)胞的作用外,還可為卵母細(xì)胞供給營養(yǎng)并調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的生長發(fā)育。此外,顆粒細(xì)胞凋亡是一種主動的、自然選擇性的細(xì)胞死亡過程,也是卵泡發(fā)生閉鎖的潛在原因,故卵泡的閉鎖可能起始于顆粒細(xì)胞的凋亡。FAT1屬于跨膜蛋白超家族的一員,位于細(xì)胞膜上,在許多關(guān)鍵的生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用。盡管FAT1已經(jīng)表現(xiàn)出可調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞之間的結(jié)合能力及其肌動蛋白動力學(xué)方面的功能,但目前,關(guān)于FAT1基因是否影響豬卵丘細(xì)胞凋亡的報道較少,對于其影響豬卵丘細(xì)胞凋亡的機(jī)制亦不清楚。項目組前期高通量測序結(jié)果表明,BMP15作為豬卵丘細(xì)胞凋亡的抑制者,可上調(diào)FAT1基因的表達(dá)水平,然而許多關(guān)于BMP15在哺乳動物卵巢內(nèi)的表達(dá)位置或是其分泌部位的研究報道不盡相同。故本研究首先利用PCR技術(shù),分別檢測了BMP15在豬卵母細(xì)胞和豬卵丘細(xì)胞中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:BMP15在豬卵母細(xì)胞中特異性表達(dá),即BMP15由豬卵母細(xì)胞特異性分泌,而在豬卵丘細(xì)胞中不表達(dá)。隨后,為了探究BMP15是否對FAT1基因有所調(diào)控作用,我們在體外培養(yǎng)的豬卵丘細(xì)胞中外源添加人重組BMP15后,利用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測了豬卵丘細(xì)胞凋亡的情況;通過熒光定量PCR(RT-q PCR)技術(shù)檢測了FAT1基因表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示:外源添加人重組BMP15后,豬卵丘細(xì)胞的凋亡水平下降,且FAT1基因表達(dá)有所上升。為了解析FAT1基因?qū)ωi卵丘細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制,我們采用了RNA干擾技術(shù),抑制FAT1基因在卵丘細(xì)胞中的表達(dá);并再次利用FCM檢測了降低FAT1基因表達(dá)前后,豬卵丘細(xì)胞的凋亡情況;通過RT-q PCR技術(shù)、蛋白印跡、免疫熒光等實(shí)驗技術(shù)檢測了凋亡相關(guān)通路關(guān)鍵基因的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,敲減FAT1基因后,β-catenin表達(dá)量沒有變化(p0.05);cleaved caspase-3表達(dá)量明顯上升(p0.05);BCL2/BAX比值顯著下降(p0.05)。綜上所述,FAT1可通過調(diào)控BCL2/BAX分子通路和caspase-3分子通路影響豬卵丘細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果將為明確FAT1基因在豬卵丘細(xì)胞凋亡中的作用、探索其對卵母細(xì)胞成熟、卵泡發(fā)育與閉鎖及早期胚胎發(fā)育等分子機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：豬卵丘細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 FAT1 分子調(diào)控通路
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 前言11-12
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述12-26
• 第1章 FAT1基因的研究進(jìn)展12-15
• 1 FAT1基因的發(fā)現(xiàn)12
• 2 FAT1的結(jié)構(gòu)12-13
• 3 FAT1的生物學(xué)功能13-15
• 第2章 豬卵丘細(xì)胞與卵泡發(fā)育及閉鎖的相關(guān)研究15-20
• 1 卵丘細(xì)胞凋亡概述15-16
• 2 卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞間的相互作用16
• 3 卵丘細(xì)胞、卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞及卵泡膜細(xì)胞間的相互作用16-18
• 4 卵丘細(xì)胞凋亡與卵泡發(fā)育的關(guān)系18-19
• 5 卵丘細(xì)胞凋亡在卵泡閉鎖中的作用19-20
• 第3章 細(xì)胞凋亡相關(guān)信號通路的研究進(jìn)展20-26
• 1 細(xì)胞凋亡概述20-21
• 2 Caspase家族在細(xì)胞凋亡中的作用21-22
• 3 BCL-2 家族在細(xì)胞凋亡中的作用22-26
• 第二篇 研究內(nèi)容26-49
• 第1章 BMP15在豬卵巢中的表達(dá)情況及其對FAT1基因的調(diào)控作用26-36
• 1 材料與方法26-31
• 2 結(jié)果31-34
• 3 討論34-35
• 4 小結(jié)35-36
• 第2章 FAT1基因?qū)ωi卵丘細(xì)胞凋亡的影響36-41
• 1 材料與方法36-38
• 2 結(jié)果38-39
• 3 討論39-40
• 4 小結(jié)40-41
• 第3章 FAT1基因調(diào)控豬卵丘細(xì)胞凋亡的分子通路41-49
• 1 材料與方法41-44
• 2 結(jié)果44-46
• 3 討論46-48
• 4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-63
• 導(dǎo)師簡介63-64
• 作者簡介64-65
• 致謝65

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