本文關(guān)鍵詞：山東三個(gè)地方雞種早期肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律及相關(guān)基因表達(dá)比較分析

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【摘要】：隨著生活水平的提高,消費(fèi)者對(duì)雞肉的品質(zhì)要求也逐漸提高。肌肉的基本單位是肌纖維,雞的肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育及特性與雞肉品質(zhì)性狀密切相關(guān)。遺傳是影響肌纖維發(fā)育的主要因素之一。山東省擁有豐富的地方雞品種資源,是我們進(jìn)行優(yōu)質(zhì)雞育種的良好素材,對(duì)不同雞品種肌纖維特性及調(diào)控機(jī)制的研究,可為我們深入探討山東省地方雞種肉品質(zhì)特性,進(jìn)行雞肉品質(zhì)改良奠定基礎(chǔ)。本研究選用1日齡體重相近的濟(jì)寧百日雞、汶上蘆花雞和魯西斗雞3個(gè)地方雞種作為試驗(yàn)材料,每個(gè)品種36只,共108只。分別在1日齡、1周齡、2周齡、3周齡、4周齡、5周齡采集相同部位的胸肌和腿肌樣品,采用石蠟切片對(duì)各時(shí)間點(diǎn)肌纖維形態(tài)特點(diǎn)進(jìn)行觀察,測(cè)定各品種胸腿肌的肌纖維直徑、肌纖維密度、肌節(jié)長(zhǎng)度、肌內(nèi)膜厚度,肌束膜厚度等指標(biāo);分別提取不同時(shí)間點(diǎn)胸肌和腿肌總RNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定Myf6、MyoD1、Myf5和MSTN等基因在胸肌和腿肌中的表達(dá)量,分析同一時(shí)間不同品種間和同一品種內(nèi)不同發(fā)育階段各基因的表達(dá)量變化,探討肌纖維早期發(fā)育的基因表達(dá)調(diào)控規(guī)律,為今后肉品質(zhì)性狀分子標(biāo)記輔助選擇提供科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果如下:1.肌纖維直徑和肌纖維密度4周齡時(shí),百日雞和斗雞胸肌肌纖維直徑顯著長(zhǎng)于蘆花雞(P0.05),5周齡時(shí),斗雞顯著長(zhǎng)于百日雞和蘆花雞(P0.05),從出殼到4周齡時(shí),3個(gè)雞品種差異不顯著;1日齡,百日雞腿肌肌纖維直徑顯著長(zhǎng)于斗雞,1周齡,百日雞和蘆花雞腿肌肌纖維直徑顯著長(zhǎng)于斗雞(P0.05),4周齡斗雞腿肌肌纖維直徑顯著長(zhǎng)于蘆花雞(P0.05),5周齡斗雞顯著長(zhǎng)于百日雞和蘆花雞(P0.05).1日齡,百日雞和蘆花雞胸肌肌纖維直徑密度顯著高于斗雞(P0.05),1周齡,蘆花雞和斗雞顯著高于百日雞(P0.05),3周齡和5周齡,百日雞和蘆花雞顯著高于斗雞(P0.05);1日齡,斗雞腿肌肌纖維密度顯著高于百日雞和蘆花雞(P0.05),1周齡和3周齡百日雞顯著高于斗雞和蘆花雞(P0.05),2周齡和5周齡百日雞和蘆花雞顯著高于斗雞(P0.05)。從出殼到5周齡斗雞、百日雞和蘆花雞胸肌肌纖維直徑分別增加17.8μm、16.01μm、16.79μm;肌纖維密度分別降低8671根/mm2、7920.18根/mm2、7710.82根/mm2;腿肌肌纖維直徑分別增加19.1μm、14.3μm、15.85μm,肌纖維密度分別降低8287.43根/mm2、8609.18根/mm2、8618.77根/mm2。2.肌內(nèi)膜、肌束膜、肌節(jié)長(zhǎng)度2周齡,百日雞和蘆花雞胸肌肌內(nèi)膜厚度顯著高于斗雞(P0.05),3周齡蘆花雞顯著高于百日雞(P0.05),4周齡和5周齡,蘆花雞和斗雞顯著高于百日雞;3周齡和5周齡,蘆花雞和斗雞腿肌肌內(nèi)膜厚度顯著高于百日雞(P0.05),4周齡斗雞蘆花雞百日雞(P0.05);3周齡胸肌肌束膜厚度百日雞顯著高于斗雞(P0.05),4周齡和5周齡百日雞和蘆花雞顯著高于斗雞(P0.05);4周齡腿肌肌束膜厚度蘆花雞斗雞百日雞(P0.05),5周齡蘆花雞和斗雞顯著高于百日雞(P0.05);1周齡斗雞胸肌肌節(jié)長(zhǎng)度顯著高于百日雞和蘆花雞,2周齡和3周齡腿肌肌節(jié)斗雞蘆花雞百日雞(P0.05);1周齡斗雞腿肌肌節(jié)長(zhǎng)度低于百日雞蘆花雞,1周齡、2周齡和3周齡,斗雞的高于蘆花雞和百日雞(P0.05)。3.基因相對(duì)表達(dá)量:MSTN基因在蘆花雞胸肌中表達(dá)量2周齡高于其它周齡,差異極顯著(P0.01),腿肌中的表達(dá)量無顯著差異;MSTN基因在斗雞胸腿肌中的表達(dá)量4周齡時(shí)顯著高于其他周齡;MSTN基因在百日雞胸肌中表達(dá)量在4周齡和5周齡顯著高于其它周齡,腿肌4周齡顯著高于其它周齡(P0.05)。Myf6基因在4周齡蘆花雞胸肌中表達(dá)量顯著高于其它周齡(P0.05);腿肌Myf6是在2周齡的表達(dá)量顯著高于其他周齡(P0.05),Myf6在斗雞胸肌中5周齡時(shí)表達(dá)量最高,Myf6基因在3周齡百日雞胸肌中表達(dá)量顯著高于其它周齡(P0.05),腿肌Myf6是在5周齡的表達(dá)量顯著高于其他周齡(P0.05)。蘆花雞胸肌中MyoD1的表達(dá)量在3周齡時(shí)表達(dá)量最高,腿肌中是在4周齡時(shí);MyoD1在百日雞胸肌1日齡時(shí)表達(dá)量較高,腿肌中是在2周齡時(shí);在斗雞胸腿肌中4、5周齡時(shí)表達(dá)量高于其他周齡。在0~4周齡時(shí),Myf5基因在斗雞中胸腿肌表達(dá)量均高于在蘆花雞和百日雞,該基因在三個(gè)雞種胸腿肌中的表達(dá)模式不同。綜上所述,不同品種肌纖維發(fā)育規(guī)律存在差異,4周齡和5周齡魯西斗雞胸肌和腿肌肌纖維發(fā)育顯著快于百日雞和蘆花雞;MSTN、Myf6、MyoD1、Myf5在3個(gè)雞種胸肌和腿肌發(fā)育中發(fā)揮不同的調(diào)控作用,Myf5在百日雞肌纖維早期生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：雞 肉品質(zhì) 肌纖維 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S831
【目錄】：

• 符號(hào)說明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-13
• 1. 前言13-23
• 1.1 雞肉肉品質(zhì)的重要性及相關(guān)研究進(jìn)展13-15
• 1.1.1 雞肉品質(zhì)的影響因素13-15
• 1.1.2 山東主要地方雞種15
• 1.2 肌肉組織學(xué)特性與肉品質(zhì)的關(guān)系15-19
• 1.2.1 肉品質(zhì)評(píng)價(jià)15
• 1.2.2 肌肉組織學(xué)特性對(duì)肉質(zhì)指標(biāo)的影響15-19
• 1.3 影響肉品質(zhì)的其他因素19
• 1.4 肌肉生長(zhǎng)相關(guān)的重要基因19-22
• 1.4.1 MSTN基因（肌肉生長(zhǎng)抑制素）19-20
• 1.4.2 MRFs家族20-22
• 1.5 本研究的目的和意義22-23
• 2. 材料與方法23-35
• 2.1 試驗(yàn)材料23-25
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.1.2 試驗(yàn)耗材23
• 2.1.3 試驗(yàn)試劑23-24
• 2.1.4 溶液劑配制方法24
• 2.1.5 試驗(yàn)動(dòng)物24
• 2.1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.1.7 樣品采集25
• 2.2 試驗(yàn)方法25-34
• 2.2.1 石蠟切片與肌節(jié)涂片25-28
• 2.2.2 RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)28-29
• 2.2.3 反轉(zhuǎn)錄29-30
• 2.2.4 引物設(shè)計(jì)和合成30
• 2.2.5 引物的檢測(cè)30-31
• 2.2.5.1 普通PCR 25uL體系配制31
• 2.2.6 實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量PCR體系及反應(yīng)條件31-34
• 2.3 數(shù)據(jù)處理34-35
• 3 結(jié)果與分析35-51
• 3.1 肌纖維切片觀察35-41
• 3.1.1 三個(gè)品種肌纖維直徑比較35-36
• 3.1.2 三個(gè)品種骨骼肌肌纖維密度比較36-38
• 3.1.3 三個(gè)品種骨骼肌肌內(nèi)膜比較38-39
• 3.1.4 三個(gè)品種骨骼肌肌束膜比較39-40
• 3.1.5 肌節(jié)涂片的觀察40
• 3.1.6 三個(gè)品種骨骼肌肌節(jié)比較40-41
• 3.2 總RNA的質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果41
• 3.3 引物的檢測(cè)結(jié)果41-42
• 3.4 基因的mRNA表達(dá)分析42-51
• 3.4.1 Myf6基因的表達(dá)42-44
• 3.4.2 MyoD1基因的表達(dá)44-46
• 3.4.3 Myf5基因的表達(dá)46-48
• 3.4.4 MSTN基因的表達(dá)48-51
• 4 討論51-55
• 4.1 遺傳背景對(duì)早期骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的影響51-53
• 4.2 肌纖維發(fā)育的基因表達(dá)調(diào)控53-55
• 5.總體結(jié)論與研究展望55-57
• 5.1 結(jié)論55
• 5.2 課題創(chuàng)新與展望55-57
• 5.2.1 課題創(chuàng)新55
• 5.2.2 研究展望55-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 致謝62

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本文編號(hào)：609326