本文關(guān)鍵詞：一種禽用微生態(tài)制劑的制備及其功能研究

  更多相關(guān)文章： 微生態(tài)制劑 生長性能 空腸彎曲桿菌 沙門氏菌 Real-time PCR

【摘要】：空腸彎曲桿菌和沙門氏菌是自然界廣泛存在的人畜共患病原菌,主要引起動物和人的腸胃炎、腹瀉等疾病。其中家禽是人和動物感染空腸彎曲桿菌和沙門氏菌的主要來源,由于抗生素的濫用和不合理應(yīng)用,導(dǎo)致產(chǎn)生越來越多耐藥的空腸彎曲桿菌和沙門氏菌,對畜禽生產(chǎn)、人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。本研究擬篩選合適的材料包埋具有抗菌活性的乳酸菌制備微生態(tài)制劑,并對其防治空腸彎曲桿菌和沙門氏菌的效果進(jìn)行研究。本研究通過篩選合適的材料包埋活性乳酸菌,采用冷凍干燥方法制備禽類微生態(tài)制劑,最佳保護(hù)劑確定為:可溶性淀粉100g/L、脫脂奶粉30g/L和玉米淀粉20g/L。得到的微生態(tài)制劑凍干后活菌數(shù)高達(dá)2.33×1010cfu/pb左右,具有胃酸耐受性強、腸溶釋放性高、不易受潮的特點,在-20℃和4℃條件下能長期保存,常溫下(25~30℃)能保存30天左右。為檢測動物空腸彎曲桿菌和沙門氏菌的排放量,本研究建立了空腸彎曲桿菌和沙門氏菌Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立結(jié)果為:空腸彎曲桿菌重組質(zhì)粒拷貝數(shù)(Copynumber)與循環(huán)閾值(Ct)之間的線性關(guān)系曲線表達(dá)式為:Ct=-3.52x+47.92,相關(guān)系數(shù)為R2=0.996。沙門氏菌重組質(zhì)�？截悢�(shù)(Copynumber)與循環(huán)閾值(Ct)之間的線性關(guān)系曲線表達(dá)式為:Ct=-3.43x+43.2,相關(guān)系數(shù)為:R2=0.994。以上兩種標(biāo)準(zhǔn)曲線相似系數(shù)高,誤差小。為研究微生態(tài)制劑對雞免疫功能的影響,本研究在實驗組基礎(chǔ)日糧中添加1.0%微生態(tài)制劑,對照組不作處理,試驗期間檢測各組試驗雞的生長性能、腸道黏膜和免疫性能。結(jié)果表明:實驗組平均體重比對照組提高了9%(P㩳0.05);25日齡,實驗組法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)較對照組分別提高了10.44%、36.56%(P㩳0.05),35日齡,實驗組法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)分別提高了40.12%和19.30%,差異顯著(P㩳0.05),實驗組的小腸腸壁與腸黏膜較厚,腸絨毛較長較粗,排列較整齊。以上結(jié)果表明微生態(tài)制劑對雛雞具有增加體重,提高免疫力和促進(jìn)腸道生長發(fā)育的作用。為研究微生態(tài)制劑防治腸道疾病的功能,本研究將動物分為防治組、對照組、攻毒組和治療組。結(jié)果表明:11日齡攻毒空腸彎曲桿菌ZC8后,29日齡防治組的平均體重比對照組、攻毒組和治療組分別高出30.83g、78.57g和14.39g,治療組比攻毒組高64.18g;防治組的空腸彎曲桿菌的排放量呈下降趨勢,攻毒組的排放量呈先下降后上升的趨勢,治療組在接受微生態(tài)制劑治療后,排放量呈下降趨勢。19日齡攻毒鼠傷寒沙門氏菌CMCC50115后,相對于對照組,防治組29日齡平均體重降低了9.0g(P0.05),而相對于攻毒組,則提高了176.2g(P0.01);防治組沙門氏菌排放量呈下降趨勢,而攻毒組則相反,沙門氏菌排放量呈上升趨勢,28日齡時排放量達(dá)到1.64×105cfu/g(P0.01),治療組在接受微生態(tài)制劑治療后,沙門氏菌排放量有所減少。以上試驗結(jié)果說明制備的微生態(tài)制劑對禽類空腸彎曲桿菌病和鼠傷寒沙門氏菌病具有明顯的防治作用,具有增加體重,調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的功能。
【關(guān)鍵詞】：微生態(tài)制劑 生長性能 空腸彎曲桿菌 沙門氏菌 Real-time PCR
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.5
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-11
• 前言11-26
• 1 微生態(tài)制劑的研究進(jìn)展11-18
• 1.1 微生態(tài)制劑的定義與分類11-14
• 1.1.1 益生素11-12
• 1.1.2 益生元12-13
• 1.1.3 合生元13-14
• 1.2 微生態(tài)制劑的作用機制14-16
• 1.2.1 過氧化氫14
• 1.2.2 細(xì)菌素14-15
• 1.2.3 有機酸類15
• 1.2.4 營養(yǎng)物質(zhì)和消化酶類15-16
• 1.2.5 益生菌16
• 1.3 動物微生態(tài)制劑在養(yǎng)殖業(yè)上的應(yīng)用16-18
• 2 動物微生態(tài)制劑的制備方法18-22
• 2.1 常用的保護(hù)劑18-19
• 2.2 常用的制備方法19-22
• 2.2.1 冷凍干燥技術(shù)19-20
• 2.2.2 噴霧干燥技術(shù)20-22
• 3 動物腸道微生物菌群的檢測方法22-25
• 3.1 傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法22
• 3.2 基于分子雜交技術(shù)的分子標(biāo)記法22-24
• 3.2.1 熒光原位雜交法22-23
• 3.2.2 實時熒光定量PCR法23
• 3.2.3 基因芯片技術(shù)法23-24
• 3.3 基于DNA指紋圖譜的分析方法24-25
• 4.本研究的目的和意義25-26
• 第一章 禽用微生態(tài)制劑的制備26-38
• 1 試驗材料26-27
• 1.1 菌種26
• 1.2 培養(yǎng)基26
• 1.3 儀器與試劑26-27
• 2 試驗方法27-30
• 2.1 技術(shù)路線27
• 2.2 基礎(chǔ)保護(hù)劑的篩選27-28
• 2.3 最佳復(fù)合保護(hù)劑的篩選28-29
• 2.3.1 乳酸菌的復(fù)蘇與培養(yǎng)28
• 2.3.2 復(fù)合保護(hù)劑菌粉的制備28-29
• 2.3.3 不同復(fù)合保護(hù)劑的胃酸耐受性試驗29
• 2.3.4 不同復(fù)合保護(hù)劑的腸溶釋放性試驗29
• 2.3.5 不同復(fù)合保護(hù)劑的吸潮性試驗29
• 2.4 微生態(tài)制劑的保存期檢測29
• 2.5 統(tǒng)計分析29-30
• 3 結(jié)果與分析30-36
• 3.1 基礎(chǔ)保護(hù)劑對乳酸菌冷凍干燥存活率的影響30-31
• 3.2 最佳復(fù)合保護(hù)劑的篩選結(jié)果31-35
• 3.2.1 基礎(chǔ)保護(hù)劑和輔助保護(hù)劑的組合31
• 3.2.2 不同復(fù)合保護(hù)劑對乳酸菌冷凍干燥存活量的影響31-32
• 3.2.3 不同復(fù)合保護(hù)劑在模擬胃液中對乳酸菌的保護(hù)效果32-33
• 3.2.4 不同復(fù)合保護(hù)劑中乳酸菌在模擬腸液中釋放性的比較結(jié)果33-34
• 3.2.5 不同復(fù)合保護(hù)劑的吸潮性34
• 3.2.6 最佳復(fù)合保護(hù)劑的確定34-35
• 3.3 微生態(tài)制劑的形態(tài)外觀35
• 3.4 微生態(tài)制劑在不同溫度下的保存期35-36
• 4 討論36-38
• 第二章 禽類微生態(tài)制劑功能研究38-60
• 1 材料38-40
• 1.1 微生態(tài)制劑及菌種38
• 1.2 實驗動物及飼料38
• 1.3 培養(yǎng)基及試劑38-39
• 1.4 儀器及設(shè)備39-40
• 2 方法40-45
• 2.1 微生態(tài)制劑對雞免疫功能及生長性能的影響40-41
• 2.1.1 生長性能的測定40
• 2.1.2 免疫器官指數(shù)的檢測40
• 2.1.3 腸道黏膜形態(tài)的檢測40-41
• 2.2 空腸彎曲桿菌和沙門氏菌Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立41-43
• 2.2.1 定量PCR引物41
• 2.2.2 細(xì)菌的復(fù)蘇及培養(yǎng)41
• 2.2.3 細(xì)菌DNA模板的制備41
• 2.2.4 細(xì)菌DNA的擴增及純化41-42
• 2.2.5 陽性重組質(zhì)粒的制備42
• 2.2.6 Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立42-43
• 2.3 微生態(tài)制劑對雞空腸彎曲桿菌病和沙門氏菌病的防治效果43-44
• 2.3.1 空腸彎曲桿菌動物實驗方案43
• 2.3.2 鼠傷寒沙門氏菌動物實驗方案43-44
• 2.3.3 動物糞便微生物DNA的抽提44
• 2.3.4 動物排放量的檢測44
• 2.4 統(tǒng)計分析44-45
• 3 結(jié)果與分析45-55
• 3.1 微生態(tài)制劑對雞免疫功能及生長性能的影響45-48
• 3.1.1 微生態(tài)制劑對雞體重的影響45
• 3.1.2 微生態(tài)制劑對雞免疫器官的影響45-47
• 3.1.3 微生態(tài)制劑對雞腸道生長發(fā)育的影響47-48
• 3.2 空腸彎曲桿菌和沙門氏菌Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立48-51
• 3.2.1 Real-time PCR最佳反應(yīng)體系及程序的確定48-49
• 3.2.2 Real-time PCR引物特異性49-50
• 3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和直線回歸方程的確定50-51
• 3.3 微生態(tài)制劑對禽類空腸彎曲桿菌病和沙門氏菌病的防治效果51-55
• 3.3.1 微生態(tài)制劑對空腸彎曲桿菌試驗組動物體重的影響51-52
• 3.3.2 微生態(tài)制劑對空腸彎曲桿菌排放量的影響52-53
• 3.3.3 空腸彎曲桿試驗組各組動物臨床狀態(tài)觀察結(jié)果53
• 3.3.4 微生態(tài)制劑對沙門氏菌試驗組動物體重的影響53-54
• 3.3.5 微生態(tài)制劑對沙門氏菌排放量的影響54-55
• 3.3.6 沙門氏菌試驗組各組動物臨床狀態(tài)觀察結(jié)果55
• 4 討論55-60
• 4.1 微生態(tài)制劑對雞免疫功能及生長性能的影響55-57
• 4.2 空腸彎曲桿菌和沙門氏菌Real-time PCR檢測57
• 4.3 微生態(tài)制劑防治禽類空腸彎曲桿菌病和沙門氏菌病57-60
• 全文總結(jié)60-61
• 致謝61-62
• 參考文獻(xiàn)62-67

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：598151