本文關鍵詞：高產(chǎn)GABA乳酸菌的篩選應用及包被GABA瘤胃穩(wěn)定性研究和對延邊黃牛血液相關指標的影響

  更多相關文章： 乳酸菌 γ-氨基丁酸 米糠 谷氨酸脫羧酶 延邊黃牛

【摘要】：γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GAB A)是生物體內谷氨酸在谷氨酸脫羧酶(Glutamate decarboxylase, GAD)的作用下進行脫羧,形成的一種廣泛存在于自然界,具有抑制神經(jīng)傳遞的非蛋白質氨基酸。GABA參與體內多種代謝活動,對動物具有抗應激、調節(jié)激素分泌、改善胴體品質、提高繁殖性能等作用。乳酸菌是含有GAD的一種國際公認的有益菌,利用乳酸菌和其GAD進行GABA的富集是生產(chǎn)中的一個重要途徑,本試驗主要研究篩選具有高產(chǎn)GABA能力的乳酸菌,將其GAD應用于畜牧業(yè)飼料添加劑GABA的生產(chǎn),并運用GABA到延邊黃牛中,為乳酸菌的應用和GAD運用于飼料添加劑GABA的生產(chǎn)同時為GABA在延邊黃牛中的應用提供理論依據(jù)。本論文主要包括以下幾方面的研究。1.高產(chǎn)Y-氨基丁酸乳酸菌的分離篩選及初步鑒定本章利用梯度稀釋法和紙層析法從辣白菜、酸菜、酸奶中分離篩選出具有GABA合成能力的乳酸菌,利用高效液相色譜(HPLC)法對乳酸菌發(fā)酵液中GABA的含量進行測定,并對具有較高合成GABA能力的乳酸菌進行初步鑒定,結果發(fā)現(xiàn)從酸菜分離篩選的乳酸菌B1產(chǎn)GABA量最高,可達3.121g/L2.高產(chǎn)GABA乳酸菌發(fā)酵米糠生產(chǎn)Y-氨基丁酸的條件優(yōu)化研究利用乳酸菌發(fā)酵廉價農(nóng)副產(chǎn)品米糠,研究單因素發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、菌液添加量、磷酸吡哆醛(PLP)濃度、氯化鈣(Cacl2)濃度對米糠發(fā)酵液中GABA含量的影響。在單因素試驗的基礎上采用正交分析法對發(fā)酵米糠條件進行優(yōu)化,確定乳酸菌發(fā)酵米糠富集GABA的最優(yōu)條件為發(fā)酵溶液中PLP濃度為0.10mmol/L Cacl2濃度為1.5mmol/L,菌液添加量為3.5%(V/V),發(fā)酵時間為24h時,米糠發(fā)酵液中GABA含量可達335mg/100g。3.谷氨酸脫羧酶酶學性質研究及在飼料添加劑中的應用以乳酸菌B1為研究菌種,研究溫度、pH、磷酸吡哆醛、金屬離子等與GAD活性的關系以及乳酸菌B1的Vmax和Km值,確定GAD活性最大時所需要的溫度、pH等,然后利用GAD和L-谷氨酸的脫羧反應生成GABA來進行飼料添加劑GABA的生產(chǎn),結果得出乳酸菌B1的GAD最適溫度為40℃,在30-50℃范圍內穩(wěn)定性良好；最適pH為4.5,pH在3.5-5.5時穩(wěn)定性良好；PLP和VB6濃度為0.05mmol/L時,酶活力最大；Ca2+、Mg2+、Mn2+對酶活有激活作用,SDS、I-、Ag+、Cl-、CH3COOH、EDTA對酶活有抑制作用；對底物的Km=0.0601mmol/L Vmax=1.98μmol/min;利用GAD的酶學性質進行飼料添加劑GABA的制備,試驗可行性強,GABA的含量可達8.96%(w/w)。4.γ-氨基丁酸的穩(wěn)定性研究及對延邊黃牛整腸消化率、內分泌激素、免疫指標、抗氧化能力和血常規(guī)的影響4.1包被GABA的過瘤胃特性研究主要對兩種不同材料包被的GABA進行體內瘤胃降解率試驗和體外瘤胃后釋放試驗,發(fā)現(xiàn)它們在瘤胃中的降解率在24h的時候分別為20.97%和24.91%,瘤胃后釋放率在12h的時候均達到90%以上,綜合比較,表明用棕櫚酸包被制成的GABA更適合運用于延邊黃牛。4.2γ-氨基丁酸對延邊黃牛整腸消化率、內分泌激素、免疫指標、抗氧化能力和血常規(guī)的影響在延邊黃�；A日糧中添加包被GABA,結果表明GABA對延邊黃牛整腸消化率沒有影響。與對照組相比,對于皮質醇(COR),試驗組Ⅰ顯著降低了其濃度(P0.05)；試驗組Ⅱ極顯著降低了其濃度(P0.01),試驗組Ⅱ顯著小于試驗組Ⅰ(P0.05)。對于促腎上腺皮質激素(ACTH),試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ都顯著降低了其濃度(P0.05)；對于免疫指標,試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ都極顯著增加了lg A和lg G的濃度(P0.01),但對lg M的濃度無顯著影響(P0.05)；試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ都顯著增加了IL-2的濃度(P0.05)；對于抗氧化指標,試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ都可以顯著降低MDA的濃度(P0.05),極顯著增加GSH-Px的活性(P0.01),試驗組Ⅱ顯著大于試驗組Ⅰ的活性(P0.05),對SOD活性的影響不顯著(P0.05)；對于血常規(guī),試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ都可以顯著增加平均紅細胞體積(P0.05),極顯著增加血小板的數(shù)量(P0.01),試驗組Ⅱ顯著大于試驗組Ⅰ(P0.05)。在本試驗中,適宜添加量為55g/d/head。
【關鍵詞】：乳酸菌 γ-氨基丁酸 米糠 谷氨酸脫羧酶 延邊黃牛
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-15
• 第一章 前言15-25
• 1.1 氨基丁酸(GABA)的簡介15
• 1.1.1 GABA的發(fā)現(xiàn)15
• 1.1.2 GABA的結構15
• 1.2 GABA對動物的作用15-17
• 1.2.1 提高動物采食量15-16
• 1.2.2 增強動物的免疫功能16
• 1.2.3 提高動物抗缺氧能力16
• 1.2.4 提高動物抗熱應激的能力16-17
• 1.3 GABA在畜牧業(yè)中的應用17
• 1.4 GABA的合成方法17-19
• 1.4.1 化學合成法17-18
• 1.4.2 植物富集法18
• 1.4.3 微生物發(fā)酵法18-19
• 1.5 微生物合成GABA的代謝途徑及影響因素19-21
• 1.5.1 微生物合成GABA的代謝途徑19
• 1.5.2 影響微生物合成GABA的因素19-21
• 1.6 分離的乳酸菌合成GABA研究概況21-22
• 1.6.1 國內外分離乳酸菌合成GABA研究狀況21
• 1.6.2 對產(chǎn)GABA乳酸菌發(fā)酵條件優(yōu)化的研究21-22
• 1.7 乳酸菌谷氨酸脫羧酶研究進展22-23
• 1.7.1 GAD的結構簡介22-23
• 1.7.2 谷氨酸脫羧酶學性質研究23
• 1.8 立題目意義23-24
• 1.9 研究目的與內容24-25
• 第二章 高產(chǎn)γ-氨基丁酸乳酸菌的分離篩選及初步鑒定25-33
• 2.1 材料與方法25-27
• 2.1.1 試驗材料及藥品25
• 2.1.2 培養(yǎng)基25
• 2.1.3 試驗儀器25-26
• 2.1.4 試驗方法26-27
• 2.2 結果與討論27-31
• 2.2.1 分離菌種的初步鑒定27-28
• 2.2.2 產(chǎn)γ-氨基丁酸乳酸菌的篩選結果28-31
• 2.2.3 高產(chǎn)GABA乳酸菌的初步鑒定31
• 2.3 本章小結31-33
• 第三章 高產(chǎn)GABA乳酸菌發(fā)酵米糠生產(chǎn)γ-氨基丁酸的條件優(yōu)化研究33-43
• 3.1 材料與方法33-36
• 3.1.1 材料與試劑33
• 3.1.2 試驗儀器33
• 3.1.3 菌種與培養(yǎng)基33-34
• 3.1.4 乳酸菌傳代、活化34
• 3.1.5 GABA含量的測定34
• 3.1.6 發(fā)酵條件的優(yōu)化34-36
• 3.2 結果與討論36-41
• 3.2.1 標準曲線36-37
• 3.2.2 發(fā)酵溫度的影響37-38
• 3.2.3 發(fā)酵時間的影響38
• 3.2.4 菌液添加量的影響38-39
• 3.2.5 PLP的影響39-40
• 3.2.6 氯化鈣的影響40
• 3.2.7 正交試驗結果40-41
• 3.2.8 驗證試驗結果41
• 3.3 本章小結41-43
• 第四章 乳酸菌酶學性質的研究及富含GABA飼料添加劑的制作43-52
• 4.1 材料與方法43-46
• 4.1.1 材料與試劑43
• 4.1.2 試驗儀器43
• 4.1.3 試驗方法43-46
• 4.2 結果與討論46-51
• 4.2.1 溫度對酶活力的影響46-47
• 4.2.2 酶的耐熱性47
• 4.2.3 pH對酶活力的影響以及酶的耐pH47-48
• 4.2.4 PLP和VB_6對酶活力的影響48-49
• 4.2.5 不同金屬離子和化學物質對酶活力的影響49
• 4.2.6 乳酸菌動力學常數(shù)測定49-50
• 4.2.7 含GABA添加劑的制作50-51
• 4.3 本章小結51-52
• 第五章 γ-氨基丁酸的穩(wěn)定性研究及對延邊黃牛整腸消化率、內分泌激素、免疫指標、抗氧化能力和血常規(guī)的影響52-69
• 第一節(jié) 包被GABA的過瘤胃特性研究53-58
• 1.1 材料與方法53-55
• 1.1.1 試驗材料53
• 1.1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理53-54
• 1.1.3 試驗設計54
• 1.1.4 指標測定及方法54-55
• 1.2 結果與分析55-56
• 1.2.1 γ-氨基丁酸在延邊黃牛瘤胃中的降解率55-56
• 1.2.2 包被γ-氨基丁酸在瘤胃后的釋放率56
• 1.3 討論56-57
• 1.4 小結57-58
• 第二節(jié) γ-氨基丁酸對延邊黃牛整腸消化率、內分泌激素、免疫指標、抗氧化能力和血常規(guī)的影響58-69
• 2.1 材料與方法58-59
• 2.1.1 試驗材料58
• 2.1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理58
• 2.1.3 試驗設計58-59
• 2.1.4 指標測定及方法59
• 2.2 結果與分析59-65
• 2.2.1 包被GABA對延邊黃牛整腸消化率的影響59-60
• 2.2.2 日糧中添加GABA對延邊黃牛血液生化指標的影響60-65
• 2.3 討論與小結65-69
• 2.3.1 討論65-68
• 2.3.2 小結68-69
• 第六章 結論與展望69-71
• 6.1 結論69
• 6.2 展望69-71
• 參考文獻71-81
• 致謝81

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